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EXTRACCIÓN DEL DNA

INTRODUCCIÓN

En el proceso de comprensión del DNA y sus complicadas funciones, transcurren 199


años desde que Hooke descubre la célula y Mendel describe las leyes de la herencia, y
sólo 45 años más para que Tschemark, De Vries y Correns redescubran dichas leyes y se
reconozca su revolucionario significado.

Hacia 1953, Watson, Crick y Wilkins postularon la estructura en doble cadena del
material hereditario (DNA), donde se almacena la información genética; según así, se
conoce que el 90% del DNA está concentrado en el núcleo, correspondiendo el resto al
DNA mitocondrial.

El DNA nuclear es una doble cadena de desoxirribosa, fósforo y bases nitrogenadas,


purinas (adenina, guanina) y pirimidinas (citosina, timina), apareadas en forma de
escalera (A-T y G-C), con una orientación eléctrica antiparalela 5’-3’ y 3’-5’ originada en
los enlaces de los carbonos de la desoxirribosa con el fósforo. La unión AT es de dos
enlaces químicos, mientras que la unión C-G es de tres, lo que confiere al DNA diferentes
propiedades citogenéticas. Además, dada la naturaleza complementaria de las dos
cadenas de DNA, el conocimiento de la secuencia de las bases de nucleótidos existentes
en una de las cadenas permite automáticamente la determinación de la secuencia de
las bases existentes en la otra cadena, lo que permite llevar a cabo una replicación
precisa mediante la separación de las dos cadenas, seguida por la síntesis de dos nuevas
cadenas complementarias, según la secuencia de las cadenas originales que actúan
como una plantilla, lo que permite asimismo, siempre que sea necesario, la reparación
eficiente y correcta de las moléculas de DNA que hayan sufrido alteraciones. De esta
forma, el genoma humano, compuesto por estas cadenas de polinucleótidos, cuenta con
un tamaño que oscila entre aproximadamente 50 (el cromosoma más pequeño, el 21) y
250 millones de pares de bases (el cromosoma más grande, el 1), que contienen en su
estructura la información genética necesaria para especificar todos los aspectos de la
embriogénesis, el desarrollo, el crecimiento, el metabolismo y la reproducción:
esencialmente, todos los aspectos que hacen que un ser humano sea un organismo
funcional.

De esta manera, con el fin del estudio de esta molécula, tanto la extracción como la
purificación del DNA son los primeros pasos en el análisis y la manipulación del mismo,
lo que permite a los investigadores detectar desordenes genéticos, producir huellas
digitales de DNA de individuos, e incluso crear organismos genéticamente modificados
que puedan producir productos beneficiosos tales como la insulina, los antibióticos y las
hormonas, por mencionar algunos. Por tanto, al ser el DNA un componente vital de los
organismos vivos podrá ser extraído de muchos tipos de células, proceso que comenzará

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con la lisis celular mediada por centrifugación, así una vez que las células se han roto, se
añade una solución salina, tal como el NaCl y una solución detergente, que presentan
componentes SDS (Sulfato de Sodiododecilo), las cuales rompen y emulsifican a las
grasas y a las proteínas, que forman la membrana celular. Finalmente, se agrega etanol,
debido a que el DNA es soluble al agua, que causa precipitación en el DNA o la
decantación de la solución, dejando atrás todos los componentes celulares que no son
solubles en alcohol. Así, el aislamiento de la célula ya sea mediante el uso de
instrumentos de laboratorio complejos o de materiales de la vida cotidiana, permite el
análisis del material nuclear obtenido mediante la realización de este procedimiento.

OBJETIVO GENERAL

 Extracción del DNA de tejido vegetal y animal.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

 Establecer las propiedades básicas del DNA.


 Preparar los tejidos vegetal y animal para su extracción.
 Identificar la estructura fibrilar del DNA macro y microscópicamente.
 Describir la importancia del DNA como unidad vital de los seres vivos.
 Explicar la utilización de la extracción del DNA dentro del campo médico.

MATERIALES Y REACTIVOS

Hígado de pollo Licuadora

Saliva Coladores

Detergente líquido Vasos de precipitado

Sal Tubos de ensaye

Bicarbonato de Sodio Recipientes de vidrio

Agua destilada Portaobjetos/Cubreobjetos

Alcohol Microscopio

PROCEDIMIENTO

Saliva

Se comenzó enjuagando la boca del compañero que proporcionaría la saliva para la


realización de esta práctica. Con el apoyo de un abatelenguas se procedió a raspar las

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paredes internas de las mejillas con el objetivo de desprender las células epiteliales de
estas, depositando así la saliva en un vaso de precipitado.

Una vez obtenidos aproximadamente 5 ml de saliva, se agregaron 5 ml de detergente


líquido, y con la ayuda de un agitador de vidrio se revolvió la mezcla sin provocar
espuma, dejando reposar de 5 a 10 minutos.

Se inclinó el tubo de ensayo, que contenía los 5 ml de la solución, vertiendo lentamente


el alcohol por su cara interna, a una proporción equivalente a la de la mezcla. El alcohol
quedó así flotando sobre la mezcla.

Se dejó reposar durante 5 minutos más hasta que se formó una capa turbia entre las dos
capas. A continuación, se observaron unos filamentos blancos dentro del alcohol, los
cuales se retiraron mediante la ayuda de un aplicador de madera removiendo hacia
adelante y atrás, enrollando los fragmentos de mayor tamaño de DNA.

Hígado de pollo

Solución Tampón:

Homogeneizar

1,5 g de sal

5 g de bicarbonato sódico

120 ml de agua destilada

5 ml detergente líquido

Se cortó el hígado en trozos pequeños, se trituró en la licuadora con una taza de agua
destilada. Se filtró utilizando el colador, desechando los residuos no filtrados.

Aproximadamente 5 ml del licuado se colocaron en el tubo de ensayo, agregándose 10


ml de la solución tampón, y prosiguiendo a agitar lentamente la mezcla por al menos 5
minutos, sin provocar espuma, dejando reposar durante 5-10 minutos más.

Una vez terminado el reposo se prosiguió vertiendo 10 ml de alcohol a 5 ml de la mezcla,


para después agitar con movimientos lentos por 5 minutos, reposando de nuevo, hasta
observar en la parte del alcohol los filamentos del DNA.

Microscopía

Ya obtenido el DNA utilizando los aplicadores de madera, se depositó una gota sobre un
portaobjetos y colocando sobre este el cubreobjetos. Dispuesta la muestra sobre la
platina del microscopio se continuó con la observación e interpretación en cada uno de
los diferentes objetivos (4x-40x).

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RESULTADOS

Para aislar el DNA, que se encuentra en el interior del núcleo de las células eucariotas,
se requirió romper tanto la membrana plasmática como la nuclear, además de la
desnaturalización de las proteínas.

Al triturar el hígado de pollo en la licuadora se incrementó su área superficial, lo que


propició una disolución mucho mayor de la membrana plasmática, permitiendo una
absorción de manera efectiva de las soluciones que se agregaron después.

Debido a la composición bioquímica de las membranas celulares, el detergente líquido


sirvió al romper la bicapa lipídica de la membrana plasmática y la envoltura nuclear,
deshaciendo las uniones que las mantenían juntas.

El DNA, que es una molécula polar, al reaccionar con el etanol se convierte en apolar e
insoluble en el alcohol, de esta forma se precipita entre la capa del etanol líquido y la
solución acuosa, siendo visible por la misma insolubilidad y la aglutinación por la
precipitación que obedece a fuerzas físicas.

Además del alcohol, el medio salado favorece a la insolubilidad y a la precipitación del


DNA, a comparación de su estado soluble en agua al neutralizar la carga negativa de los
grupos fosfatos, además de ayudar en la separación del DNA de las histonas.

Los agregados moleculares obtenidos, que se observaron como filamentos largos de


consistencia mucoide, son una mezcla de proporción variable de ácidos nucleicos y
proteínas, por tanto, el procedimiento de extracción del DNA es realmente un
procedimiento para la extracción de ácidos nucleicos, que comprenden tanto DNA como
RNA.

CONCLUSIÓN

El conocimiento de la estructura molecular del DNA ha permitido esclarecer los


mecanismos relacionados con la duplicación del DNA, la síntesis de los ARN, de las
proteínas, la recombinación genética y la mutagénesis, así como los complejos
mecanismos que permiten la autorregulación de todos estos procesos.

Por si esto fuera poco, a partir de ese descubrimiento se han desarrollado poderosos
procedimientos experimentales que han rebasado el marco de la genética molecular y
han incidido de forma fundamental en el conocimiento: de la estructura y las funciones
celulares; de los procesos del desarrollo filogenético y ontogenético; de la relación entre
el genoma y el ambiente y de las bases moleculares de las enfermedades.

Por esto la apreciación de la importancia de la genética para la medicina requiere un


conocimiento de la naturaleza del material hereditario, cómo se almacena en el genoma
humano y cómo se transmite de célula a célula durante la división celular y de
generación en generación durante la reproducción.

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Así, el aislamiento del DNA es uno de las técnicas más básicas y esenciales en el estudio
del DNA. Siendo tanto su extracción desde las células y su purificación, de importancia
primaria para campos como la medicina, la genética, la biotecnología y la ciencia
forense, por nombrar algunos.

ANEXOS

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BIBLIOGRAFÍA

Lantigua, A. (2011). Introducción a la Genética Médica. La Habana: Editorial de Ciencias


Médicas.

Nussbaum, R.L. McInnes, R.R. y Willard, H.F., "Thompson & Thompson. (2016). Genética
en Medicina. Barcelona: Editorial Elsevier Masson.

Paz-y-Miño C & López-Cortés A (2014) Genética Molecular y Citogenética Humana:


Fundamentos, aplicaciones e investigaciones en el Ecuador. (Universidad de las
Américas. Universidad Yachay). Quito, Ecuador.

Learn.Genetics [Internet]. Salt Lake City (UT): Genetic Science Learning Center; 2015
[cited 2018 Apr 30] Available from http://learn.genetics.utah.edu/

Biology Junction. Available from http://www.biologyjunction.com/extracting_dna.htm

Josephs, M. (2011). Find the DNA in a Banana. Scientific American. Available from
https://www.scientificamerican.com/article/find-the-dna-in-a-banana-bring-science-
home/

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