UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

CARRERA DE QUÍMICA Y FARMACIA

ASIGNATURA: HEMATOLOGÍA TEORICA – PRÁCTICA

ESTUDIANTE: JOSÉ MANUEL AVECILLAS GUZMÁN

FACILITADORA: MSc. HAYDEE ALVARADO ALVARADO

INFORME DE PRÁCTICA N°11

TEMA: ANÁLISIS DEL FACTOR DE HEMOGLOBINA

SEMESTRE Y PARALELO: SÉPTIMO SEMESTRE G-3A

PERIODO LECTIVO: 2017 – 2018 CI

FECHA DE LA PRÁCTICA: 09 DE ENERO DEL 2018

FECHA DE ENTREGA: 09 DE ENERO DEL 2018

GUAYAQUIL – ECUADOR – 2018

CONTENIDO

9.1. INTRODUCCIÓN ............................................................................................................ 3

9.2. OBJETIVOS ................................................................................................................... 3
9.3. FUNDAMENTO TEÓRICO ................................................................................................ 3
9.3.1. DEFINICIÓN DE HEMOGLOBINA ............................................................................... 3
11.3.2. ESTRUCTURA ............................................................................................................ 3
11.3.3. FUNDAMENTO DEL MÉTODO DRABKIN ................................................................... 4
11.3.4. COMPOSICIÓN DEL REACTIVO DE DRABKIN ........................................................... 5
9.4. MATERIALES Y EQUIPOS ................................................................................................ 5
9.5. PROCEDIMIENTO ........................................................................................................... 5
9.6. OBSERVACIONES ........................................................................................................... 5
9.7. VALORES REFERENCIALES ............................................................................................. 6
9.8. CÁLCULOS ..................................................................................................................... 6
9.8. RESULTADO .................................................................................................................. 6
9.9. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES .......................................................................... 6
9.10. BIBLIOGRAFÍA ............................................................................................................. 6
9.1. INTRODUCCIÓN

La Hemoglobina es una proteína globular, que se encuentra en grandes cantidades dentro de los
glóbulos rojos y es de vital importancia fisiológica, para el aporte normal de oxígeno a los tejidos.
Varios son los genes que determinan su biosíntesis. El estudio de su estructura molecular y
fisiología ha llamado la atención de innumerables investigadores; de su estudio derivado
descubrimientos de gran utilidad. La mayoría de variantes de la hemoglobina resulta de la
sustitución puntual de un aminoácido por otro. Hasta 1992, el Centro Internacional de
Información sobre Hemoglobinas había reunido las 640 variantes de esta molécula, pudiendo
agregarse hemoglobinopatías, particularmente las que se acompañan de trastornos clínicos y las
talasemias son habituales. Tan solo en EE. UU. se ha calculado que existen 8 millones de personas
con alguna variante de la hemoglobina.

9.2. OBJETIVOS

1. Realizar el análisis del factor de Hemoglobina, comprender su función y fundamento.

2. Determinar la cantidad de hemoglobina de un paciente masculino adulto y comparar el

resultado con los valores normales establecidos.

9.3. FUNDAMENTO TEÓRICO

9.3.1. DEFINICIÓN DE HEMOGLOBINA

La hemoglobina (HB) es una proteína globular, que esta presente en altas concentraciones en lo
glóbulos rojos y se encarga del transporte de O2 del aparato respiratorio hacia los tejidos
periféricos; y del transporte de CO2 y protones (H+ ) de los tejidos periféricos hasta los pulmones
para ser excretados. Los valores normales en sangre son de 13 – 18 g/ dl en el hombre y 12 –
16 g/ dl en la mujer.

11.3.2. ESTRUCTURA

La hemoglobina es una proteína con estructura cuaternaria, es decir, está constituida por cuatro
cadenas polipeptídicas (fig. 1): dos α y dos β (hemoglobina adulta- HbA); dos α y dos δ (forma
minoritaria de hemoglobina adulta- HbA2- normal 2%); dos α y dos γ (hemoglobina fetal- HbF).
En el feto humano, en un principio, no se sintetizan cadenas alfa ni beta, sino zeta (ζ) y epsilon
(ξ) (Hb Gower I). Al final del primer trimestre la subunidad α han reemplazado a las subunidades
ζ (Hb Gower II) y las subunidades γ a los péptidos ξ. Por esto, la HbF tiene la composición α2γ2.
Las subunidades β comienzan su síntesis en el tercer trimestre y no reemplazan a γ en su totalidad
hasta algunas semanas después del nacimiento.

Las cadenas polipeptídicas alfa contienen 141 aminoácidos, las no alfa 146 (β, γ, δ) y difieren en
la secuencia de aminoácidos. Se conoce desde hace décadas la estructura primaria de las cuatro
cadenas de Hb normales. La estructura secundaria es muy similar: cada una exhibe 8 segmentos
helicoidales designados con las letras A a la H. Entre ellos se encuentran 7 segmentos no
helicoidales. Cada cadena α esta en contacto con las cadenas β, sin embargo, existen pocas
interacciones entre las dos cadenas α o entre las dos cadenas β entre si.
Las cuatro cadenas polipeptídicas de la Hb contienen cada una un grupo prostético, el Hem, un
tetrapirrol cíclico (fig. 2), que les proporciona el color rojo a los hematíes. Un grupo prostético es
una porción no polipeptídica que forma parte de una proteína en su estado funcional. El átomo
de hierro se encuentra en estado de oxidación ferroso (+2) y puede formar 5 o 6 enlaces de
coordinación dependiendo de la unión del oxígeno a la Hb (oxiHb, desoxiHb). Cuatro de estos
enlaces se producen con los nitrógenos pirrólicos de la porfirina en un plano horizontal. El quinto
enlace de coordinación se realiza con el nitrógeno del imidazol de una histidina denominada
histidina proximal. Finalmente, el sexto enlace del átomo ferroso es con el O2, que además está
unido a un segundo imidazol de una histidina denominada histidina distal. Tanto el quinto como
el sexto enlace se encuentran en un plano perpendicular al plano del anillo de porfirina. La parte
porfirínica del Hem se sitúa dentro de una bolsa hidrofóbica que se forma en cada una de las
cadenas polipeptídicas.

11.3.3. FUNDAMENTO DEL MÉTODO DRABKIN

La hemoglobina es una proteína conjugada contenida en el interior de los eritrocitos a razón de

300000000 moléculas de hemoglobina por cada eritrocito en los humanos. Sirve como vehículo
para el transporte de oxigeno de los pulmones, donde la tensión de O2 es elevada, hacia los
tejidos, donde es baja. Una molécula de hemoglobina es un tetrámero que consta de dos pares
de cadena de polipéptidos, dos subunidades alfa y dos beta que está enfrentadas entre sí en
torno a una cavidad en el centro de la molécula. Cada subunidad contiene un grupo hemo (región
ligante de oxigeno, que contiene un átomo de hierro ferroso), por lo cual una molécula de
hemoglobina puede unir 4moléculas de oxigeno. La hemoglobina reducida es hemoglobina con
hierro no asociado al oxigeno. Cuando cada grupo hem se asocia con una molécula de oxigeno,
la hemoglobina toma la forma de oxihemoglobina. Tanto en la hemoglobina reducida como en
la oxihemoglobina, el hierro permanece en estado ferroso (Fe ++. Con el hierro oxidado al estado
ferrico se forma Meta hemoglobina y la molécula pierde su capacidad para transportar oxigeno y
dióxido de carbono. El método que se utilizara para realizar esta determinación se denomina
Método de la Cianometahemoglobina y se fundamenta en que al combinar un volumen
determinado de sangre con una solución que contiene k3Fe (CN)6 y KCN (solución de Drabkin),
el ferrocianuro convierte el hierro ferroso de las hemoglobinas en férrico, para
formar metahemoglobina y la molécula pierde su capacidad para transportar O2. Luego la meta
hemoglobina se combina con el cianuro de potasio para formar cianometahemoglobina de color
rojo anaranjado brillante, apto para la determinación colorimétrica.
11.3.4. COMPOSICIÓN DEL REACTIVO DE DRABKIN

 Bicarbonato de sodio---- 1g
 Cianuro de potasio-------0,05g
 Ferrocianuro de potasio---0,2g
 H20 deshilada-------------1000 ml

Esta solución tiene un pH de 8,6. Debe ser de color amarillo y transparente y al medir su densidad
óptica contra agua como blanco, esta debe ser cero. La solución debe guardarse en frasco oscuro
y debe descartarse si esta turbia o decolorada. El reactivo es un poco toxico, pero debe manejarse
con cuidado.

9.4. MATERIALES Y EQUIPOS

Jeringuillas 3 ml. Algodón

Torniquete Alcohol antiséptico
Sillon de descanso Tubo con anticoagulante
Centrífuga Estandar de Hemoglobina
Espectrofotómetro Reactivo de Drabkin
Micropipetas Puntas para micropipeta

9.5. PROCEDIMIENTO

1. Desinfectar el área de extracción sanguinea con las turundas de algodón y alcohol

2. Extraer de 3 a 5 ml. de sangre periférica y verterla en un tubo con coagulante (EDTA)

3. Centrifugar la muestra de sangre por 30 segundos.

4. Añadir a 3 tubos de ensayo la misma cantidad (2,5 ml.) del reactivo de Drabkin.

5. En el primer tubo de ensayo no añadir nada (será nuestro blanco), en el segundo tubo de
ensayo, añadir 10 ul. del estándar para hemoglobina; y en el tercer tubo de ensayo añadir 10 ul.
de la muestra sanguínea y homogeneizar cada una respectivamente.

6. Proceder a leer espectrofotométricamente los tres tubos de ensayo utilizando un

espectrofotómetro adecuado de región ultravioleta a 540 nanómetro de longitud de onda y anotar
las absorbancias.

7. Realizar los cálculos pertinentes para la determinación de hemoglobina.

9.6. OBSERVACIONES

1. Se debe utilizar una punta diferente por cada tubo de ensayo ya que, si se utiliza la misma
punta, podría darse una contaminación dando valores incorrectos en las lecturas de las
absorbancias.
9.7. VALORES REFERENCIALES

Normalmente la cantidad de hemoglobina en sangre de una persona sana y adulta debe de

estar dentro del siguiente rango: DE 11,5 a 15 g/dl.

9.8. CÁLCULOS

Longitud de onda: 540 nm.

𝐶𝑂𝑁𝐶 𝑆𝑇
Absorbancia del blanco: 0,001 𝐻𝐵 = 𝑋 𝐴𝐵𝑆 𝑀𝑇𝐴
𝐴𝐵𝑆 𝑆𝑇
Absorbancia del estándar: 0,328

Absorbancia de la muestra: 0,374

12 𝑔/𝑑𝑙
Concentración del estándar: 12 g/dl. 𝐻𝐵 = 𝑋 0,374
0,328

RESULTADO: 13,68 g/ dl.

9.8. RESULTADO

El factor de hemoglobina del PACIENTE MASCULINO N°3 fue de 13,68 g/ dl

9.9. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

Se realizó el análisis del factor de hemoglobina mediante el método de dabkin a un paciente

masculino de 21 años de edad cuyo resultado fue de 13,68 g/dl. Resultado calificado como
NORMAL ya que entra dentro del rango establecido.

9.10. BIBLIOGRAFÍA

1. Ruiz Argüelles G. J, Fundamentos de Hematologia. 2da Edición. Editorial Medica Panamericana.

México 1998.

2. Cuellar A. H. Fundamentos de Medicina – Hematologia. 5ta Edición. Editorial corporación para

investigaciones biológicas. Medellín, Colombia 1998.

3. Lehninger, A. L, Bioquímica. 2da Edición. Editorial omega S.A. Barcelona 1987.

4. Robert K. Murray, Bioquímica de Harper. 15ta edición. Editorial Manual Moderno. México D.F.
2001

5. Thomas M. Devlin, Bioquímica. Libro de texto con aplicaciones clínicas. 3ra edición. Editorial
Reverté, S.A. España 1999.

6. Farreras, Medicina Interna. 13a Edición. Editorial Mosby/Doyma. Madrid 1995.

 7. Kasper, D. L., HARRISON- Principios de Medicina Interna. 16a Edición. Editorial McGraw Hill
Interamericana editores. Mexico 2006.

8. Cooley’s Anemia Foundation, Inc. Thalassemia Fact Sheet. Flushing, NY, 2000.

9. Paul J. Haemoglobin synthesis and cell differentiation. Br Med Bull 1976; 32: 277-281

10. Bustamante Z y col., Genética, características de la Hemoglobina S, Anemia Falciforme y

Haplotipos. Facultad de Bioquímica y Farmacia – UMSS 2002.

11. Peñuela O. A., Hemoglobina: una molécula modelo para investigar. Publicado Junio 2005.

12. Garcia Hernández, R. Metahemoglobinemia. Revista de Ciancias Medicas La Habana 1999; 5

13. Hemoglobina de células falciformes. http://www2.uah.es/biomodel/model1/prot/sickl e.htm

Firma del Estudiante Calificación

Dra:Q.F. Haydee Alvarado, Mgs.
DOCENTE