Centro de Formación Técnica Santo Tomás 2018

Ingeniería Química Industrial

Laboratorio de Bioquímica

Soluciones amortiguadoras y capacidad amortiguadora

Karla pinto - Mary gonzalez - Nahir zuleta - Mauricio gallardo
karli.daniela.kd@gmail.com - marygonzalez198@gmail.com - nahirzuleta.alumno@gmail.com –
gallardo.mauricio87@gmail.com

En el informe presente preparamos experimentalmente una solución amortiguadora para

determinar el pH de esta solución y establecer la relación entre el pH y un amortiguador.

Palabras Claves: ecuación de Henderson - amortiguador - pH-metro.

Marco Teórico una base fuerte, y pierde su capacidad

Soluciones amortiguadoras, “buffers” o
“tampones” son aquellas que reducen los
cambios de concentración de iones
hidrógeno que podría producirles el
agregado de pequeñas cantidades de
electrólito ácido o alcalino. [1] Casi todos los
procesos biológicos son dependientes de pH,
de manera que un mínimo cambio en el pH
conlleva un apreciable cambio en la
velocidad de un proceso. Las reacciones
químicas que tienen lugar en los medios
histoquímicos se producen en soluciones
acuosas que necesitan que el pH del sistema
se mantenga constante para evitar que
ocurran otras reacciones no deseadas. Las
soluciones amortiguadoras o tampones son
capaces de mantener la acidez o basicidad de
un sistema dentro de un intervalo reducido
de pH, por lo cual resultan de gran utilidad
en la práctica histoquímica.
Están constituidas por un par ácido/base
conjugado en concentración apreciables
(mayores de 10−2 𝑀), es decir: una mezcla
de un ácido débil y la sal de su base
conjugada, o bien por una base débil y la sal
de su ácido conjugado.
Una vez formada la solución amortiguadora
el pH varía poco cuando se agregan
pequeñas cantidades de un ácido fuerte o
reguladora cuando la solución se diluye.
La capacidad amortiguadora de un tampón
es la cantidad de ácido o de base fuertes que
se pueden añadir a la solución tampón y que
solamente conduce a una variación de pH de
una unidad. La capacidad amortiguadora
depende de dos factores:
1- la concentración de los constituyentes: al
aumentar la concentración aumenta la
capacidad amortiguadora de la solución.
2- la proporción relativa que existe entre la
sal y el ácido: a medida que la relación
sal/ácido se aproxima a la unidad, aumenta
la capacidad amortiguadora de la solución.
La capacidad amortiguadora se establece en
una unidad por arriba y una por debajo de su
pKa, pues precisamente en esta región en
donde el agregar 𝐻 + u 𝑂𝐻 − tiene menor
efecto. [2]
Materiales y Reactivos
● Matraz de aforo 100 ml
● Vaso precipitado
● Bureta
● pH-metro
● Acetato de sodio
● Ácido acético glacial
● Solución NaOH 0.1M estandarizada
● Agua destilada
● Varilla de agitación

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● Fosfato monopotasico 2. Transferir 50 ml de solución

● Fosfato dipotasico
Procedimiento
Preparación de solución amortiguadora.
1. Calcular la concentración de acetato de
sodio que se requiere para preparar una
solución reguladora de pH 5.0. Para ello,
empleando la ecuación de Henderson-
Hasselbalch, utilizará. como referencia la
siguiente concentración. (pKa = 4.75)
● Grupo 1: 0.05M ácido débil
amortiguadora en un vaso precipitado de
250 ml.
3. medir el pH inicial de la solución
amortiguadora preparada.
4. Adicionar alícuotas de solución NaOH (5
ml) a la solución reguladora. Agitar
suavemente y anotar el volumen del NaOH
adicionado y el pH de la solución.
5. realice este procedimiento hasta adicionar
25 ml de solución NaOH.

𝐸𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝐻𝑒𝑛𝑑𝑒𝑟𝑠𝑜𝑛 − 𝐻𝑎𝑠𝑠𝑒𝑙𝑏𝑎𝑙𝑐ℎ Resultados.

[𝐴− ] → 𝑆𝑎𝑙 Tampón acetato:

𝑝𝐻 = 𝑝𝐾𝑎 + 𝑙𝑜𝑔
[𝐻𝐴] → Á𝑐𝑖𝑑𝑜 Los cálculos necesarios para obtener la masa
necesaria para preparar este tampón dieron
2. Con las concentraciones obtenidas en el los siguientes resultados:
paso anterior, determine la cantidad [𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝑁𝑎]
5.0 = 4.75 + log
necesaria de ácido y base conjugada para [𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝐻]
preparar 100ml (0.1L) de la solución buffer [𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝑁𝑎]
1.7782 =
requerida a partir de las soluciones ya 0.05𝑀
preparadas. [𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝑁𝑎] = 0.0889𝑀
3. Preparar el matraz de aforo de 100 ml la 𝑀 𝑔
solución amortiguadora a partir de los 𝒈𝑪𝑯𝟑𝑪𝑶𝑶𝑵𝒂 = 0.0889 ∗ 82.0343 ∗ 0.1𝐿
𝐿 𝑀
cálculos realizados. Completar volumen
𝒈𝑪𝑯𝟑𝑪𝑶𝑶𝑵𝒂 = 0.7292𝑔
solicitado con agua destilada.
𝑔 𝑀
𝒈𝑪𝑯𝟑𝑪𝑶𝑶𝑯 = 60.05 ∗ 0.05 ∗ 0.1𝐿
4. guarde la solución tampón preparada. 𝑀 𝐿
𝒈𝑪𝑯𝟑𝑪𝑶𝑶𝑯 = 0.3002𝑔 = 0.3002𝑚𝐿
5. Siguiendo los pasos anteriores, preparar
tampón fosfato (Utilizando fosfato dipotásico Obtenidas las masas, se procede a preparar
y fosfato monopotasico) de concentración el tampón, el cuál tras medirse su pH con el
0.15M y de pH = 7 (pKa = 7.2). pH-metro, dio el siguiente resultado.
pH teórico = 5
Determinación capacidad amortiguadora. pH medido = 7
Una vez medido el pH real de la solución
1. Llenar una bureta de 50 ml con solución
tampón, se procede a adicionar los primeros
amortiguadora y otra bureta de 50ml con
5mL de NaOH, obteniendo el siguiente pH:
solución estandarizada de NaOH 0.1M
pH tampón + NaOH = 12.45
(Concentración real = 0.09919M).

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Quedando en evidencia que el tampón en Como se puede observar, la variación de pH

cuestión no funcionó como debiera, por en este caso no fue significativa, por lo que
probables causas previas a la preparación de se presume que el tampón funcionó como
este, por lo que se decide descartar esta debiera, por lo que se continuó con la
solución y se procede a preparar el tampón adición de NaOH hasta completar 25mL.
fosfato. Al terminar dicha adición y medidos los pH,
los resultados fueron los siguientes:
Tampón fosfato: Tampón fosfato
Se obtienen los siguientes resultados en el NaOH (mL) pH
calculo de la masa necesaria de K2HPO4 y de 0 6,83
KH2PO4 para la preparación del tampón: 5 7,08
[𝐾2 𝐻𝑃04 ] 10 7,17
7.0 = 7.2 + 𝑙𝑜𝑔
[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] 15 7,20
[𝐾2 𝐻𝑃04 ] 20 7,52
0.6309 = 25 7,55
[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ]
0.6309[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] = [𝐾2 𝐻𝑃04 ]
1.6309[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] = 0.15𝑀
[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] = 0.0919𝑀
0.6309 ∗ 0.0919𝑀 = [𝐾2 𝐻𝑃04 ]
[𝐾2 𝐻𝑃04 ] = 0.0579𝑀
𝑀 𝑔
𝒈[𝑲𝟐 𝑯𝑷𝟎𝟒 ] = 0.0579 ∗ 174.2 ∗ 0.1𝐿
𝐿 𝑀
𝒈[𝑲𝟐 𝑯𝑷𝟎𝟒 ] = 1.0086𝑔
Con los nuevos valores de pH obtenidos en
𝑀 𝑔
𝒈[𝑲𝑯𝟐 𝑷𝑶𝟒 ] = 0.0919 ∗ 136.086 ∗ 0.1𝐿 estas mediciones, se puede hacer un
𝐿 𝑀
seguimiento de lo que ocurre en las
𝒈[𝑲𝑯𝟐 𝑷𝑶𝟒 ] = 1.2506𝑔
concentraciones de ácido y de sal en el
Obtenido estos resultados, se procede a tampón.
masar tanto el ácido como la sal para su Para ello, se realiza el calculo anterior,
preparación, obteniendo 1.0083g de K2HPO4 reemplazando el pH 7 por uno de los
y 1.2552g de KH2PO4, con lo que se prepara obtenidos, para conocer las nuevas
el tampón correspondiente. Tras esto, la concentraciones de K2HPO4 y de KH2PO4,
medición de pH arroja el siguiente resultado: obteniéndose los siguientes resultados:
pH teórico = 7
pH medido = 6.83
Al adicionar los primeros 5mL de NaOH, la
medición de pH con el pH-metro arroja el
siguiente resultado:
pH tampón + NaOH = 7.08

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5mL de NaOH: 20mL de NaOH:

[𝐾2 𝐻𝑃04 ] [𝐾2 𝐻𝑃04 ]
7.08 = 7.2 + 𝑙𝑜𝑔 7.52 = 7.2 + 𝑙𝑜𝑔
[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] [𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ]
[𝐾2 𝐻𝑃04 ] [𝐾2 𝐻𝑃04 ]
0.7585 = 2.0892 =
[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] [𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ]
0.7585[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] = [𝐾2 𝐻𝑃04 ] 2.0892[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] = [𝐾2 𝐻𝑃04 ]
1.7585[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] = 0.15𝑀 3.0892[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] = 0.15𝑀
[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] = 0.0852𝑀 [𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] = 0.0485𝑀
[𝐾2 𝐻𝑃04 ] = 0.0646𝑀 [𝐾2 𝐻𝑃04 ] = 0.1013𝑀

25mL de NaOH:
10mL de NaOH: [𝐾2 𝐻𝑃04 ]
[𝐾2 𝐻𝑃04 ] 7.55 = 7.2 + 𝑙𝑜𝑔
7.17 = 7.2 + 𝑙𝑜𝑔 [𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ]
[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ]
[𝐾2 𝐻𝑃04 ]
[𝐾2 𝐻𝑃04 ] 2.2387 =
0.9332 = [𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ]
[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ]
2.2387[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] = [𝐾2 𝐻𝑃04 ]
0.9332[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] = [𝐾2 𝐻𝑃04 ]
3.2387[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] = 0.15𝑀
1.9332[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] = 0.15𝑀
[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] = 0.0463𝑀
[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] = 0.0775𝑀
[𝐾2 𝐻𝑃04 ] = 0.1036𝑀
[𝐾2 𝐻𝑃04 ] = 0.0723𝑀

Concentración (en moles) de sal y

15mL de NaOH: ácido en tampón fosfato en presencia
[𝐾2 𝐻𝑃04 ] de NaOH
7.20 = 7.2 + 𝑙𝑜𝑔
[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] NaOH (mL) [K2HPO4] [KH2PO4]
[𝐾2 𝐻𝑃04 ] 0 0,0579 0,0919
1=
[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] 5 0,0646 0,0852
1[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] = [𝐾2 𝐻𝑃04 ] 10 0,0723 0,0775
15 0,0750 0,0750
2[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] = 0.15𝑀
20 0,1013 0,0485
[𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 ] = 0.0750𝑀 25 0,1036 0,0463
[𝐾2 𝐻𝑃04 ] = 0.0750𝑀

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Como se puede observar, a medida que se
añade NaOH, la concentración de K2HPO4
aumenta y la concentración de KH2PO4
disminuye, quedando ambas
concentraciones igualadas a los 15mL
adicionados de NaOH (Por lo que pH y pKa
tienen el mismo valor, o sea 7.2).
Conclusión
En esta experiencia de laboratorio, se pudo
observar el comportamiento de dos
soluciones tampón en presencia de hidróxido
de sodio. Y aunque el caso del tampón
acetato fue excepcional, sirvió para tener
una comparación entre una solución que no
amortiguaba la base fuerte añadida y otra
que, si pudo hacerlo, como fue el tampón
fosfato, cuyas variaciones de pH no fueron
significativas.
Anexo
1. ¿Qué papel desempeñan las soluciones
buffer dentro de la bioquímica?
R: Las soluciones buffer son cruciales en la
bioquímica debido a que los procesos
bioquímicos funcionan normalmente en pH
cercano a 7, por lo que la amortiguación que
estas soluciones ofrecen nos permite
trabajar sin afectar la estructura y actividad
de las biomoléculas, especialmente de las
proteínas.
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2. Investigar que sustancias se emplean
para preparar soluciones buffer de fosfato;
carbonatos y acetatos. nombrar la
proporción de cada especie y el pH
resultante.
R: - buffer de fosfato: Es una solución acuosa
y salina que contiene cloruro sódico, fosfato
sódico, cloruro de potasio y fosfato de
potasio.
3. Investigue los cuidados (mínimo 3) y
el correcto uso de pH-metro.
R: Hay técnicas generales de mantenimiento
de medidores de pH, pero en muchas
ocasiones cada marca y cada modelo tiene
sus propios cuidados. Tendremos que seguir
las instrucciones del fabricante medidor para
poder disfrutarlo por más tiempo.
4. ¿Cuál es el pH que tiene una solución
amortiguadora formada por 0,5M de ácido
acético y 0.4M de acetato? ¿cuál es el pH
final si a 50 ml de esta se le agregan 10 ml de
NaOH 0.1 M? pKa ácido acético = 4.75.
R: Primera parte:
pKa= 4.75 V= 0.05L
[CH3COOH]= 0.5M * 0.05L = 0.0250M
[CH3COO-]= 0.4M * 0.05L = 0.0200M
0.0200
𝒑𝑯 = 4.75 + 𝑙𝑜𝑔
0.0250
𝒑𝑯 = 4.65
Segunda parte:
[NaOH]= 0.1M V=0.01L
[NaOH]= 0.1M * 0.01L = 0.001L
[CH3COOH]= 0.0250M – 0.001M = 0.0240M
[CH3COO-]= 0.0200M + 0.001M = 0.0210M
0.0210
𝒑𝑯 = 4.75 + 𝑙𝑜𝑔
0.0240
𝒑𝑯 = 4.69
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Bibliografía y/o Referencia

[1] Química Biológica.

Escrito por Antonio Blanco.

[2]Fundamentos teóricos y prácticos de la

histoquímica
Escrito por Ricardo Martínez Rodríguez