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Senescencia en células troncales mesenquimales

humanas:
Cambios funcionales e implicaciones en la terapia
basada en células troncales

Gómez Cuautle José Dante Daniel


Índice

I. Introducción
II. Activación de senescencia en hMSC y caracterización fenotípica
III. Alteraciones funcionales en hMSCs senescentes
IV. Herramientas para monitorear la senescencia de hMSC in vitro
V. Herramientas para prevenir la senescencia in vitro de las hMSC
VI. Conclusiones
Introducción

La medicina regenerativa está interesada en el desarrollo de


terapias celulares contra diferentes tipos de enfermedades
asociadas a la edad, utilizando células troncales
mesenquimales (MSCs).

Para las diferentes terapias que se han investigado con este


tipo de células, es necesario un número sustancial de
células. Sin embargo, la proliferación de MSC es limitada y
es bastante probable que el cultivo a largo plazo provoque
cambios continuos en las MSC.
Marcadores en MSC Expresión
Las hMSC se caracterizan por su CD73 Ecto-5’-nucleotidasa (SH3) Positiva
capacidad para adherirse al plástico, CD90 Antígeno-1 de las células del timo (Thy-1) Positiva
desarrollarse como unidades CD105 Endoglina (SH2) Positiva

formadoras de colonias de fibroblastos CD166 Molécula de adhesión celular de activación


leucocitaria (ALCAM)
Positiva

y tener potencial de diferenciación. CD44 Receptor de fibronectina Positiva


CD146 Molécula de adhesión celular de melanoma Positiva
inmunorreguladora. (MCAM)
CD34 Antígeno de célula hematopoyética progenitora Negativa
CD45 Antígeno leucocitario común (LCA) Negativa
CD11b Integrina αM Negativa
CD14 Clúster de diferenciación 14 Negativa
CD31 Molécula de adhesión de plaquetas y endotelio Negativa
(PECAM-1)
HLA-I Antígeno leucocitario humano clase I (A, B, C) Positiva
pero en
bajas
cantidades
HLA-II Antígeno leucocitario humano clase II (DR, DP, Negativa
DQ)
Tabla I: Expresión de diferentes antígenos de superficie en MSC2,4,5

• Bone marrow derived mesenchymal stem cells incorporate into the prostate during regrowth. Placencio VR, Li X, Sherrill TP, Fritz
G, Bhowmick NA - PLoS ONE (2010)
Además de su fuerte potencial de diferenciación, las hMSC tienen una
notable capacidad como inmunomoduladora o inmunorreguladora.

Esta capacidad inmunorreguladora


de las hMSC incluye la inhibición de
la proliferación de las células B y T,
la inhibición de la producción de
citoquinas, junto con la activación
disminuida de las células NK y la
maduración de las células
dendríticas.

• Stem cell therapy in animal models of allergic airway diseases, Kyu-Sup Cho (2016)
Debido a su alto potencial proliferativo, multipotencia, efecto paracrino y actividad
inmunomoduladora, las MSC son candidatos ideales para la medicina regenerativa y la
inmunoterapia.
De hecho, las MSCs son las principales células madre para la terapia celular y en la
última década se han utilizado en la clínica para tratar una variedad de trastornos
traumáticos y degenerativos

Number of registered clinical trials of mesenchymal stem cells-based Percentages of the common diseases now treated with mesenchymal
therapy on ClinicalTrials.gov. stem cells. Data from ClinicalTrials.gov.

• Mesenchymal stem cells: a new trend for cell therapy, Xin WEI (2013)
Distribución de los ensayos clínicos con células troncales mesenquimales que se están
llevando a cabo en el mundo a noviembre de 2016

• Mesenchymal stem cells: a new trend for cell therapy, Xin WEI (2013)
Enfermedades estudiadas en los ensayos clínicos en fase III
con células troncales mesenquimales

• Mesenchymal stem cells: a new trend for cell therapy, Xin WEI (2013)
Medicamentos de terapia celular con células madre mesenquimales autorizados en el mundo

• Mesenchymal stem cells: a new trend for cell therapy, Xin WEI (2013)
Las células de cultivo primario se someten a un número limitado de divisiones
celulares, en un proceso llamado senescencia celular, y las hMSC no son una
excepción. Aunque las hMSC están presentes en varios tejidos, son escasas en
el cuerpo.

En general, las MSC envejecidas


tienen un desempeño inferior al
de sus contrapartes más jóvenes
en varios modelos de enfermedad
y la creciente evidencia sugiere
que la senescencia celular
contribuye al envejecimiento y a
las enfermedades relacionadas
con la edad.

Biological consequences of cellular senescence

• Physiological and pathological consequences of cellular senescence, Dominick G. A. BurtonValery Krizhanovsky (2014)
Debido a los regímenes de expansión prolongada que se necesitan en la clínica para
obtener cantidades suficientes de hMSC para la terapia, y en función de la calidad de
las células específica del paciente, es bastante probable que el cultivo a largo plazo
provoque cambios continuos en hMSC. En particular, una proporción sustancial de
células puede experimentar senescencia.

Young and senescent human fibroblasts


• Lynne Cox, Cellular senescence and ageing (2013)
Activación de senescencia en hMSC y
caracterización fenotípica
Tanto los factores
exógenos como los
endógenos estresan y
dañan
constantemente las
células, incluidas las
células madre.

Dr. Leonard Hayflick

Senescence as a central hallmark of aging


Pathways regulating senescence-mediated arrest. Proposed model of the epigenetic regulation of the
expression of the genes for p16Ink4a and Arf

El senescence growth arrest se regula a través de dos vías principales, p16INK4a / Rb y p53 / p21CIP1, ambas
convergen en la represión de CDK4/6. El locus INK4A/ARF normalmente es silenciado por complejos
represivos Polycomb (PRC) y se activa durante la senescencia. La vía p53 / p21CIP1 se activa después de la
respuesta al daño del ADN (DDR) de segmentos de ADN resistentes a la reparación con alteraciones de la
cromatina que refuerzan la senescencia (DNA-SCARS).
• Jun Dimerization Protein 2 Controls Senescence and Differentiation via Regulating Histone Modification, Yu-Chang Huang (2011)
• Senescence and aging: Causes, consequences, and therapeutic avenues, Domhnall McHugh (2017)
53BP1 foci

Senescence-associated-beta-galactosidas

• gammaH2AX foci form preferentially in euchromatin after ionising-radiation, Cowell IG (2007)


• 53BP1 Antibody Immunocytochemistry Immunofluorescence, Abcam (Recuperada 2018)
γH2AX foci
• Immunosenescence and Senescence Immunosurveillance: One of the Possible Links Explaining the Cancer Incidence in Ageing Population, Arnaud Augert
(2013)
Immunoblotting analysis of human mesenchymal stem cells (hMSC)
exposed to ionizing radiation.

Cell cycle distribution analysis of human mesenchymal stem


cells (hMSC) exposed to ionizing irradiation

• DIFFERENTIAL EFFECTS OF X-RAYS AND HIGH-ENERGY 56Fe IONS ON HUMAN MESENCHYMAL STEM CELLS, KYLE KURPINSKI, (2008)
En particular, estos factores son relevantes por su capacidad para exacerbar la
respuesta inflamatoria a nivel sistémico

Levels of proteins (normalized to 105 cells/ml) significantly oversecreted in SEN+ cells compared with WT
cells.

• Cell Senescence Abrogates the Therapeutic Potential of Human Mesenchymal Stem Cells in the Lethal Endotoxemia Model, JUAN CARLOS SEPÚLVEDA
(2014)
Long-term cultivation negatively influences the differentiation and
migration potential of aMSCs and yMSCs. [Boyden chamber assay.]

• Functional Comparison of Chronological and In Vitro Aging: Differential Role of the Cytoskeleton and Mitochondria in Mesenchymal Stromal Cells, Sven
Geißler (2012)
Alteraciones funcionales en hMSCs
senescentes

Relative expression of CEBPa, PPARRc and ALPL


Growth kinetics and differentiation of one BMSC genes in UC-MSC
primary culture

• Proliferation kinetics and differentiation potential of ex vivo expanded human bone marrow stromal cells: Implications for their use in cell therapy,
Andrea Banfi (2000)
• Replicative senescence of human bone marrow and umbilical cord derived mesenchymal stem cells and their differentiation to adipocytes and
osteoblasts, Huan Chen (2010)
Recientemente se abordo cómo la
senescencia celular influye en el potencial
terapéutico de hMSC, probando su actividad
inmunorreguladora.
Las celulas tenían una capacidad migratoria
severamente reducida en respuesta a
señales proinflamatorias, que se asoció con
una inhibición de la vía AP-1.
Notablemente, muchos de los componentes de SASP secretados en exceso por las
hMSC senescentes están asociados al proceso del sistema inmune.

Levels of proteins (normalized to 105 cells/ml) significantly oversecreted in SEN+ cells compared with WT
cells.

• Cell Senescence Abrogates the Therapeutic Potential of Human Mesenchymal Stem Cells in the Lethal Endotoxemia Model, JUAN CARLOS SEPÚLVEDA
(2014)
• Paracrine Mechanisms of Mesenchymal Stem Cell-Based Therapy: Current Status and Perspectives, Xiaoting Liang (2013)
Senescent hMSC show a strong inhibition of the AP‐1 pathway in response to migratory stimuli.

• Cell Senescence Abrogates the Therapeutic Potential of Human Mesenchymal Stem Cells in the Lethal Endotoxemia Model, JUAN CARLOS SEPÚLVEDA
(2014)
Herramientas para monitorear la senescencia
de hMSC in vitro
Se han probado diferentes métodos para rastrear la senescencia de hMSC, con el objetivo
específico de identificar marcadores cuantitativos

Methods to monitor changes in senescent hMSCs


Methods to monitor changes in senescent hMSCs

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