INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
“DR. GUILLERMO CARVAJAL SANDOVAL”
BIOQUÍMICA GENERAL
GRUPO: 3FM01 SECCIÓN: 4
AUTORES: ALEJANDRA CABEZA; JOCELYN MERCADO.
AISLAMIENTO DE DNA DE ORIGEN VEGETAL Y SU CARACTERIZACIÓN ESPECTROFOTÓMETRICA. (AISLAMIENTO DE DNA DE
CHICHARO); IDENTIFICACIÓN DE BASES PÚRICAS Y PIRIMÍDICAS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA.

Introducción.
El ácido desoxirribonucleico (DNA por sus siglas en inglés) fue aislado por primera vez en 1869 por Miescher, desde entonces ha sido objeto de
múltiples investigaciones, es un biopolímero, que por diversos estudios fisicoquímicos ha demostrado su elevado peso molecular, en donde las
unidades que se repiten son nucleótidos unidos por enlaces fosfodiester. Los nucleótidos presentan una pentosa, un grupo fosfato y una base
nitrogenada cuya naturaleza es responsable del código genético. Existen dos tipos de ácidos nucleicos: el ácido ribonucleico (RNA) y el ácido
desoxirribonucleico (DNA) La principal diferencia entre ambos es la pentosa que es la ribosa en el caso del RNA y desoxirribosa en DNA. Almacena
información genética y sirve de molde para la síntesis de proteínas; Los ácidos nucleicos se encuentran en su mayoría constituyendo
nucleoproteínas, complejos formados por proteínas básicas (protaminas e histamina). Se encuentra mayoritariamente en el núcleo y en muy poca
cantidad en mitocondria y cloroplastos. El RNA participa en la síntesis de proteínas, puede presentar función enzimática y se distribuye en toda la
célula, mayormente en citoplasma en forma soluble o formando parte de los ribosomas

Objetivos.
 Aislar DNA de origen vegetal (Chícharo)
 Purificar DNA de chícharo.
𝐴260 𝐴260
 Caracterizar DNA de chícharo. 𝑃𝑢𝑟𝑒𝑧𝑎 = 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 =
22500
(𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛)
𝐴280

Resultados. 2.02
2.02 𝐶= (8)
22500
Tabla 1. Resultados de la espectrofotometría. 𝑃𝑢𝑟𝑒𝑧𝑎 =
1.05
7.18𝑋10−4 𝑔
LONGITUD DE 𝐶=
𝑚𝐿
𝑃𝑢𝑟𝑒𝑧𝑎 = 1.92
ONDA (nm) ABSORBANCIA

200 1.11 Discusión.

205 1.5 Para la realización de la práctica se empleó como muestra chícharo,
210 1.72 ya que este vegetal no presenta una coloración tan intensa la cual
215 1.80 resulta favorable para la visualización de los resultados. Fue
220 1.82 necesario triturar la muestra en presencia de Tris/ EDTA/NaCl, esto
225 1.71 para homogenizar la muestra, el EDTA es un agente quelante y sirve
230 1.49 para proteger al DNA de las DNASAS ya que captura el ión divalente
235 1.41 Mg2+ , el tris es una solución reguladora de pH de 7.5 el cual mantiene
240 1.49 las condiciones para el experimento, y finalmente el NaCl se adiciona
245 1.65 para realizar la precipitación de proteínas y purificar la muestra,
250 1.87 también se añadió la enzima amilasa esto propicio la ruptura del
255 1.89
enlace α(1-4) del almidón contenido en la muestra esto para
260 2.02
fragmentar las ramificaciones. Asimismo se añadió solución saturada
265 1.72
270 1.52
de NaCl para lisar la célula induciendo la ruptura de la membrana
275 1.31 plasmática y así con la adición de SDS (dodecilsulfato sódico) se
280 1.05 disuelve dicha membrana, posteriormente el filtrado se recolecta
285 0.67 para así al adicionar la mezcla de cloroformo:alcohol isoamilico para
290 056 precipitar las proteínas restantes en la muestra por medio de su
300 0.30 constante dieléctrica, después mediante una centrifugación se
*Se anexa Grafica y resultados del espectrofotómetro obtiene la generación de 3 fases en el medio, una de ellas es colorada
ya que en ella esta contenidos los licopenos lo cuales brindan el color
Imagen 1. Resultados de la cromatografía en capa fina. al vegetal, la segunda fase se visualiza como una pastilla en la cual se
tiene contenido las proteínas e impurezas de la muestra y finalmente
la tercer fase es el sobrenadante en el cual se tiene contenido DNA
perteneciente al chícharo y un mínimo de impurezas, sin embargo
solo se está interesado en la obtención de DNA por lo tanto es
necesario verter dicho sobrenadante en un recipiente que contenga
alcohol el cual debe estar frío para que el DNA libre de proteína se
deshidrate siendo este nuestro último filtro para obtener únicamente
el DNA eliminando por completo las impurezas por medio de la
constante dieléctrica, posteriormente se tuvo suspendido el DNA
este se recolecto y se dejo evaporar las trazas de alcohol para así
resuspender los ácidos nucleicos empleando la solución citrato salina
diluida, permitiendo así proceder a determinar el espectro de
absorción característico del DNA.
En lo que concierne al espectrofotómetro de luz ultra violeta, las
lecturas lograron hacerse gracias a las bases nitrogenadas del
hidrolizado están esparcidas, es decir se rompieron algunos de los
enlaces que tenían y logran absorber luz, la gráfica obtenida con una
absorbancia máxima en 260 nm como lo muestra la literatura), por
lo tanto la muestra del DNA obtenida fue purificada correctamente
ya que no se encontraba contaminada con proteínas u otras
moléculas, esto se corroboró con los cálculos determinados, donde
el valor obtenido fue cercano a 2. Con respecto a la concentración,
esta se obtuvo con un valor de 7.18X10−4 g/mL.
En el caso de la placa cromatografíca, en la parte experimental hubo
un incidente cuando esta se encontraba en la cámara
cromatografíca, lo que provoco un mal desplazamiento de nuestras
muestras, pero, se pudo reconocer en ora placa que las bases
nitrogenadas Citosina, Guanina y Adenina están presentes tanto en
el DNA como en el RNA, la base nitrogenada Uracilo solamente está
presente en el RNA, y la Timina solo está en el DNA.

Conclusiones.
 Se llevo a cabo la correcta obtención de DNA.
 Se realizó el espectro de absorbancia en luz ultra violeta del
DNA.
 Se determinaron las bases nitrogenadas que componen el
DNA y RNA por medio de una placa cromatografíca, y a su
vez la clasificación que estas tienen.

Bibliografía.
 McKee, T. (2003) “Bioquímica”. Ed. McGraw- Hill; 3era Ed.
pp. (564- 571).
 Campbell, M; Farrell, S. “Bioquímica” (2015) 7ª. Edición.
Ed. CENEGAGE Learning. México. pp (227-231).
 Lozano, A; Galindo, D (2005) “Bioquímica y biología
molecular para ciencias de la salud”. Ed McGraw-Hill. pp.
(117-124).