FUNDAMENTO

La inulinasa hidroliza la inulina, un polisacárido que puede aislarse de plantas como la

alcachofa de Jerusalén, la achicoria o la dalia, y se transforman en fructosa pura o
fructooligosacáridos. Los fructooligosacáridos tienen un gran potencial en la industria
alimentaria porque se pueden usar como compuestos reducidos en calorías y edulcorantes no
cariogénicos como así como fibra soluble y compuestos prebióticos.

Materiales y métodos

MICROORGANISMO Y CONDICIONES DE CRECIMIENTO

Kluyveromyces marxianus var. bulgaricus ATCC 16045 fue el microorganismo

utilizado para la producción de inulinasa. Primero, el microorganismo se cultivó en
tubos de ensayo lleno de medio de cultivo que contiene agar durante 24 horas, y luego
en el medio sin agar para las próximas 24 horas. Los cultivos de inóculo se cultivaron
en un medio que contiene 2% de sacarosa y pH ajustado a 6.8. Durante esta fase, se
usaron matraces Erlenmeyer de 500 ml, que contiene 100 ml de medio de cultivo. La
temperatura fue 30 ° C, a 150 rpm durante 24 horas.

FERMENTACIÓN:

La duración de la fermentación fueron 48 horas para la primera serie de experimentos

y 42 horas para la segunda serie de experimentos. Inulinasa fue producida en
matraces de 1000 ml que contienen 300 mL de medio de cultivo.

La fermentación se llevó a cabo con 10% de inóculo en un agitador rotatorio y en

diferentes temperaturas, dependiendo del experimento. El medio contenido de
fermentación: sacarosa 14 g / l, extracto de levadura 10 g / l, peptona 20 g / l, K2HPO4
1 g / l .El rango de pH fue de 2.3 a 3.7, y el rango de temperatura fue de 24 a 36 ° C en
la primera serie de experimentos, y en la segunda serie de experimentos pH el rango
fue 2.7-4.7, y el rango de temperatura fue 28-42 ° C

DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD INULINASA

La determinación de la actividad de inulinasa se basa en la tasa de liberación de

unidades de azúcar libres en condiciones controladas. La actividad se ensayó de la
siguiente manera: 1 ml solución de enzima se mezcló con 5 ml de sacarosa o inulina,
2.5 ml de tampón de acetato y 1.5 ml de agua destilada .Por lo general, la enzima se
diluye adecuadamente. La mezcla se mantuvo a 50 ° C en una incubadora y la tasa de
aparición de fructosa fue determinada por el método del ácido dinitrosalicílico (DNS)
Una unidad de actividad inulinasa se define como la cantidad de enzima catalizando la
liberación de 1 mol de fructosa / min bajo las condiciones especificadas

CONCLUSION

 El principal logro de este trabajo es la optimización de la producción de

inulinasa por Kluyveromyces marxianus mediante el uso de sacarosa en
lugar de inulina como fuente de carbono.El valor de pH del medio demostró
ser más importante parámetro en los experimentos cuando se usa sacarosa
para la determinación de la actividad de la enzima, mientras que la temperatura
tiene una influencia ligeramente más débil. El rango óptimo para pH es 3.4-3.6,
y para temperatura 29-31 ° C.

 Se obtienen conclusiones similares con la inulina como sustrato. Los valores

óptimos de pH están entre 3.3 y 3.5 y los valores óptimos de temperatura están
entre 31 y 33 ° C.

El modelo estadístico tiene una desviación menor que la fisiológica uno. Esto es
debido, desde un punto de vista, al hecho de que el modelo estadístico se puede
adaptar a casi cualquier resultado experimental, y, desde otro punto de vista, tampoco
el modelo fisiológico no es tan adecuado para esto proceso como se desee, o los
resultados experimentales no son tan bueno. El diseño experimental se puede realizar
no solo con modelos polinomiales pero también con modelos fisiológicos, que es una
contribución de este trabajo. Sin embargo, la aplicación del modelo fisiológico para la
optimización proporciona una mejor interpolación de datos, que resultados en regiones
más exactas de optimalidad y modelo parámetros.

Las constantes de Energías de activación y equilibrio se pueden interpretar en función

del mecanismo de actividad enzimática