PROBLEMAS 3:

CROMATOGRAFÍA
Antonio de Jesús Muñoz Escobar

ANÁLISIS INSTRUMENTAL
Dra. Alba Yadira Corral Avítia
Análisis Instrumental PROBLEMAS 3: CROMATOGRAFÍA Marzo 2018

1. Los siguientes datos corresponden a una columna para cromatografía de

líquidos: Longitud del relleno 24.7 cm, caudal 0.313 mL/min, volumen de la fase
móvil 1.37 mL, Volumen de la fase estacionaria 0.164 mL. El cromatograma de
una mezcla de especies A, B, C Y D proporcionan los siguientes datos:

No 3.1 0
retenido
tR W
A 5.4 0.41
B 13.3 1.07
C 14.1 1.16
D 21.6 1.72

Calcular:
a) El número de platos.
2
tR
N=16
W ( )
5.4 min 2
N A =16 (
0.41 min
=2775.4 9 )
2
13.3 min
N B =16 ( 1.07 min )
=2472.0 4

2
14.1min
N C =16 ( 1.16 min )
=2363.9 7

2
21.6 min
N D =16 ( 1.72 min )
=2523.3 1

Media:

( 2775.49+2472.04+ 2363.97+2523.31 )
N Promedio =
4
(10134.81 )
N Prom =
4
N Prom =2533.7 0

La altura de plato de la columna.

L
H=
N
Análisis Instrumental PROBLEMAS 3: CROMATOGRAFÍA Marzo 2018

24.7
H= =9.75 ×10−3
2533.70

b) Factor de retención.

( t R−T M )
k=
TM

( 5.4−3.1 )
k A= =0.74 2
3.1

( 13 .3−3. 1 )
k B= =3 .29
3. 1

( 14 .1−3 .1 )
k C= =3 . 55
3.1

( 21 . 6−3 . 1 )
k D= =5 . 97
3 .1

c) Coeficiente de distribución para cada compuesto.

k Vm
K=
Vs

( 0 . 742 ) ( 1. 37 ) mL
K A= =6 .19 8
0 .164

(3 . 29 ) ( 1 .37 ) mL
K B= =27 . 4 8
0 . 164

( 3 .55 )( 1 . 37 ) mL
K C= =29 . 6 6
0 .164

( 5 . 97 ) (1 . 37 ) mL
KD= =49 . 87
0 .164

d) La resolución entre B y C.
Análisis Instrumental PROBLEMAS 3: CROMATOGRAFÍA Marzo 2018

2 [ ( t R )C −( t R )B ]
RS =
W B +W C
2 [ 14 . 1−13 . 3 ]
RS =
1 . 07+1 .16
Rs =0 .7 2

e) El factor de selectividad entre estos dos compuestos.

K
∝= C
KB
29 .66
∝=
27 . 48
∝=1 .0 8

f) La longitud de columna necesaria para tener una resolución de 1.5.

( R S )1 √ N 1
=
( R S )2 √ N 2
0. 72 √ 2533 . 70
=
1.5 √N2
2
0 .72
N 2=2533 . 70
1. 5 ( )
N 2=583 . 76
L=N × H
L=583 . 76× ( 9 . 75 ×10−3 )
L=5 . 69 cm

g) Tiempo necesario para separar B y C con una resolución de 1.5.

2
( t R )1 ( R S )1
=
( t R )2 ( R S ) 22
2
14 ,1 ( 0 . 72 )1
=
( t R )2 ( 1 .5 )22
( 14 .1 ) ( 1. 5 )2
( t R ) 2= 2
( 0 . 72 )
( t R ) 2=6 . 2min

h) La resolución entre C y D.

2 [ ( t R )D − ( t R )C ]
RS =
W C +W D
2 [ 21 .6−14 . 1 ]
RS =
1. 16+1 . 72
RS =5 .2 1
Análisis Instrumental PROBLEMAS 3: CROMATOGRAFÍA Marzo 2018

i) El factor de selectividad entre estos dos compuestos.

K
∝= C
KD
29 .66
∝=
49 . 87
∝=. 59 4

j) La longitud de columna necesaria para tener una resolución de 1.5.

( R S )1 √ N 1
=
( R S )2 √ N 2
5 , 21 √ 2533 , 70
=
1 , 15 √N2
2
5 .21
N 2=2533 . 70 ( ) 1. 5
N 2=30566 . 67

L=N × H

L=30566.67 × ( 9.75× 10−3 )

L=298 . 03 cm

2. Con un cromatógrafo gas-líquido y con una columna de relleno de 40 cm se

obtuvieron los siguientes datos:

tR min W
Aire 1.9 0
Metilciclohexan 10 0.76
o
Metilciclohexen 10.9 0.82
o
tolueno 13.4 1.06

Calcular: el número de platos promedio.

Calcular la resolución para: Metilciclohexano y metilciclohexeno,
Metilciclohexeno y Tolueno, Metilciclohexano y Tolueno.
Si fuera necesaria una resolución de 1.5 para resolver metilciclohexano y
metilciclohexeno, a) ¿Cuantos platos se necesitarían?, b) ¿Que longitud debería
Análisis Instrumental PROBLEMAS 3: CROMATOGRAFÍA Marzo 2018

tener la columna si se utiliza el mismo relleno?, c) ¿Cuál sería el tiempo de

retención del metilciclohexeno en la columna con la longitud de (b)?
Si VS y VM para la columna fueron respectivamente 19.6 y 62.6 mL y el pico de
aire no retenido apareció a los 1.9 min. Calcular: a) El factor de retención para
cada uno de los compuestos, b) Coeficiente de distribución para cada
compuesto, c) El factor de selectividad para el metilciclohexano y
metilciclohexeno, c) El factor de selectividad para el metilciclohexeno y el
tolueno.

Calcular: el número de platos promedio.

2
t
N=16 ( R )
W
N metilciclohexano = 16 (10/0.76)2
N metilciclohexano = 2770.08

N metilciclihexeno = 16 (10.9/0.82)2
N metilciclihexeno = 2827.13

N tolueno = 16 (13.4/1.06)2
N tolueno = 2556.92
( 2770.08+2827.13+2556.92 )
N Promedio =
3
N= 2718.04

Calcular la resolución para: Metilciclohexano y metilciclohexeno,

Metilciclohexeno y Tolueno, Metilciclohexano y Tolueno.

Metilciclohexano y metilciclohexeno

2[(tR )B – (tR) A ]
R=
WA+ WB

Rs = 2 [(10.9-10)] / (0.82 + 0.76)

Rs = 1.14

Metilciclohexeno y Tolueno

2[(tR )B – (tR) A ]
R=
WA+ WB
Análisis Instrumental PROBLEMAS 3: CROMATOGRAFÍA Marzo 2018

Rs = 2 [(13.4-10.9)] / (1.06 + 0.82)

Rs = 2.66

Metilciclohexano y Tolueno

2[(tR )B – (tR) A ]
R=
WA+ WB

Rs = 2 [(13.4-10)] / (1.06 + 0.76)

Rs = 3.74

Si fuera necesaria una resolución de 1.5 para resolver metilciclohexano y

metilciclohexeno
a) ¿Cuántos platos se necesitarían?
2
tR
N=16
W ( )
N = 2718.04 x 1.52 / 1.142
N = 4172.03

b) ¿Qué longitud debería tener la columna si se utiliza el mismo relleno?

L
H=
N

L=NxH

L= 4172.03 x 0.0147

L = 61 cm

c) ¿Cuál sería el tiempo de retención del metilciclohexeno en la columna con la

longitud de (b)?

tR = 10.9 x 1.52 / 1.142

tR = 18.9 min

Si VS y VM para la columna fueron respectivamente 19.6 y 62.6 mL y el pico de

aire no retenido apareció a los 1.9 min.
Calcular:
a) El factor de retención para cada uno de los compuestos

t RA−¿tM

tM
´
K =¿
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K1 = (10-1.9) / 1.9

K1 = 4.26

K2 = (10.9-1.9) / 1.9

K2 = 4.74

K3 = (13.4-1.9) / 1.9

K3= 6.05

b) Coeficiente de distribución para cada compuesto,

K1 = 4.26 (62.6/19.6)

K1 = 13.6

K2 = 4.74 (62.6/19.6)

K2 = 15.13

K3 = 6.05 (62.6/19.6)

K3 = 19.32

c) El factor de selectividad para los compuestos,

α = [(tR)B -tM] / [(tR)A + tM]

α2.1 = (10.9-1.9) / (10-1.9)

α2.1 = 1.11

α3.2 = (13.4-1.9) / (10.9-1.9)

α3.2 = 1.28

3. Calcular a) el factor de capacidad o de retención k, y b) la resolución Rs, de los

siguientes analitos en un sistema cromatográfico por HPLC, con los datos que
figuran en la siguiente tabla: tm= 1.12 min

Analito tr, min w, s

Propoxur 1.72 29
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Carbaryl 5.52 39

1-naftol 7.34 30

Methiocarb 7.70 65

a) el factor de capacidad o de retención k

t RA−¿tM

tM
K ´ =¿

K1 = (1.72-1.12) / 1.12

K1 = 0.536

K2 = (5.52-1.12) / 1.12

K2 = 3.929

K3 = (7.34-1.12) / 1.12

K3 = 5.554

K3 = (7.70-1.12) / 1.12

K3 = 5.875

b) la resolución Rs, de los siguientes analitos en un sistema cromatográfico por

HPLC, con los datos que figuran en la siguiente tabla: tm= 1.12 min

Carbaryl

2[(tR )B – (tR) A ]
R=
WA+ WB

Rs = 2 [(5.52-1.72)] / (0.483min + 0.65min)

Análisis Instrumental PROBLEMAS 3: CROMATOGRAFÍA Marzo 2018

Rs = 6.707

1- naftol

Rs = 2 [(tR)3 - (tR)2] / W3 + W2
Rs = 2 [(7.34-5.52)] / (0.64min + 0.5min)
Rs = 3.13

Methiocarb

Rs = 2 [(tR)4 - (tR)3] / W3 + W4
Rs = 2 [(7.70-7.34)] / (0.5min + 1.0833min)
Rs = 0.455

c) Indicar si los picos cromatográficos de los componentes de la muestra están

bien resueltos

Carbaryl: si

1-Naftol: si

Methiocarb:no

d) Calcular el número de platos teóricos efectivos para el 1-naftol.

2
tR
N=16 ( )
W
N = 16 (7.34/0.5)2
N= 3448

4. Una columna cromatográfica con una longitud de 50 cm y un diámetro interno de

6.22 mm se empaca con fase estacionaria que ocupa el 45.0 % del volumen. Si
el volumen de la velocidad de flujo es 1.20 mL/min.
a. ¿Cuál es el volumen de la columna?
V =π ×r 2 ×h
Análisis Instrumental PROBLEMAS 3: CROMATOGRAFÍA Marzo 2018

2
V =π × ( 0 . 311 cm ) × 50 cm
3
V =15 . 1928 cm
b. ¿Cuál es el volumen de la fase móvil?
3 3
0 . 55× 15 .1928 cm =8 . 3560 cm
c. ¿Cuál es la velocidad de flujo lineal en cm/min?
2
F=π r u0 ε
2
u0=F / π r ϵ
cm 3
1. 20
min
u0= 2
=8 . 7760 cm /min
π × ( 0 . 311 ) × 0 . 45
d. ¿Cuánto tiempo le toma al solvente salir de la columna?
50 cm
=5 . 6973 min
8. 7760 cm/min

5. El soluto requiere 12.0 min para pasar por una columna pero el solvente pasa en
1.5 min
a) Calcula el factor de retención, k’

t r−¿tm

tm
k ´ =¿

k´ = 12 - 1.5 / 1.5 = 7

b) Que fracción del tiempo está el soluto en la fase móvil conforme va pasando
por la columna.

ts = tr – tm = 12 – 1.5 = 10.5 min

c) El volumen de la fase estacionaria es un décimo del volumen en la fase

móvil en la columna (Ve=0.10Vm). Encuentra el coeficiente de reparto, K,
para este sistema.

CE
K= C E∗V E =C M∗V M
CM

C E∗(0 . 1V M )=C M∗V M

C M∗V M 1 CM
C M= = =10 C M
0 . 1V M 0.1

10 C M
K=
CM
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K=10

6. Un solvente ocupa 25% del volumen de una columna cromatográfica la cual

tiene un diámetro interno de 1.250 mm. Si el volumen de la velocidad de flujo es
1.5 mL/min, encuentra la velocidad lineal de flujo, u.
F
u= 2
( π r ) 0 .25
1 . 5 mL
u=
( π 0 . 06252 ) 0 . 25
1 . 5 ml
u=
3 . 067 x 10−3 ml /cm
u=491 .8 cm /min

7. Considera una columna cromatográfica en la cual V E= VM/8. Calcula el factor de

retención, k si K=4 y K=40.

KC V E
k ' s=
VM
Si k=4
( 4 )( 1 )
k ' s= =0 . 5
8
Si k=40
( 40 ) ( 1 )
k ' s= =5
8

8. El volumen de retención de un soluto es 66.2 mL para una columna con V M= 15

mL y VE = 8.5 mL. Calcula el coeficiente de reparto K y el factor de retención
para este soluto k.

Factor de retención

( t R−T M ) =VR−VM
k=
T M VM

66 . 2mL−15 mL
K ´= =3 . 41
15 mL

Coeficiente de reparto
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nE V M nE
Kc= =k ´
nM V E nM s

Kc=3. 41 ( 8.155mLmL )=6 . 017

9. De acuerdo a los estudios de distribución las especies A y B tienen constantes

de distribución agua/hexano de 6.01 y 6.20 (K=[A]ac/[A]hex). Las dos especies
se deben separar por elución con hexano en una columna empacada con gel de
sílice que contiene agua adsorbida. La proporción Ve/Vm para el empaque es
0.422.
a. Calcular el factor de retención para cada soluto
Kc V E
k s ´=
VM
Factor de retención del soluto A (agua)
Ks ´=( 6 . 01 ) ( 0 . 422 )=2 . 536
Factor de retención del soluto B (hexano)
Ks ´=( 6 . 20 ) ( 0 . 422 )=2 . 616

b. Calcular el factor de selectividad

KB
α=
KA

6 .20
α= =1. 0316
6 . 01

10. Una mezcla de benceno, tolueno y aire es inyectada en el cromatógrafo de

gases. El aire da un pico de 42 s, mientras que el benceno y el tolueno son
eluidos respectivamente a 251 y 333 s. Calcular el tiempo de retención
corregido, el factor de capacidad (o factor de retención) para cada soluto, así
como el coeficiente de retención relativa (o factor de selectividad) para los dos
solutos.

tR min
Aire 0,7
a)benzen 4,35
o
b)tolueno 5,55
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k’ A=5.21
k’B=6.93

α=1.33
11. Considerando una columna con una altura de plato de 1.5 mm y con número de
platos de 333, por la que fluye el gas portador a un caudal de 3 mL•min-1, y
sabiendo que el volumen muerto es de 1.0 mL:
a) ¿Cuáles son el tiempo de retención y el volumen de retención cuando k es 1,
2 ,5 y 10?
F= 3 ml*min-1
Vm=1 mL

Despeje

=0.33 min.
Calculo de tiempo de retención y volumen de retención.

Despeje de formula

valor k VR Tr
1 2 0,44 min
2 3 0,78 min
5 6 1,78 min
10 11 3,44 min

b) ¿Cuál sería la anchura en la base de los picos a cada uno de los valores
anteriores de k?

12. En una columna de 122 cm de longitud y a una temperatura de 160ºC se

obtuvieron los siguientes tiempos de retención en minutos: pico del aire 0.90,
heptano 1.22 y octano 1.43. El ancho en la base de los picos fue de 0.14 min
para el heptano y de 0.20 min para el octano.

a) Calcular la retención relativa y la resolución para estos picos.

Análisis Instrumental PROBLEMAS 3: CROMATOGRAFÍA Marzo 2018

1. 22−0 .9
k heptano= =0 .3 6
0.9

1 . 43−0 . 9
k octano= =0 .5 9
0.9

2 ( 1. 43−1 .22 )
Rs= =1 . 24
0 .2+0 . 14
b) ¿Qué longitud debería tener la columna para obtener una resolución de 1.5?
2 2
tR 1 .22
N 1=16( ) =16( ) =121 5
W 0 .14
2
t 1. 43 2
N 2=16( R ) =16( ) =81 7
W 0.2
N 1+ N 2
Npromedio= =1016
2
Rs
¿
¿
¿1
¿
Rs
¿
¿
¿2
¿
¿
1. 24 √ 1016
=
1. 5 √N2
1.5 2
N 2=1016( ) =203 4
1 . 06

13. Las sustancias A y B tienen tiempos de retención de 16.40 y 17.63 min,

respectivamente, en una columna de 30 cm. Una especie no retenida pasa a
través de la columna en 1.30 min. Las anchuras máximas (en la base) de A y B
son 1.11 y 1.21 min, respectivamente.
a. Dibuje el cromatograma a partir de los datos indicados y calcule
Análisis Instrumental PROBLEMAS 3: CROMATOGRAFÍA Marzo 2018

b. la resolución entre los compuestos A y B

2[(tR ) B – (tR) A ]
R=
WA+ WB

2[17 . 63−16 . 40]

R= =1. 060
1 . 21+ 1. 11

c. el número medio de platos de la columna

2 2
t 16 . 40
N=16 ( R ) =16( ) =3492. 7 0
W 1 .11

tR 2 17 . 63 2
N=16 ( ) =16( ) =3396 . 6 7
W 1 . 21

3492 .70+3396 . 67 2
N promedio =( ) =3444 . 6 8
2

d. la altura de plato

L 30 cm −3
H= = =8 .7 x 10
N 3444 .68
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e. la longitud de la columna necesaria para lograr una resolución de 1.5

Rs
¿
¿
¿1
¿
Rs
¿
¿
¿2
¿
¿
1 . 06 √ 3444 .68
=
1. 5 √N 2
2
1 .5
N 2=3444 . 68( ) =6 897 . 9 4
1 . 06
f. el tiempo necesario para eluir la sustancia B en la columna que da un
valor de RS de 1.5
tR
¿
¿
¿1
¿
tR
¿
¿
¿2
¿
Rs
¿
¿
¿1
¿
¿2
¿
Rs
¿
¿
¿2
¿
¿2
¿
tR
¿
¿
¿
¿
¿
tR
¿
¿
¿
Análisis Instrumental PROBLEMAS 3: CROMATOGRAFÍA Marzo 2018

14. La figura muestra el cromatograma de una mezcla de dos componentes en una

columna cromatográfica de líquidos empaquetada, de 25 cm. La velocidad de
flujo fue de 0.40 mL min-1.

Las sustancias A y B tienen tiempos de retención de 16.40 y 17.63 min,

respectivamente, en una columna de 30 cm. Una especie no retenida pasa a través de
la columna en 1.30 min. Las anchuras máximas (en la base) de A y B son 1.11 y 1.21

min,

a) Determina los factores de retención para los dos componentes

t RA−¿t 30−5
M
= =5
tM 5
K ´ A =¿
t RB−¿t 50−5
M
= =9
tM 5
´
K B=¿

b) Calcula la resolución de los dos picos

2[(tR ) B – (tR) A ]
R=
WA+ WB

2[50−30 ]
R= =1. 025
23+16
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c) Halla la altura media de plato

tR 2 30 2
N=1 6( ) =16( ) =56 . 2 5
W 16

tR 2 50 2
N=16 ( ) =16( ) =75 .6 1
W 23

56 . 25+75 .61 2
N promedio =( ) =65 . 93
2

L 25 cm
H= = =0 .37 9
N 65 .93

d) ¿Qué longitud de la columna se necesitaría para alcanzar una resolución de

1.75?

Rs
¿
¿
¿1
¿
Rs
¿
¿
¿2
¿
¿
1 . 025 √ 65 . 93
=
1 . 75 √N 2
1 .75 2
N 2=65 . 93( ) =192 .1 8
1 .025
L=( H ) ( N )=( 0 . 379 ) ( 192. 18 ) =72. 8 3

e) Supongamos que la longitud de la columna se ha fijado a 25 cm y que el

material de empaquetamiento está fijo. ¿Qué medidas podría usted tomar a fin
de incrementar la resolución para lograr la separación en línea base?

Se pueden emplear las siguientes medidas:

-Cambiar de eluyente, utilizar otros disolventes con mayor capacidad de elución.
- Adición de sustancias a la fase acuosa, como tampones (cambio de pH y
naturaleza del tampón), pares iónico, ligandos formadores de complejos, etc.
-Variación de la temperatura.
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f) ¿Hay alguna medida que usted pudiera usar para lograr una mejor separación
en menos tiempo con la misma columna que en el apartado anterior?

Si la columna no se puede modificar, entonces se podría actuar sobre lo

siguiente:
- aumentando el caudal de la fase móvil
- elución en gradiente
- variando la temperatura