INFORME DE LABORATORIO DE ANÁLISIS DE ALIMENTOS

« Métodos espectroscópicos y Métodos no espectroscópicos»

PRÁCTICA DE LABORATORIO N°2

PROFESORA: ANA CELINA LANCHO RUIZ

GRUPO DE ANÁLISIS: 92G

INTEGRANTES:

 ALOMÍA PASTOR KETTY GIANELLA

 BALUARTE GONZÁLEZ VALERY ALONDRA
 BRIONES BRIONES GONZALO
 LUCHO PORTAL PABLO ALFREDO
 YARASCA CASTILLO MARGARITA

2017
 I. INTRODUCCIÓN

Las técnicas colorimétricas se basan en la medida de la absorción de radiación en la zona visible

por sustancias coloreadas. En algunas ocasiones, la muestra que deseamos determinar no posee
color por sí misma; en tal caso, es preciso llevar a cabo un desarrollo de color empleando
reactivos que den lugar a sustancias coloreadas con la muestra que interesa estudiar.
La colorimetría y fotocolorimetría no son en realidad técnicas distintas y la diferencia estriba en el
tipo de instrumental empleado, de forma que se denomina colorímetro a aquellos aparatos en los
que la longitud de onda con la que vamos a trabajar se selecciona por medio de filtros ópticos; en
los fotocolorímetros o espectrofotómetros la longitud de onda se selecciona mediante
dispositivos mono-cromadores.

El espectro de un elemento determinado es absolutamente característico de ese elemento. Sin

embargo, elementos distintos producen en ocasiones líneas que están muy juntas, lo que lleva a
posibles errores. Por tanto, la comparación del espectro completo de un elemento con un
espectro conocido simplifica su identificación.
Los espectros situados más allá de la región ultravioleta (rayos X y rayos gamma) se estudian
mediante detectores de ionización adecuados. Los espectros de estos rayos gamma sirven para
identificar cantidades minúsculas de determinados elementos químicos en la muestra. Por
ejemplo, averiguar si una muestra de sal contiene el elemento yodo.

En esta práctica usamos el Equipo fotocolorímetro Merck SQ 118, éste es un fotómetro, que
cuantifica las muestras, por radiación emitida por la lámpara halogenada; que emite radiación de
rango visible.
La cuantificación la realiza en miligramos/L, como requisito para llevar acabo la cuantificación la
muestra debe ser contener un pigmento; de ser transparente se le puede adherir un colorante
(lugol) si se desea analizar la muestra transparente sin modificar el color se necesita un fotómetro
que absorbe UV (espectrómetro).

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II. OBJETIVOS

 Determinar a partir de la ley de Lambert – Beer la absorbancia a diferentes

concentraciones de almidón.
 Determinar a qué longitud de onda se obtiene mayor absorbancia en base a una
concentración conocida de una solución de almidón.
 Determinar la concentración de una solución de almidón mediante la ley de
Lambert – Beer.
 Adquirir destreza en el manejo del Fotocolorímetro Merck SQ 118.

 Conocimiento de los procesos que tienen lugar al aplicarse el método

espectroscópico y no espectroscópico en una prueba de análisis.
 Reconocimiento de la técnica espectroscópica más adecuada de acuerdo al tipo de
aplicación determinada, y al grado de investigación deseado.
 Conocimiento de las ventajas e inconvenientes de cada una de las técnicas
aplicadas en el laboratorio.

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 III. MATERIALES Y MÉTODOS

Fotocolorímetro Merk SQ 118 Balanza electrónica Refractómetro

Almidón Soluble Lugol Néctar de durazno

Vaso precipitado Fiola

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Métodos
1. Métodos ópticos espectroscópicos:

Son aquellos en los que existe intercambio de energía entre la radiación electromagnética
y la materia. Estos son debidos a transiciones entre distintos niveles energéticos. Son los
métodos más utilizados.

Absorción

 Nivel molecular: UV – visibles, IR, microondas.

 Nivel atómico: absorción atómica, rayos X
Emisión

 Nivel molecular: fluorimetía, fosforimetría, quimioluminiscencia

 Nivel atómico: emisión atómica, ICP, fluorescencia de rayos X
En nuestra practica utilizamos el fotocolorímetro

Fotocolorímetro

El fotocolorímetro es un instrumento que tiene la particularidad de tener celdas

fotoeléctricas y un circuito potenciómetro, además consta de un foco de 110 volts, dicho
foco se encuentra dentro de una caja metálica enviando los rayos luminosos que llegan a
la solución problema se coloca en un tubo o celda de vidrio, en un soporte apropiado.
Aparato para medir la Tramitancia y absorbencia de luz de alguna sustancia, a diferentes
longitudes de onda.

2.) Métodos ópticos no espectroscópicos:

Se basan en una interacción entre radiación electromagnética y la materia que produce

como resultado un cambio en la dirección o en las propiedades físicas de la radiación
electromagnética. En estos métodos los mecanismos de interacción son la reflexión,
refracción, difracción, dispersión, interferencias, polarización o la dispersión refractiva.

No espectroscópicos

 Dispersión: turbidimetría, nefelometría

 Refracción: refractometría, interferometría
 Difracción: rayos x
 Rotación óptica: polarimetría
En nuestra práctica utilizamos el refractómetro.

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Refractómetro

Los refractómetros son instrumentos de medición, en los que éste fenómeno de la

refracción de la luz se pone en práctica. Ellos se basan en el principio por el cual, cuando
aumenta la densidad de una sustancia (por ejemplo: cuando se disuelve el azúcar en el
agua), el índice de refracción aumenta proporcionalmente.

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 IV. PROCEDIMIENTO

Método espectroscópico

Preparación de las soluciones de distintas concentraciones de almidón

 Se pesaron en una balanza analítica distintas cantidades de almidón para preparar
soluciones a concentraciones diferentes y también una muestra de maicena. (ver tabla 1)

Peso de almidón
Vaso
(gr.)

1 0 gr. Tabla 1: Cantidades de almidón pesadas

2 0,1 gr. (*) Cantidades desconocidas

3 0,2 gr.
4 0,4 gr.
5 0,5 gr.
6 X (*)
7 y (*)

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 Cada cantidad de almidón y maicena que fue pesada en un vaso precipitado de 50
mL, luego se disolvió con un 20-30 mL de agua destilada y se agregó a una fiola. Se
enjuagó el vaso precipitado para no perder ningún gramo y echarlo a la fiola.
Luego se enrazó con agua destilada hasta 100mL.

Figura 1: Soluciones a distintas concentraciones de almidón

 A cada fiola se le agrega una gota de Lugol y se mueve; de arriba abajo para que
no forme burbujas.
Fuente: Laboratorio de Análisis de Alimentos, UNAC – FIPA –
EPIA, Chucuito
Figura 2: Solución a una concentración (X2) con una gota de Lugol

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Fuente: Laboratorio de Análisis de Alimentos 1, UNAC – FIPA – EPIA, Chucuito
 Luego de agregar a cada fiola una gota de Lugol, se escogió la solución más
disuelta para hallar la Transmitancia a distintas longitudes de onda en el
fotocolorímetro.

Figura 3: (a) Solución en blanco. (b) Soluciones a concentraciones desconocidas. (c)

Soluciones a distintas concentraciones.

(a) (b)

(c)
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Fuente: Laboratorio de Análisis de Alimentos 1, UNAC – FIPA – EPIA, Chucuito

Determinación a que longitud de onda se obtiene menor Transmitancia.
Para determinar a qué longitud de onda se obtendrá menor transmitancia, se siguieron los
siguientes pasos:

 Se enciende el fotocolorímetro y se escogió el método de acuerdo a la sustancia que se

desea cuantificar; es este caso se escogió 12 métodos para medir transmitancia a
diferentes longitud de onda (desde 340 nm hasta 820 nm).
 Se ajusta el mando de selección de la longitud de onda del fotocolorímetro a 340 nm.
 Para tarar a cero se coloca una cubeta de 10 nm con la solución blanco de almidón
(estándar o patrón) dando una transmitancia de 100% o absorbancia 0.000.
 Se realiza la medición de la transmitancia de la solución de almidón más diluida a una
longitud de onda de 340 nm.
 Luego de realizar la lectura de la muestra escogida se enjuaga la cubeta con agua
destilada y se realiza la siguiente lectura.

Luego se determina a que longitud de onda se obtuvo menor transmitancia y por ende, mayor
absorbancia; aplicando la fórmula de la Ley de Lambert – Beer.

𝐴 = 2 − log %𝑇

Determinación de las concentraciones desconocidas de las soluciones de almidón

La longitud de onda donde se obtuvo mayor absorbancia fue de 820 nm, para la determinación de
las concentraciones desconocidas de las soluciones de almidón se utilizará el método de
transmitancia a una longitud de onda de 820 nm.

 Se ajusta el mando de selección de la longitud de onda del fotocolorímetro a 820 nm.

 Para tara a cero se coloca una cubeta de 10 nm con la solución blanco de almidón
(estándar o patrón) dando una transmitancia de 100% o absorbancia 0.000.
 Se realiza las mediciones de la transmitancia a las soluciones de almidón de las distintas
concentraciones, en el método seleccionado.
 Luego de realizar la lectura de la solución de almidón escogida se enjuaga la cubeta con
agua destilada y se realiza la siguiente lectura.

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Luego se determina la absorbancia de cada solución de almidón y las concentraciones
desconocidas aplicando la fórmula de la Ley de Lambert – Beer.

𝐴 = 2 − log %𝑇

𝐴
𝐴=𝑎×𝑏×𝑐 𝑐=
𝑎×𝑏

Figura 4: Llenado de la solución de almidón en la cubeta del Fotocolorímetro.

Figura 5:Laboratorio
Fuente: Lectura de de
la Transmitancia en el Fotocolorímetro
Análisis de Alimentos, UNAC – FIPA –Merck SQ 118
EPIA, Chucuito.

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Fuente: Laboratorio de Análisis de Alimentos, UNAC – FIPA – EPIA, Chucuito.
Método no espectroscópico

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 V. RESULTADOS

Curva Espectral (Curva Cualitativa)

𝝀𝒏𝒎 Tramitancia Absorbancia

(%T) (𝑨 = 𝟐 − 𝐥𝐨𝐠 %𝑻)
340 nm 94,9% 0.0227
405 nm 91,5% 0.0385
La Curva espectral sirve para
446 nm 85,5% 0.0680
identificar el analito en que
495 nm 85,0% 0.0705
longitud de onda absorbe
525 nm 81,4% 0.0893
mayor cantidad de intensidad
550 nm 81,3% 0.0899
de luz.
565 nm 82,9% 0.0814
585 nm 82,3% 0.0846
635 nm 81,7% 0.0877
660 nm 80,7% 0.0931
690 nm 78,9% 0.1029
820 nm 85,6% 0.0675

Curva Estándar (Curva Cuantitativa)

Concentración Tramitancia Absorbancia

(g/Lt) (%T) (𝑨 = 𝟐 − 𝐥𝐨𝐠 %𝑻)

0,1 g/Lt 82,9% 0.081

0,2 g/Lt 64,7% 0.189
0,4 g/Lt 45,6% 0.341
0,5 g/Lt 30,4% 0.517
X(almidón)g/Lt 35,5% 0.449
Y(maicena)g/Lt 2,9% 1.5

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 0.12 Gráfico 1: Curva Espectral

0.1

0.08
Absorvancia

0.06

0.04

0.02

0
300 350 400 450 500 550 𝝀 nm 600 650 700 750 800 850

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 Gráfica 2: Curva Estándar
0.6

0.5

0.4
Absorbancia

0.3

0.2

0.1

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5

concentración (g/Lt)
Concentración vs. Absorbancia
Linear (Concentración vs. Absorbancia)

Grados Brix:

Refractómetro Temperatura
Néctar 11.1 20°C
Sacarosa 9.9 ± 1% 19°C

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 VI. DISCUSIONES

• Según (Cano Calle H. 2013); La habilidad para medir la absorbancia a diferentes

longitudes de onda es muy útil porque el coeficiente de extinción varía al variar la
longitud de onda. En nuestros resultados se obtuvieron diversas absorbancia a diferentes
longitudes de onda.

• Según (Koolman, J. y K.H Röhm. 2004); El método fotocolorímetro es el método

óptimo de absorción molecular que nos permite cuantificar sustancias y está basado en la
medida de la intensidad de la luz monocromática, transmitida a través de soluciones
coloreadas, sean que se trata de sustancias naturalmente coloreadas o que se han hecho
de tal calidad mediante reacciones químicas adecuadas.

En nuestro caso todas las soluciones de almidón como eran diáfanas se colorearon con
una gota de lugol.

• Según (Murray, R. K. et. Al. 2005); Las soluciones se leen en una escala expresada
en unidades logarítmicas que van del 0.000 al 2.000, al cero corresponde al 100% de
transmitancia es decir a una absorción igual a cero y al 2.000 corresponde a una
absorción del 100% y no se transmite luz. En nuestros resultados (Curva Estándar) a
menor porcentaje de transmitancia mayor absorbancia.

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VII. CONCLUSIONES

 Finalizando la prueba se observó el funcionamiento y requerimientos de cada

método en donde el método espectroscópico nos dio diferentes mediciones
dependiendo del tipo de longitud de onda ajustable la cual nos diseñó la curva
espectral de barrido y se pudo encontrar la longitud de onda que más se adecuo
los resultados.
 En el método no espectroscópico se pudo encontrar con mayor facilidad la
concentración de azucares en la muestra pero se tuvo que tener cuidado ya que
esta puede variar dependiendo de la temperatura en la que se encuentre la
muestra, requiriendo un ajuste para encontrar la concentración real de la
muestra. Pero como la temperatura ambiente fue cercana de 20 grados, este
ajuste no fue necesario.

 Se concluye que la teoría de (Koolman, J. y K.H Röhm. 2004) se afirma porque, en

todas nuestras soluciones de almidón se agregó una gota de Lugol para colorearla
y así medir la intensidad de luz que absorbe cada solución. Al agregar el lugol la
solución se coloreara según él % de amilopectina o amilosa en el almidón.

 Se concluye que la teoría de (Cano Calle H. 2013) se afirma porque, los valores de
absorbancia(0.0227,0.0385,0.0680,0.0705,0.0893,0.0899,0.0814,0.0846,0.0877,0.
0931,0.1029,0.0675) a diferentes longitudes de onda (340nm, 405nm, 446nm,
495nm, 525nm, 550nm, 565nm, 585nm, 635nm, 660nm, 690nm y 820nm
respectivamente); varían según como varia el otro.

 Se concluye que la teoría de (Murray, R. K. et. Al. 2005) se afirma porque, según
nuestros resultados obtenidos en la tabla de la curva estándar: soluciones de
almidón a concentración (0,1 g/Lt,0,2 g/Lt,0,4 g/Lt,0,5 g/Lt,0.45 de X y 0,45 de Y)
dieron una lectura de transmitancia (82,9%,64,7%,45,6%,30,4%,35,5%,2,9%) y
aplicando la ley de Lambert – Beer se determinó la absorbancia
(0.081,0.189,0.341,0.517,0.449,1.5) respectivamente; se afirma que a menor
porcentaje de transmitancia mayor será la absorbancia.

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VIII. RECOMENDACIONES

 Es recomendable saber el uso del Fotocolorímetro Merck SQ 118 y el uso correcto

del refractómetro.

 Se recomienda que en cada lectura para medir la transmitancia en el

Fotocolorímetro de cada solución de almidón enjuagar la cubeta máximo 4 veces
con la muestra siguiente a analiza ya que puede haber error en la lectura.

 Es muy recomendable trabajar en el laboratorio en silencio para no distraer a

diversas mesas para que no vayan cometer errores.

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IX. BIBLIOGRAFÍA

 Skoog, D. A., Holler, F., DonalD, M. D. A., & Donald, M. W. (1995). Química
analítica. McGraw-Hill Interamericana.
 Cano Calle H., Universidad Industrial De Santander Facultad De Ciencias, 2013,
Manual Prácticas De Laboratorio De Bioquímica.
 Koolman, J. y K.H Röhm. Biochemistry, 2004.
 Murray, R. K. et. Al. BIOQUIMICA DE HARPER (16ª ED.) ,2005.
 NIELSEN S. (ed); Food Analysis Laboratory Manual; Kluwer Academic/Plenum
Publishers, Nueva York, 2003.
 KIRK R. S., Sawyer R; Egan, H. Composición y análisis de alimentos de Pearson,
segunda edición; Compañía editorial continental SA de CV, México, 1996.

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