“numeración de coliformes, determinación del

1-1-2016
número más probable (nmp)"

INFORME DE LABORATORIO NRO. 03:

“NUMERACIÓN DE COLIFORMES, DETERMINACIÓN DEL NÚMERO MÁS

PROBABLE (NMP)"

I. OBJETIVOS:

 Determinar el NMP de coliformes totales en muestras de

alimentos.
 Determinar la numeración de coliformes mediante el método
de recuento en placa.
 Determinar en NMP de coliformes fecales en muestras de
alimentos.

II. FUNDAMENTO TEÓRICO:

COLIFORMES:
La denominación genérica coliformes designa a un grupo de
especies bacterianas que tienen ciertas características
bioquímicas en común e importancia relevante como
indicadores de contaminación del agua y los alimentos.
Coliformes significa con forma de Coli, refiriéndose a la
bacteria principal del grupo, la Escherichia Coli, descubierta
por el bacteriólogo alemán THEODOR VON ESCHERICH en
1860.

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“numeración de coliformes, determinación del
1-1-2016
número más probable (nmp)"

Caracteres bioquímicos:
El grupo agrupa a todas las bacterias entéricas que se caracterizan
por tener las siguientes propiedades bioquímicas:
 ser aerobias o anaerobias facultativas
 ser bacilosGram negativos;
 no ser esporógenas
 fermentar la lactosa a 35 °C en 48
horas, produciendo ácido láctico y gas.

Las bacterias de este género se encuentran

principalmente en el intestino de los humanos y de los animales de
sangre caliente, es decir, homeotermos, pero también ampliamente
distribuidas en la naturaleza, especialmente en suelos, semillas y
vegetales.
Los coliformes se introducen en gran número al medio ambiente por
las heces de humanos y animales. Por tal motivo suele deducirse que
la mayoría de los coliformes que se encuentran en el ambiente son
de origen fecal. Sin embargo, existen muchos coliformes de vida
libre.

III. EQUIPOS Y MATERIALES:

- Tubos de ensayo
- -Pipetas bacteriológicas de 1 y 10ml
- Probetas graduadas esteriles

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“numeración de coliformes, determinación del
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número más probable (nmp)"

- -matraz erlenmeyer
- Aguapeptonada
- mechero de bunsen
- balanza
- caldo brilla
- incuadora de 35 a 37°C

IV. PROCEDIMIENTO:

NUMERO MÁS PROBABLE DE COLIFORMES TOTALES

1. Preparar las muestras de alimento de acuerdo al procedimiento
recomendado.
2. Pipetear 1ml de c/u de las diluciones del homogenizado de
alimento en tubos de caldo verde brillante bilis lactosa (caldo
BRILA) utilizando tres tubos por dilución.
3. Incubar los tubos a 35ºC – 37ºC por 24- 48 horas
4. Anotar los tubos que muestren producción de gas (prueba
presuntiva)
5. De cada tubo que contiene gas, aislar sobre placas con agar-
violeta cristal-rojo neutro-bilis (VRBA) o agar ENDO.
6. Incubar los tubos a 35ºC – 37ºC por 24- 48 horas
7. Confirmar la presencia de bacterias coliformes por:

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a. la formación de colonias, rojo oscuro con diámetro mayor

de 5mm en agar VRBA.
b. La formación de colonias rojas rodeadas halo en agar
ENDO.
8. Anotar el número de tubos confirmados. Referirse a la tabla del
NMP para expresar el resultado.

NUMERACIÓN DE COLIFORMES DE ORÍGEN FECAL

1. EQUIPOS Y MATERIALES:
 Asa de inoculación.
 Baño de agua, regulado a 44 (+/- 0.1°C)
 Pipetas bacteriológicas de 5ml
 Caldo verde brillante bilis lactosa (caldo BRILA), volúmenes de
10ml en tubos de 150x15mm. Conteniendo tubos de
fermentación invertidos (75x10mm).
 Caldo triptosa, volúmenes de 1ml en tubos de 150x15mm.
 Reactivo de KOVACS.

2. PROCEDIMIENTO:
 Seleccionar los tubos de caldo verde brillante bilis lactosa
(caldo BRILA) que muestren formación de gas en prueba
presuntiva.
 Inocular una azada de cada tubo gas positivo a un tubo de
caldo BRILA y un tubo de caldo triptosado.
 Incubar los tubos a 44 (+/- 0.1°C)
 Después de 24 horas de incubación, efectuar la prueba de
indol en los tubos con caldo triptosa.

MICROBIOLOGIA DE LOS ALIMENTOS II 4

“numeración de coliformes, determinación del
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número más probable (nmp)"

 Controlar la formación de gas en los tubos con caldo BRILA

después de 24 y 48 horas de incubación.
 Los cultivos que muestran producción de gas en caldo BRILA y
formación del indol en caldo triptosa son positivos para
coliformes fecales.
 Referirse a la tabla de NMP para expresar el resultado.

MICROBIOLOGIA DE LOS ALIMENTOS II 5

“numeración de coliformes, determinación del
1-1-2016
número más probable (nmp)"

V. RESULTADOS:

NMP DE COLIFORMES TOTALES DE LA LECHE:

DILUCIONES
10 10 10 10 10 10 10 10 10
+ + + + - - - - -
3 1 0

Tabla de NMP: 310=43/ml

NMP DE COLIFORMESTOTALES DE LA LECHUGA:

DILUCIONES
10 10 10 10 10 10 10 10 10
+ + + + - - - - -
3 1 0

Tabla de NMP 310=430/ml

TABLA DE RESULTADOS:

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“numeración de coliformes, determinación del
1-1-2016
número más probable (nmp)"

MUESTRA NMP DE COLIFORMES NMP DE COLIFORMES

TOTALES FECALES
Leche de vaca 43ml positivo

Lechuga 430gr negativo

VI. CONCLUSIONES:

 Aprendimos los principales métodos en numeración de coliformes,

determinación del número más probable (NMP).

 Aplicamos los conocimientos teóricos hacia la práctica como por

ejemplo: el que para diversos microorganismos en general les afecta
la temperatura, la luz, humedad, y entre otros.

 Todos los coliformes son lactosa positiva, pero se diferencian en el

agarchromocult por reacciones bioquímicas. Los colifomes totales
tienen la B-galactosidasa, este complejo activa el compuesto
cromógeno alfa –GAL que produce un color azul violeta. Los
coliformes son habitantes de tractogastrointestinal tanto del hombre
como de los animales.

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“numeración de coliformes, determinación del
1-1-2016
número más probable (nmp)"

VII. BIBLIOGRAFÍA:

1.-Bourgeois C. M. Microbiología Alimentaria. Editorial Continental

S.A.1995.
2.-Frazier ,W.C. Microbiología de los alimentos .Ed. Acribia . España
2000.
3.- Mossel.D.Microbiología de los alimentos. Ed. Acribia. España 2000.
4.-DIFCO Manual de medios de cultivo. Ed. Difco.
5.-MERCK. Manual de medios de cultivo Ed. Merck, Alemania.
6.-Ministerio de Salud DIGESA . Manual de Análisis Microbiológico de
Alimentos.
7.-FAO-ONU- Manuales para el control de calidad de Alimentos para
la agricultura y la Alimentación. Roma.

8.- http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Bacteriaceae&oldid=
55428644

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