Professional Documents
Culture Documents
➢ La genética molecular
➢ La genética de transmisión
➢ La genética de poblaciones
Muchos de los avances conseguidos fueron en el ámbito de la genética vegetal, con los
diversos programados de mejora genética para el aumento de producción, resistencia a estreses
abióticos y bióticos; y también en la genética humana, con la identificación de la base genética
de enfermedades.
El año de la partida inicial de la genética se remonta a 1900, cuando tres botánicos (Hugo
de Vries, Carl Correns y Eric Von Tschermak) conciben experiencias similares a las de Mendel
llegando a resultados coincidentes. De esta manera redescubrieron el trabajo de Mendel 35
años después de su publicación (1865). En él se establecieron las reglas básicas sobre la
transmisión por herencia genética. La cuestión que se empieza a abordar a partir de aquí es de
que se compone ese material hereditario.
En las primeras décadas del siglo XX existía un dilema de si eran las proteínas o los ácidos
nucleicos los portadores de la información hereditaria.
1
Capítulo 1. Identificación del material hereditario
2
Capítulo 1. Identificación del material hereditario
La patogenidad de las III S es la cápsula, por lo que Griffith las somete a calor para matarlas
y las inyecta. Lo que observa es que el ratón sigue viviendo. Esto se debe a que la degradar las
bacterias, se degrada también la cápsula de polisacáridos que le aportaba la patogenidad a la
célula, y ahora ya no es patógena.
A continuación, Griffith parte de células vivas II R (no patógenas) y las mezcla con las cepas
III S muertas por el calor (no tienen la cápsula). Al inyectar esta mezcla a ratones descubrió que
los animales no sólo mueren de neumonía, sino que muestran en su sangre bacterias III S vivas.
La conclusión que se llegó es que las III S tuvieron que transformar a las II R en III S patógenas.
También se pudo pensar que las II R se pudieron mutar y transformarse en patógenas, cosa que
no se da ya que se ha demostrado que sí se pueden producir mutaciones, pero dentro de la
misma cepa, es decir:
IR IS
II R II S
III R III S
3
Capítulo 1. Identificación del material hereditario
La conclusión a la que llega es que hay un principio transformante que transforman las II R
a III S. Esta teoría la abordaron Avery, McLeod y McCarty.
Avery y su equipo parte de un medio de cultivo líquido que contiene III S y lo somete a
centrifugación (fuerza centrífuga), quedando al final todas las bacterias en el fondo del tubo. A
continuación, las III S son sometidas a calor para matarlas y eliminar sus cápsulas para luego
homogenizarlas recuperando un filtrado de cepas III S. En ese filtrado tenemos extracto de
carbohidratos, lípidos, proteínas, ADN y ARN. Este filtrado se mezcla primero con células II R
vivas esperando que las III S transformen a las II R, y efectivamente demuestran lo esperado
encontrando células III S vivas. Más adelante, tras descubrir este hecho, se tuvo que someter el
extracto III S a diferentes tratamientos.
4
Capítulo 1. Identificación del material hereditario
mezclan con las células II R, se observa que la transformación ocurre observando cepas
III S vivas. Con esto se demuestra que las proteínas no son el principio transformante.
➢ Tratan el extracto con ribonucleasas, enzimas que degradan el ARN. Se elimina el ARN
y se mezcla con II R, y se observa que la transformación sigue ocurriendo. Por tanto,
se demostró que el ARN no era el principio transformante.
Como conclusión se sacó, en 1944, que el principio transformante es el ADN. Para llegar a
esta afirmación no fue fácil puesto que anteriormente no se disponían de estos mecanismos y
sistemas. No obstante, hubo gran resistencia a este experimento, ya que seguía dudando si el
principio transformante recaía en el ADN o en las proteínas.
Otro sistema para ahondar en este paradigma era el uso de virus (bacteriófagos o fagos)
que afectan a las bacterias aprovechándose de ellas. Para estos experimentos se usó la bacteria
modelo Escherichia coli, que es la mejor conocida. Los virus que afectan a estas bacterias se
denominan colífagos.
En 1952, Hershey y Chase partieron para sus experimentos del colífago T2, que se ancla a
la superficie de la bacteria para infectarla. El fago está constituido por tres partes: cabeza
icosaédrica de proteínas que envuelve al ADN (fago de ADN); cola de proteínas y por último las
fibras de la cola que son de proteínas y le sirven para adherirse a la superficie de la bacteria. El
mecanismo es el siguiente:
5
Capítulo 1. Identificación del material hereditario
En una de las columnas parten de células de E. coli con el fago T2, y este sistema
bacteria-fago lo hacen crecer en un medio con isótopo radioactivo S35. Durante su
crecimiento en el medio, usan
el azufre para su replicación. El
ADN no contiene azufre, pero
las proteínas sí (metionina
(met) y cisteína (cys)). Las
proteínas van adquirir S35, por
tanto, una columna de
experimento marca la proteína
(marcador específico de
proteínas).
En la segunda columna,
el medio en el que insertan el
sistema bacteria-fago contiene
P32 (marcador específico de
ADN). Cuando el fago se está
replicando, usurpa el ADN de la
bacteria que está marcado con
P32.
Tras este agitado quedan partícula fagocíticas dispersas en el medio de cultivo, por lo
que someten las disoluciones a centrifugación. Se observa que en el fondo quedan las
bacterias y en el sobrenadante quedan las partes fagocíticas.
6
Capítulo 1. Identificación del material hereditario
Para mayor claridad del experimento, cuando vuelven a duplicarse las bacterias del
primer cultivo, no hay radioactividad porque las proteínas quedaron en el sobrenadante y
no pasaron a las células. No obstante, en el segundo cultivo, tras la duplicación de sus
bacterias sí se observó la radioactividad, por lo que se observó que el ADN se transmite a las
siguientes generaciones.
En 1957, Fraenkel - Conrat y Singer experimentaron con el virus del mosaico del tabaco
(TMV). Este virus se compone de ARN y una cápsula de proteínas. Existen varias cepas del TMV,
entre ellas está el denominado virus de renovación de Holmes (HR). Esta cepa tiene su propio
ARN y cápsula de proteínas, diferentes al resto de los TMV.
Comprobaron que era posible separar el ARN y la cápsula de los dos tipos de virus y
reconstruir virus con la cápsula de un tipo y el ARN de otro, creando un virus híbrido. Cuando
estos híbridos se utilizan para infectar hojas de tabaco, los virus descendientes de la infección
mostraban siempre un tipo de cápsula coincidente con el tipo de ARN utilizado. Además,
causaban las lesiones características del virus que había donado la molécula de ARN. Por tanto,
7
Capítulo 1. Identificación del material hereditario
• Indirectas
• Directas
Las pruebas indirectas vienen a partir de la observación de que la luz ultravioleta (UV)
produce mutaciones. Su efecto mutagénico lo hace con un valor máximo de 260 nm y justo este
valor es lo máximo de absorbancia que tiene el ADN a la luz ultravioleta. Por lo tanto, es una
prueba indirecta de que el ADN es el portador del material hereditario, ya que las proteínas
absorben a una absorbancia menos mutagénica (280 nm).
Otra prueba indirecta es que, si miramos el contenido de ADN y proteínas, observamos que
la cantidad de ADN es muy constante a lo largo de la vida, mientras que las proteínas y ARN
están sujetos a una menor estabilidad.
8
Capítulo 2
Composición, estructura y propiedades
de los ácidos nucleicos
1. Materia de repaso
9
Capítulo 2 Composición, estructura y propiedades de los ácidos nucleicos
1.3. El azúcar
10
Capítulo 2 Composición, estructura y propiedades de los ácidos nucleicos
11
Capítulo 2 Composición, estructura y propiedades de los ácidos nucleicos
Para todo este proceso, antes debemos purificar el ADN, tratarlo con ácido para
romper los nucleótidos y proseguimos con el experimento hablado.
El primer dato que se puede observar es que los porcentajes de G y C son muy
variables. El contenido de los cuatro nucleótidos a lo largo de la cadena polinucleotídica es
muy variable entre las especies. Por lo tanto, se invalida la hipótesis del tetranucleótido de
Levene. Esta variabilidad en el contenido de los nucleótidos explica la enorme diversidad
biológica.
12
Capítulo 2 Composición, estructura y propiedades de los ácidos nucleicos
Si se hace comparación entre las bases púricas (A, G) y las pirimidínicas (C, T), la
relación es muy próxima a 1. No obstante, la relación (A+T) / (C+G) no es próximo a 1. Esto
es lo que se denomina la regla de equivalencia de bases de Chargaff.
No supo darle una explicación a esta equivalencia, pero serviría para secuenciar la
estructura secundaria del ADN.
1
La estructura secundaria del ADN nos da pistas de cómo funciona.
13
Capítulo 2 Composición, estructura y propiedades de los ácidos nucleicos
Para conocer cómo era la estructura de la molécula de ADN se tuvieron que hacer
varios estudios. Una de las claves fue la técnica de la estructura tridimensional del ADN
mediante difracción de rayos X sobre fibras.
Se parte de fibras de ADN. Para obtener esas fibras partimos de una solución con
ADN. Para obtener esas fibras partimos de una solución con ADN con un alto contenido de
agua. Con una pipeta Pasteur, se introduce en la sustancia viscosa y de ahí salen hilos que
son las fibras de ADN. Estas fibras están orientadas en el sentido que están organizadas en
el modelo. También tenemos que tener muy constante la humedad relativa (92%).
Estas fibras de ADN las ponemos en una trayectoria de un haz de rayos X (los
suministra una lámpara de rayos X). Entonces, el patrón de rayos difractantes se recogen
en una película fotográfica sensible a los rayos X. Esta fotografía se imprime y obtenemos
la imagen de la molécula. Esta imagen da bastante información porque el ADN presenta
huecos que se encuentran también en la imagen. Observamos una especie de bandas o
spots que nos da idea de la
estructura secundaria del
ADN.
Este análisis de
difracción nos proporciona
información sobre
características generales del
ADN (diámetro, número de
pares de bases, …), pero
tiene limitaciones. Al estar
en una solución acuosa, los
enlaces químicos que unen
los átomos no están fijos,
pueden rotar. Esto lo que
genera es un cierto grado de incertidumbre, porque diferentes modelos sobres la
estructura secundaria son compatibles con los datos analizados.
14
Capítulo 2 Composición, estructura y propiedades de los ácidos nucleicos
Este apilamiento de bases tiene importancia ya que les confiere a las cadenas
de ADN cierta rigidez. Si las bases fueran hidrófilas, no habría el apilamiento de bases
y la molécula de ADN estaría enmarañada. Para que el ADN pueda ser funcional tiene
que estar extendido para que los enzimas puedan reconocer las bases.
Analizó las imágenes de difracción por rayos X. Extrajo ADN y lo cristalizó para ello.
Descubrió que el ADN cuando se le extrae agua forma cristales. Esto quiere decir que las
moléculas de ADN son uniformes y si son así es una evidencia de que tiene una única
estructura secundaria. Si hubiera muchas estructuras no formaría cristales. Tras todo esto,
la cuestión que se abordó fue si estaban ante una estructura o si estaban entre varias.
Paulin iría hacia una estructura de tres cadenas. Más adelante, Watson & Crick
trabajan en la estructura secundaria de ADN, pero hubo un momento crítico para
establecer su modelo y fue cuando encontraron la foto 51.
15
Capítulo 2 Composición, estructura y propiedades de los ácidos nucleicos
Watson & Crick se decantaron por una estructura de dos cadenas polinucleotídicas
en forma de hélice. La pregunta que surgió tras esto fue cómo esas cadenas se asociaban.
Comienzan a elaborar modelos2 de escala de los cuales obtienen que en todos ellos
se establecieron los enlaces azúcar – fosfato en un lugar determinado, en este caso se
localizaban fuera de la molécula. Las bases se encuentran hacia el interior, perpendiculares
al eje de la molécula y apiladas. A estos modelos también le incorporaron los que ya se
sabía cómo la distancia internucleotídica, el diámetro del ADN, …
En un principio, Watson & Crick, recurrieron a libros de química en los cuales decían
que las bases nitrogenadas adquirían formas tautoméricas. Según esto, los átomos de
hidrógeno no ocupan posiciones fijas, sino que pueden desplazarse de unas posiciones a
otras dando lugar a formas tautoméricas. Se decía que el grupo ceto (C = O) sufría
variaciones en los átomos de hidrógeno y pasaba a enol (-OH); y los grupos amino (-NH2)
podrían pasar a grupos imino (-NH). Entonces, las bases nitrogenadas podrían agruparse de
formas muy distintas por lo que se cambiaba el apareamiento de las bases dependiendo de
las formas tautoméricas.
Watson & Crick decían que no podía haber esta ambigüedad, que debía ser más
estable. J. Donohue dijo que, según su criterio, los libros de texto de química estaban
equivocados.
La forma tautomérica más frecuente son cetonas y amino. En algún que otro caso se
pueden dar enoles e iminos.
2
Son un elemento fundamental para la ciencia. Elimina todo lo que no es fundamental y
muestra las ideas más principales.
16
Capítulo 2 Composición, estructura y propiedades de los ácidos nucleicos
17
Capítulo 2 Composición, estructura y propiedades de los ácidos nucleicos
18
Capítulo 2 Composición, estructura y propiedades de los ácidos nucleicos
4. Alternativas al ADN – B
Era necesario contar con dos nuevas metodologías. La primera era que se pudiera
sintetizar oligonucleótidos (cadena de ADN relativamente corta de una longitud de
aproximadamente 20 nucleótidos) con una secuencia definida o predeterminada por el
investigador. Si esto se pudiera lograr, se elimina esa fuente de variación.
19
Capítulo 2 Composición, estructura y propiedades de los ácidos nucleicos
estructura del ADN mediante cristalografía de rayos X. La ventaja es que al ser cristales los
átomos de la molécula de ADN ocupan posiciones concretas, eliminando ese resultado
diferente.
En 1978 (veinticinco años después del modelo de Watson & Crick) los químicos
orgánicos desarrollaron una metodología de síntesis de oligonucleótidos con una secuencia
definida. Eran metodologías muy artesanales, muy costosas. Ahora se hace
automáticamente. Ya había la condición primera, solo faltaba cristalizarlos y analizarlos.
➢ La unidad es un dinucleótido.
C G
3
Forma empírica de representar (CpGpCpGpCpG): d ( )n = 3
G C
20
Capítulo 2 Composición, estructura y propiedades de los ácidos nucleicos
➢ El diámetro de la doble hélice es de 1,8 nm, más estrecho que el ADN -B4.
➢ Doble hélice con un solo surco, equivalente al surco menor del ADN – B.
Otra diferencia es que en el ADN – Z los enlaces están menos separados. Cuando
están más cerca existe una mayor repulsión electroestática entre los grupos fosfato que
tienen carga negativa. Esto lo que
hace es que la molécula tiende a
desestabilizarse, es menos estable.
Se encontró que el ADN – Z podía
estabilizarse en condiciones
fisiológicas si hubiera metilaciones
entre las bases nitrogenadas
(adiciones de grupos metilo (-
CH3)). Cuando se metila la citosina
en posición 5’, entonces el ADN – Z
es estable en condiciones
fisiológicas. La pregunta es si hay
metilaciones entre las bases más
frecuentes en eucariotas.
El ADN – Z es fuertemente
inmunológico. En 1981 se crearon
anticuerpos anti ADN – Z y cuando se les aplican estos anticuerpos a los cromosomas hubo
reconocimiento y se concluyó que el ADN – Z está en los cromosomas. Por lo que en
condiciones fisiológicas hay ADN – Z.
4
Significación biológica.
5
Con superhélices negativas se hace estable en condiciones fisiológicas (virus, bacterias y
eucariotas)
6
Es importante para poder explicar los tipos de cáncer.
21
Capítulo 2 Composición, estructura y propiedades de los ácidos nucleicos
Genes como los que expresan la actina se están transcribiendo continuamente por
lo que la estructura del ADN es del ADN – Z. Juega un papel primordial que nos enseña que
la estructura general es ADN – B y que el ADN – Z es una estructura que se presenta en un
estado transitorio que está relacionado con el inicio de la transcripción.
7
El ADN se encuentra en diferentes grados con estructuras superpuestas
22
Capítulo 2 Composición, estructura y propiedades de los ácidos nucleicos
una molécula lineal que se puede enrollar sobre su eje. Luego se vuelven unir los extremos
y nos queda la estructura superenrollada.
La superhélice positiva (SH +) la definimos como giro en el espacio del ADN sobre su
propio eje en la misma dirección8 que el giro del propio dúplex.
La superhélice negativa (SH -) la definimos como giro en el espacio del ADN sobre su
propio eje y en dirección contraria9 que el giro del propio dúplex.
El número de enlace o “linking number” (L) se define como número de veces que las
dos cadenas del dúplex se cruzan entre sí. Depende de dos parámetros:
L=T+W ∆L = ∆T + ∆W
Para que el número de enlace cambie (∆L ≠ 0) tiene que haber una incisión o rotura
en al menos en una de las cadenas del dúplex o las dos; luego los extremos libres tienen
que rotar en el espacio; por último, los extremos tienen que volverse a unir. De esta manera
puede haber variación en el número de veces que una cadena cruza la otra.
8
Sentido horario
9
Sentido antihorario
10
Estructura terciaria = topología del ADN
23
Capítulo 2 Composición, estructura y propiedades de los ácidos nucleicos
∆W = -1
∆T + ∆W = ∆L = 0
∆T = -1
Si hay una vuelta de menos hay que compensarlo con una
∆W = +1 superhélice positiva
Por isómeros topológicos entendemos por moléculas de ADN que son exactamente
las mismas excepto por sus números de enlace11.
Están presentes en todas las células (virus, procariotas, eucariotas) por lo que se
supone que ejercen una función importante. Las mejores conocidas son aquellas que se
conocen mejor su mecanismo de actuación y una de esas es la topoisomerasa de E. coli12.
11
Número de veces que una cadena cruza la otra.
12
La vamos utilizar para comprender varios mecanismos como la replicación y la transcripción.
24
Capítulo 2 Composición, estructura y propiedades de los ácidos nucleicos
Cuando se estima en todos los sistemas vivos siempre hay varianza. Por lo tanto,
tenemos que coger un valor promedio, un valor tipo, que es muy coincidente en virus,
procariotas y eucariotas como humanos. Este valor es de -0,05. A lo largo de todo el
cromosoma hay variaciones, no es constante.
Este valor nos dice que en términos promedios la densidad superhelicoidal es negativa.
Predominan las
superhélices negativas. En
zonas locales puede haber
superhélices positivas.
Existe una superhélice
negativa por vuelta. Hay
una cada 200 pares de
bases (cuatro millones de
pares de bases) en E. coli.
En nuestro genoma son
muchas más, millones de
superhélices negativas.
En E. coli habría un equilibrio inestable entre una forma y otra. Esa densidad negativa
permite la desnaturalización17 local de las cadenas del dúplex rompiendo los puentes de
hidrógeno. Las superhélices negativas ayudan a separar las cadenas. Esto es muy
13
ADN circular
14
ADN girasa
15
Desde el punto de vista cuantitativo que relevancia tiene.
16
10 pb en la estructura del ADN – B.
17
Separación
25
Capítulo 2 Composición, estructura y propiedades de los ácidos nucleicos
importante ya que en la replicación se necesita separar las cadenas, por lo que facilita la
función del ADN.
Las células bacterianas y virus se proliferan a unas fases muy elevadas. Como se
replican rápidamente necesitan de altas tasas de ADN topoisomerasa. Estos
fármacos se aplican al ser humano que inactivan preferentemente a las células
tumorales así atacan menos a las células del cuerpo.
26
Capítulo 3
Organización del ADN en los cromosomas
En la siguiente tabla se muestra la relación entre la longitud del ácido nucleico y las
dimensiones del compartimento que lo contiene en diversos organismos.
Lo que se puede observar en la tabla es que la longitud tanto de ARN de TMV como el resto
de ADNs excede las dimensiones del compartimento. Si estirásemos todo el material hereditario
de un organismo humano alcanzaría una longitud de 2000 millones de km.
Se llegó a la conclusión de que el ADN tenía que compactarse para poder ocupar el mínimo
compartimento que lo contiene.
El material hereditario
tiene que compactarse con
ayuda de proteínas. Los niveles
de compactación son
extremadamente ordenados
para luego ser después
descompactados, es decir, el
material hereditario siempre
está en compactación y
descompactación.
27
Capítulo 3. Organización del ADN en los cromosomas
El diámetro de la fibra se puede medir y se obtiene que este diámetro puede variar
entre 23 y 30 nm. Se considera que el valor tipo es de Ø = 30 nm, de ahí que también se le
llame fibra de 30 nm.
• ADN
• Proteínas
Con respecto a las proteínas histonas hay cinco tipos principales: H1, H2A,
H2B, H3 y H4. Son proteínas ricas en aminoácidos muy básicos porque los grupos
amino a pH fisiológico tienen carga positiva (-NH3+). Como ya hemos dicho
anteriormente, las histonas son muy ricas en aminoácidos básicos, más en concreto
de la lisina (lys) y la arginina (arg). Esto nos permite entender porque están
fuertemente unidas al ADN, ya que se unen a los grupos fosfato del ADN que están
cargados negativamente.
1
Periodo del ciclo celular que se encuentra entre dos mitosis sucesivas.
2
Se indican solo los cinco tipos principales.
3
1500 millones de años
28
Capítulo 3. Organización del ADN en los cromosomas
dos o tres cambios. Si hay cambios que afectan la estructura, al ser un asunto crítico
no debería haber muchos cambios.
Con respecto a las proteínas no histonas decir que el material hereditario está
funcionando, los genes se están transcribiendo, por lo que tiene que haber ADN
polimerasas, ARN polimerasas, metilasas, fosforilasas, etc. El ARN no forma parte de
la estructura de la cromatina, pero si el ADN está en transcripción encontramos ARN.
4
Secuencias de Matrix Attachment Regions (MAR)
29
Capítulo 3. Organización del ADN en los cromosomas
5
ADN espaciador
6
Encontrado en el esperma de erizo de mar.
30
Capítulo 3. Organización del ADN en los cromosomas
Para que el ADN pueda funcionar tiene que descompactarse por lo que para
ello tiene que haber un reposicionamiento de los nucleosomas para que los genes se
puedan expresar. Nuestro genoma está dinámico, cuando deja de transcribirse se
vuelve compactar.
7
Epigenética
31
Capítulo 3. Organización del ADN en los cromosomas
Los cromosomas están constituídos por dos cromátidas hermanas unidas por un
centrómero.
Para poder obtener información de la estructura del cromosoma hay que romper
dicha estructura. Se sometieron cromosomas a la presencia de polianiones muy fuertes.
Para ello se utilixó el sulfato de dextrano aunque también se puede usar la heparina. El ADN
es un polianión y si se introduce sulfato de dextrano compite con el ADN por los sitios de
unión a las histonas y se unen a ellas. Estos cromosomas metafásicos desprovistos de
histonas presentan una médula central densamente teñida que ha sido denominada
“scaffold” (armazón). Cuando retiramos las histonas, el ADN sobresale y se ubica en todo
el espacio. Hay ADN que se encuentra unido9 a esta estructura del Scaffold. Los dominios
de ADN parecen estar unidos al armazón proteico por unas regiones específicas
8
La tasa de compactación en esta fibra es de 52 veces mientras que en el cromosoma llega de
8000 a 1000 veces.
9
Secuencias ricas en pares de bases de adenina (A) y timina (T).
32
Capítulo 3. Organización del ADN en los cromosomas
2. Tipos de cromatina
La mayor parte del material hereditario se compacta hasta la mitosis. A esta cromatina se
le llama eucromatina (cromatina verdadera). Hay una pequeña parte que tiene niveles de
compactación comparables con la mitosis y se le conoce por heterocromatina, la cual no tiene
una compactación gradual. A su vez, la heterocromatina se divide en dos tipos:
• Heterocromatina constitutiva
• Heterocromatina facultativa
10
Las secuencias que están asociadas a MAR son equivalentes a SAR.
33
Capítulo 3. Organización del ADN en los cromosomas
11
Hay genes que les gusta el contexto compactado, pero es una excepción.
34
Capítulo 3. Organización del ADN en los cromosomas
Antes de empezar debemos tener claro que en los gametos de machos en mamíferos
(esperma) hay un solo cromosoma X y un cromosoma Y13, y en los gametos de las hembras en
mamíferos (óvulo) hay dos cromosomas X.
Tras la fecundación de los gametos, en la fase de blástula tardía es cuando ocurre el proceso
de compactación de dosis. Esta compactación de dosis ocurre en la línea somática pero en la
germinal tiene que activarse para que pase activo a la descendencia. Esta compactación de dosis
ianctiva a uno de los cromosomas X en las células de las hembras.
Ocurre al azar en cada una de las células y en unas células se puede inactivar el cromosma
X heredado por el padre y en otras se inactiva el cromosoma X heredado de la madre. Todas las
células que resultan de la división celular mantienen esa inactivación. En las hembras, el
cromosoma X que está inactivo tiene que activarse en la fase germinal.
12
La dosis correcta es que haya un solo cromosoma X.
13
El cromosoma Y tiene pocos genes.
35
Capítulo 3. Organización del ADN en los cromosomas
de envuelta o caperuza. Una vez envuelta la mayor parte del cromosoma X, entonces, recluta al
aparato de remodelado que hace que se condense y se compacte derivando a una inactivación
génica y, por lotanto, compensando la dosis igualándola a la de los varones.
Hay zonas que no están envueltas ya que la heterocromatización es nula y quedan libres de
inactivar genes que no son sensibles a la dosis.
36
Capítulo 3. Organización del ADN en los cromosomas
37
Capítulo 3. Organización del ADN en los cromosomas
➢ Dotación cromosómica haploide se corresponde con una célula que tiene una copia
de cada cromosoma. Dotación diploide se coresponde a dos copias.
4.1. Idiograma
El idiograma es la fotografía o
diagrama de los cromosomas de una célula
dispuestos de una manera ordenada. A
partir de este diagrama encontramos que
podemos disponerlos ordenadamente de
menor a mayor tamaño. De esta manera nos
es más fácil observar si hay alguna anomalía
cromosómica (enfermedades), citogenética
o química.
38
Capítulo 3. Organización del ADN en los cromosomas
La tinción de Faeulgen se utiliza para ver anomalías de este tipo pero cambios
sutiles en los cromosomas no se verían. Para ello se requiere de tácnicas más precisas
para que se pudieran ver anomalías con más detalle.
Caspersson, en los finales de la década de los 60, observó que cuando se tratan los
cromosomas con determinados tratamientos químicos y/o físicos se producen patrones de
bandas transversas que alternan en claro y oscuro a lo largo de todos los cromosomas. Estos
patrones son claramente reproducibles y siempre se originan los mismos en cada cromosoma.
Estas bandas permiten econocer cambios pequeños en las estructuras de los cromosomas.
• Bandas G
• Bandas R
39
Capítulo 3. Organización del ADN en los cromosomas
Las bandas G es uno de los sistemas más importantes. Se tratan los cromosmas con
tripsina rompiendo las proteínas. Tiene que ser suave pues si lo dejamos mucho tiempo
solo quedaría ADN y queremos ver la estructura de la cromatina.
Las bandas G
comprenden secuencias de
ADN ricas en adenina y timina y
comprenden secuencias de
ADN pobres en genes
codificadores de proteínas. Las
bandas G son las bandas
oscuras o llamadas bandas
positivas. Las bandas claras se
llaman bandas negativas.
14
Reverse = lo contrario
40
Capítulo 3. Organización del ADN en los cromosomas
➢ Las bandas mayores se designan consecutivamente como p1, p2, p3, etc., contadas a
partir del centrómero. Las sub – bandas se denominan p11, p12, etc., y las sub – sub –
bandas p11.1, p11.2, etc.
41
Capítulo 3. Organización del ADN en los cromosomas
42
Capítulo 4
Organización de las secuencias del ADN
en el genoma
1. El “valor-C”
El valor C nos da la ventaja de comparar la cantidad de ADN de los seres vivos. Nos descubre
aspectos importantes para entender la organización del ADN.
En un principio había una reflexión sobre las secuencias de ADN. Era plausible de que
hubiera una relación entre la cantidad de ADN y el número de genes con la complejidad
morfológica de los seres vivos. En principio cabría esperar que organismos más complejos
necesitaran más cantidad de ADN, se esperaba una relación mayor.
1
En las bacterias procariotas el material hereditario forma una masa compacta que ocupa
aproximadamente 1/3 de la célula bacteriana y esta masa compacta se denomina nucleoide.
2
Se necesita un mínimo de información genética para crear una célula.
43
Capítulo 4. Organización de las secuencias del ADN en el genoma
En Mycoplasma genitalium el
tamaño del genoma sería equivalente al
valor C siendo de 0,58 Mb. El número de
genes se encuentra por 500. Al ser un
parásito de organismos es lógico que
tenga poco ADN y pocos genes.
En Archaeas si analizamos el
contenido génico y el tamaño del genoma,
existe una relación entre la cantidad medida del genoma y su complejidad.
Se observa que existe una cierta relación en que a medida que aumenta la
complejidad aumenta el tamaño del genoma. No obstante, en eucariotas no sigue en su
totalidad esta regla.
Una planta es mucho más compleja que un humano por lo que necesita más ADN.
3
Indistinguibles morfológicamente.
44
Capítulo 4. Organización de las secuencias del ADN en el genoma
por lo que surge la paradoja del valor C en la cual se concluye que en eucariotas no existe
relación entre complejidad morfológica y la cantidad de genoma.
Las variaciones del valor C vienen explicadas por el ADN no génico. Tiene que haber una
relación entre la cantidad de genes y complejidad morfológica. La clave está en que hay una
relación entre complejidad morfológica y complejidad de estructura, expresión y regulación de
los genes.
Los eucariotas más complejos tienen sus genes más complejos en su estructua, expresión y
regulación de éstos mismos. Son capaces de producir muchas proteínas que eucariotas menos
complejos. Tienen modificaciones postranscripcionales y postraduccionales.
45
Capítulo 4. Organización de las secuencias del ADN en el genoma
mensajeros van a dar diferentes proteínas. Potencialmente puede producr 38000 proteínas
diferentes.
El proyecto público estudiaba todas las secuencia, tiraban hacia una vía de
conocimiento más global. El proyecto privado solo quería saber las secuencias de genes
codificantes de proteínas para un fin más comercial.
4
Dotación haploide.
46
Capítulo 4. Organización de las secuencias del ADN en el genoma
➢ ADN palindrómico
• En tándem
• Disperso
Los genes de ARN no codificador serían las secuencias de ADN que se transcriben a
ARN que no son ARNm. Hay una tasa muy heterogénea de ARN no codificador.
47
Capítulo 4. Organización de las secuencias del ADN en el genoma
El ARN no codificante se llama materia oscura porque sabemos muy poco de ese ARN
no codificante.
El ADN altamente repetitivo puede ser en tándem o disperso. Son secuencias de ADN
que se repiten un número variable de veces. Esas unidades de repitición pueden repetirse
unas a continuación de las otras en una especie de tartamudeo genético que recibe el
nombre de ADN altamente repetitivo en tándem. Las partes están separadas por ADN no
repetivo.
En función del tamaño de la unidad de repitición y del tamaño del bloque que
constituyen todas las subunidades de repetición se clasifican en:
➢ ADN satélite
➢ ADN minisatélite
• Familia hipervariable
• Familia telomérica
➢ ADN macrosatélite
48
Capítulo 4. Organización de las secuencias del ADN en el genoma
49
Capítulo 4. Organización de las secuencias del ADN en el genoma
El ADN altamente repetitivo disperso son secuencias de ADN repetitivas que están
disperasas e intercaladas entre otras secuencias de ADN. Es importante porque
cuantitativamente explica el 43% de ADN nuclear humano. Son secuencias que además dan
lugar a la gran parte de la inestabilidad del genoma humano. ¿Por qué producen la
inestabilidad genética? Esto se debe porque son secuenicas que pertenecen a los
elementos transponibles o elementos móbiles, es decir, secuencias de ADN que tienen
potencial en el momento reciente o lo tuvieron en el pasado evolutivo para cambiar de
localización cromosómica (por eso son móviles, cambian de localización cromosómica
creando inestabilidad).
➢ LINEs
➢ SINEs
50
Capítulo 4. Organización de las secuencias del ADN en el genoma
3.4.1. LINEs
Es un acrónimo de “Long interspersed nuclear element”. Son elementos
intercalares de alto período. En el genoma humano existen diferentes tipos de LINEs.
➢ LINE 2
➢ LINE 3
3.4.2. SINEs
Son un acrónimo de “short interspersed nuclear element”: elementos
internucleares intercalares e bajo período. La unidad de repetición es más pequeña
que en las LINEs. Hay diversas familias.
➢ MIR
➢ MIR 3
Cromosoma con bandado G. Hay ADN repetitivo en tándem, que está en la región
centromérica, por lo que se trata de heterocromatina constititutiva.
51
Capítulo 4. Organización de las secuencias del ADN en el genoma
Después están los loci microsatélites, que están dispersos por el resto del cromosoma. Son
variables y permiten marcar todo el cromosoma.
Los LINEs están en bandas G positivas, siendo aquí la localización preferente. Los SINEs
están en las bandas G negativas, o bandas clara.
52
Capítulo 5
Replicación del ADN. I. Procariotas
La replicación del ADN es la función más inmediata del material hereditario, porque para
que haya transmisión del material hereditario, se requiere que los ácidos nucleicos de una célula
parental se copien fielmente de tal forma que las células hijas contengan dotaciones genéticas
completas de la célula parental de la que procede.
Cuando se analiza la estructura del ADN, en el final del artículo se señala que desarrollar la
estructura del ADN provocaría que se descubriera como se replicaba. Que las cadenas de ADN
se mantuvieran juntas mediante puentes de hidrógeno con la complementariedad de bases ya
les sugería como iba a ser (publican un artículo como modelo de replicación). Este modelo se
denomina modelo semiconservativo.
Según Watson y Crick, para llevar a cabo la replicación del ADN, las dos cadenas del
dúplex parental se separan mediante la ruptura de los puentes de hidrógeno, y cada una
53
Capítulo 5. Replicación del ADN. I. Procariotas
de las cadenas del dúplex sirve como molde para la síntesis de una cadena hija mediante
las reglas de emparejamiento de bases de Watson y Crick (A-T y C-G).
1
El isótopo normal es N14.
54
Capítulo 5. Replicación del ADN. I. Procariotas
Este cultivo lo transfieren a un medio con N14. Ese cultivo lo dejan que
experimente diferentes rondas de replicación. El ADN parental es N15 y el de nueva
síntesis es N14. Se deja una generación (generación I), después se aísla el ADN se
somete a centrifugación y se observa una banda de menor densidad que la
generación 0 (está más arriba del tubo de la centrífuga). Es una banda que
corresponde a un ADN híbrido N15 = N14. En la generación II retiran el ADN, separan
por centrifugación en el gradiente, y observan dos bandas, una N14 = N14 y por lo
tanto un ADN ligero y otra banda con densidad intermedia de N14 = N15: Se puede
determinar la cantidad de ADN de cada tipo, mediante espectrofotometría.
1.1.2. Definiciones
➢ Replicón: unidad de
replicación. La unidad
elemental dónde se
desenvuelven los eventos
de iniciación de la
replicación, de elongación
y de terminación. Todo
replicón tiene un origen
dónde se inicia el proceso
de replicación y término,
dónde finaliza.
55
Capítulo 5. Replicación del ADN. I. Procariotas
➢ Modelo de replicación
unidireccional: bajo un modelo
unidireccional, la síntesis del ADN
procede desde el origen, en una única
de generación, mediante el avance de
una horquilla de replicación o punto de
crecimiento. El hueco que se abre es el
ojo de replicación. En la horquilla es
dónde se van uniendo los nucleótidos.
➢ Modelo de replicación
bidireccional: la síntesis de ADN tiene
lugar a partir de un origen mediante la
formación de dos horquillas de
replicación que avanzan en direcciones
opuestas. Las dos horquillas se dirigen
en direcciones contrarias hasta el
término.
56
Capítulo 5. Replicación del ADN. I. Procariotas
2
El locus OriC
3
Motivos de la secuencia
57
Capítulo 5. Replicación del ADN. I. Procariotas
Una proteína ayuda a esta función, que es la proteína Tus. Ayuda a que pare
la síntesis de ADN.
La síntesis de ADN la realizó por primera vez Kornberg en 1957. Fue el primero en la síntesis
de ADN in vitro.
En primer lugar, Kornberg demostró que para la síntesis de ADN era necesario una cadena
molde o template, que contiene la secuencia de nucleótidos que se va a copiar.
58
Capítulo 5. Replicación del ADN. I. Procariotas
Para que pasen estas reacciones con suficiente precisión, se necesita un extracto proteico
de la bacteria E. Coli, porque se pensaba que en ese extracto había proteínas que hacían que la
replicación fuese precisa. Se empezó estudiar cuantas enzimas podían polimerizar ADN.
Después de este costoso camino, hoy en día se sabe que en E. Coli existen 5 enzimas
con actividad polimerizadora de ADN. Esas enzimas se denominan ADN polimerasa I, II, III,
IV y V. Abreviadamente también se denominan pol I, pol II, pol III... La pol I está codificada
por un gen llamado polA, la II, por polB, la III por polC, la IV por dinB.
Hay enzimas que intervienen en procesos de reparación, y la pol III es una replicasa,
lleva a cabo los procesos fundamentales de replicación del ADN.
Las que interviene en los procesos de replicación son el ADN polimerasa I y el ADN
polimerasa III, que es la principal enzima replicativa. Estas enzimas desarrollan diferentes
funciones, y el conocimiento de estas funciones es clave. Las dos tienen actividad
polimerizadora, en dirección 5’→3’4. Estas tienen funciones duales, por ejemplo, con
función exonucleasa (enzimas que degradan los extremos de cadena). Hay exonucleasas de
dos tipos:
4
Van adicionando nucleótidos al extremo 3’-OH de la cadena molde.
59
Capítulo 5. Replicación del ADN. I. Procariotas
Pol I tiene las dos funciones de exonucleasa. Sin embargo, el ADN polimerasa III solo
tiene actividad exonucleasa de 3’ → 5’5.
La actividad exonucleásica
5’ a 3’ actúa sobre extremos 5’ de
las cadenas. Su importancia se
verá después.
5
La punta de flecha se supone que es el extremo 3’.
60
Capítulo 5. Replicación del ADN. I. Procariotas
Tiene una estrucutra dimérica, y cada monómero copia una de las dos cadenas del
dúplex parental, a medida que avanza la horquilla de replicación.
La ADN polimerasa I y III avanzan en dirección 5’ a 3’. Eso planteó un dilema que es
el siguiente: «¿si las ADN polimerasa simepre avanzan en dirección 5’ a 3’ cómo puede
replicar dos cadenas de polaridad opuesta?»
Hoy en día se sabe que la replicación de ADN de E.coli se realiza bajo un modelo de
replicación semidiscontinuo. Bajo este modelo, una de las dos cadenas parentales se copia
de manera continua. Esa cadena que se copia de manera continua se denomina cadena
lider ó leading strand. Una de las dos cadenas parentales se copia de manera continua en
la direccion correcta por la ADN polimerasa III.
61
Capítulo 5. Replicación del ADN. I. Procariotas
del primer o cebador. El cebador no puede ser ADN, pero podía ser ARN, porque ya se sabía
que los ARN se pueden sintetizar de novo. No necesitan un cebador o primer.
El primer paso de la iniciación es saber cómo se sintetizan los ARN. Esto se realiza por un
preprimosoma, en el cual interviene un complejo proteico para el precebado, para acondicionar
el sistema para la síntesis del cebador. El preprimosomas está compuesto por PriA, PriB, PriC,
DnaB, DnaC, DnaT, SSB.
➢ PriA
➢ DnaB
➢ SSB: acrónimo de una proteína (single strang binding, proteína de unión a cadena
sencilla). Se une a la cadena sencilla e impide que las cadenas del dúplex vuelvan a
reformar los puentes de hidrógeno, vuelvan a asociarse, y además protege a las
cadenas sencillas de la degradación por nucleasas celulares.
A continuación tenemos un
fragmentos de Okazaki sintetizado,
que tiene un cebador de ARN. Cada
fragmento de Okazaki necesita de un
cebador, que hay que eliminar.
¿Cómo se elimina? El cebador está en el extremo 5’. Interviene pol I, con su función exonucleasa
5’ → 3’ elimina el cebador de cada fragmento de Okazaki. Si se elimina el cebador, queda un
hueco. Para llenar el hueco se utiliza el extremo 3’ OH del fragmento de Okazaki siguiente,
elongando el extremo y rellenando el hueco. Esta función es realizada por pol I.
62
Capítulo 5. Replicación del ADN. I. Procariotas
Al final lo que se tiene es restituído el ADN, pero queda un hueco, o sea, hay que unir los
fragmentos de Okazaki. Sin embargo, las enzimas ADN-polimerasas no tiene capacidad para
establecer uniones entre extremos de cadena. Se requiere el concurso de otra enzima que pueda
unir o sellar extremos de cadena. En E.coli se usa la ADN ligasa, producto del gen lig. Este
proceso hay que realizarlo con todos y cada uno de los fragmentos de Okazaki.
Otras proteínas que juegan un papel importante en la replicación son las helicasas y
las ADN topoisomerasas.
63
Capítulo 5. Replicación del ADN. I. Procariotas
otra. Hay helicasas que van de dirección 5’ → 3’ y otras que van de 3’ → 5’. La
principal proteína helicasa se piensa que es la helicasa DnaB, que es la que forma
parte del prepriosoma.
Esta actividad helicasa de DnaB se ve ayudada por otras que también se piensa
que cooperan con ella. Son helicasas que van en otra dirección (3’ → 5’). Estas
helicasas se denominan PriA (también en el prepriosoma) y Rep.
Este problema se resuelve de manera muy sencilla en los ADN de tipo circular como
es en el caso de E. coli. También muchas bacterias y virus tienen un cromosoma circular.
Permite resolver el problema de acortamiento de los cromosomas. Es decir, esta geometría
facilita la resolución.
64
Capítulo 6
Replicación del ADN. II. Eucariotas
Las etapas fundamentales del ciclo celular son la fase de mitosis (repartición de material
hereditario) e el período de interfase (el material está como fibra de 30nm). En la interfase hay
diferentes períodos:
• G1
• S
• 62
Cuando una célula abandona la fase de mitosis tiene una dotación cromosómica 2n
(diploides). En la fase G1 son 2n. Esta dotación varía en la fase S (replicación) dónde se duplica
el material hereditario, por lo que cuando abandonan la fase S son tetraploides (4n). La fase G2
sigue siendo 4n, y en la mitosis se recupera la diploidía normal de las células.
1
S es de «síntesis».
2
G viene de «gap», vacío, ausencia de replicación.
65
Capítulo 6. Replicación del ADN. II. Eucariotas
Este hecho llevó a pensar que la replicación de ADN de eucariotas debe realizarse en
términos de múltiplos replicones que se activen simultáneamente. En humanos, se estima que
hay 30000 replicones.
66
Capítulo 6. Replicación del ADN. II. Eucariotas
La longitud total de estos ARS es de 200 pares de bases (más pequeños que los OriC).
Cuando se analiza su secuencia se encuentran cuatro subdominios característicos. Estos
subdominios son A, B1; B2, B3.
Además de esta unión, se produce una unión de un factor proteico al subdominio B3.
Este factor proteico se denomina factor 1 de unión a ARS, abreviadamente ABF 1. ABF1 se
une a B3 y produce una tensión torsional, que promueve la separación de las cadenas del
dúplex en el subdominio B2, algo que se ve facilitado, porque el domino B2 es rico en los
pares de bases adenina-timina.
67
Capítulo 6. Replicación del ADN. II. Eucariotas
• Factor Cdt 1
Cuando comienza la replicación se libera del sistema Cdc6p + Cdt1. La proteína Cdc6p
experimenta una fosforilación por una proteína quinasa y se degrada automáticamente3.
Durante el proceso de replicación sólo queda ORC y MCM. No se sabe bien la función
de MCM, pero se piensa que o altera la estructura del cromosoma para que avance la
horquilla de replicación, o bien puede actuar como una helicasa (separando las dos
cadenas).
La síntesis de ADN en eucariotas tiene lugar por medio de enzimas sintetizadores de ADN
que se denominan ADN polimerasas4. Es más compleja que en procariotas como E. coli.
Distinguimos cuatro ADN polimerasas en eucariotas, tres de ellas (α, δ y ε)5 tienen una
localización nuclear e intervienen en la replicación del ADN nuclear. El otro ADN polimerasa (γ)
se localiza en el citoplasma. Está implicada en la duplicación del ADN mitocondrial.
• ADN polimerasa α: se encarga de la síntesis de cebadores (en E. coli era una primasa).
También en eucariotas hay un modelo de replicación semidiscontinuo.
3
No se pueden volver a replicar nunca más.
4
Hay decenas de ADN polimerasas.
5
Para la nomenclatura de los ADN polimerasas se usan letras griegas.
68
Capítulo 6. Replicación del ADN. II. Eucariotas
Ninguna de ellas tiene función exonucleásica 5’ → 3’ (en bacterias, esta función la tenía el
ADN polimerasa I para eliminar los cebadores).
Los fragmentos de Okazaki tienen un tamaño de 200 bases en humanos (en bacterias
era de 1000 a 2000). Coincide con el ADN de un nucleosoma.
¿Por qué tiene la capacidad de sintetizar las dos cosas? Los ADN polimerasa α es un
complejo proteico constituido por una subunidad catalítica capaz de polimerizar ADN.
Tiene también una subunidad llamada B, que tiene una función de reunir todas las
subunidades en un complejo, y tiene, además, dos proteínas pequeñas de bajo peso
molecular que tiene capacidad de sintetizar ARN.
69
Capítulo 6. Replicación del ADN. II. Eucariotas
La eliminación de
los cebadores de ARN y
ADN6 no es totalmente
conocida. Sin embargo,
para la eliminación de los
cebadores interviene una
endonucleasa, que es la
endonucleasa FEN 1.
Necesita la ayuda o bien
de RNA-asa H o bien de
una helicasa7. Tampoco
se sabe si esta
endonucleasa elimina
solo el ARN o elimina
también el ADN (las 30
bases). Si no tiene
capacidad correctora,
sería útil que eliminara
todo porque en ese trozo
de ADN hay mutaciones.
4.2.1. El problema de
la terminación de la
replicación
Cuando se elimina el
último cebador del último
fragmento de Okazaki,
queda un hueco. Si esto
quedara así, cada ronda de
replicación llevaría un
acortamiento de los
cromosomas, o sea,
reducción de los
telómeros.
6
Son cebadores mixtos.
7
No se sabe bien
70
Capítulo 6. Replicación del ADN. II. Eucariotas
4.2.2. La telomerasa
La telomerasa es un complejo ribonucleoproteico, que está constituido por
ARN y proteínas. En humanos, la molécula de ARN tiene una longitud de 450
ribonucleótidos. El componente
proteico es especial, porque esta
proteína que forma parte de la
telomerasa tiene actividad
retrotranscriptasa, es decir, que es
capaz de sintetizar moléculas de ADN
a partir de un molde de ARN. Esta
propiedad de la telomerasa le permite
elongar los telómeros y evitar los
acortamientos que se producen
durante la replicación.
8
Productoras de gametos.
71
Capítulo 6. Replicación del ADN. II. Eucariotas
En la cadena rica en citosinas queda un hueco, que es rellenado por una enzima
ADN polimerasa. Se piensa que interviene el ADN polimerasa α.
9
Del griego envejecimiento prematuro
72
Capítulo 6. Replicación del ADN. II. Eucariotas
progresivo de los telómeros (una tasa más alta que los individuos normales), por lo
que se explica ese envejecimiento.
Otra cosa que puede pasar es que cuando la célula elude el check point, la
célula tiene un papel oncogénico, se activa la telomerasa, alonga los telómeros, y se
llega a una fase de inmortalización celular o línea cancerígena.
73
Capítulo 6. Replicación del ADN. II. Eucariotas
74
Capítulo 7
Transcripción y maduración del ARN
Una secuencia de nucleótidos va a dar lugar a una serie de aminoácidos constituyendo una
proteína. Existen dos mecanismos para pasar la información del ADN a las proteínas:
transcripción y traducción. En este tema trataremos la transcripción.
75
Capítulo 7. Transcripción y maduración del ARN
76
Capítulo 7. Transcripción y maduración del ARN
2. Etapas de la transcripción
➢ Iniciación
➢ Elongación
➢ Terminación
Para llevar a cabo estas etapas, es necesario polimerizar ARN, y la polimerización de ARN
se realiza mediante enzimas específicas denominadas ARN polimerasas.
Si vamos a la bacteria E. coli y miramos en su proteoma, sólo hay una enzima ARN
polimerasa, que es capaz de dar lugar a los tres productos diferenciados de ARN (ARN
mensajero, ARN-ribosómico y ARN-transferente1).
La enzima ARN-polimerasa está constituida por diferentes subunidades. Éstas forman por
un lado el núcleo de la enzima. El núcleo está formado por dos subunidades α; una subunidad
β, una subunidad β’ y una ω. Por otro lado, está el factor σ.
1
Estos son los procariotas, en eucariotas hay más tipos
77
Capítulo 7. Transcripción y maduración del ARN
Cuando pasan 8
ribonucleótidos, el factor σ se
disocia de la ARN-polimerasa, y, por
tanto, la fase de elongación la lleva
a cabo exclusivamente el núcleo de
la enzima.
2
Enzima completo.
3
Primera base de ADN que tiene representación en ARN.
78
Capítulo 7. Transcripción y maduración del ARN
Estos son los rasgos que necesita la ARN-polimerasa. Este es el promotor ideal.
Todas las secuencias de genes que se aproximen a este promotor ideal tendrán tasas
de transcripción altas. Son los promotores fuertes. Todos los promotores bacterianos
que experimenten mutaciones que los acerquen al promotor ideal, se denominan
mutaciones UP.
Aquellos promotores bacterianos con secuencias que les alejen del promotor
ideal experimentarán una disminución de la tasa de transcripción. Son promotores
débiles (weak).
La ARN polimerasa contacta primeramente con la secuencia -35 (el factor σ).
La secuencia -35 es entonces, el lugar de reconocimiento de la ARN polimerasa. Una
vez reconocidos los promotores, la ARN polimerasa se desplaza a la secuencia -10, y
4
Los subíndices señalan el grado de conservación.
79
Capítulo 7. Transcripción y maduración del ARN
80
Capítulo 7. Transcripción y maduración del ARN
Tiene que haber un momento que se pare de transcribir. Siempre debe acabar en el
mismo sitio. Tiene que haber una señal en las unidades de transcripción que le diga que
pare.
Lo primero que hay que decir sobre los genes codificadores de proteínas en bacterias es
que generalmente son policistrónicos, es decir, que pueden dar lugar a dos o más proteínas.
Esto es una característica diferenciadora de los eucariotas, que son monocistrónicos.
Los que tienen dos cistrones pueden dar lugar a dos proteínas. Se identifica dos
regiones codificadoras. En cada una de las regiones codificadoras se encuentran los
codones que darán lugar los aminoácidos en las proteínas. Las regiones codificadoras
comienzan por el codón de iniciación, generalmente, AUG. Si vamos al final de la región
codificadora se encuentran los codones de terminación. Son codones que sirven de señal
de parada de traducción (en los ribosomas). Hay tres codones de terminación: UAG
(ámbar), UAA (ocre) y UGA (ópalo).
81
Capítulo 7. Transcripción y maduración del ARN
¿Cómo se enganchan los ribosomas al ARNm? Los ribosomas bacterianos tienen una
velocidad de sedimentación de 70S. La subunidad grande sedimenta a 50S. El mensajero
se asocia a la subunidad pequeña. Hay un reconocimiento mediante puentes de hidrógeno
con el ARNr. El ARNr de 16S (pequeño). Tiene una secuencia que es AUUCCUCCA que es
complementaria con una secuencia del mensajero, que es la secuencia shine-dalgarno. Esta
secuencia está conservada, y permite asociarse con el ARN ribosómico 16S mediante
puentes de hidrógeno para iniciar la síntesis proteica.
82
Capítulo 7. Transcripción y maduración del ARN
4. Transcripción en eucariotas
5
La molécula que se origina en la transcripción es un preARNm, que es un precursor
del ARNm (el que se traduce).
6
Transportinas
83
Capítulo 7. Transcripción y maduración del ARN
Existen distintos factores transcripciones que ayudan a las distintas ARN polimerasa.
Si ayudan a la ARN polimerasa I se denominan TFI. Si ayudan a la ARN polimerasa II se
denominan TFII, y así sucesivamente.
➢ TFI
• TFIA
• TFIB
➢ TFII
• TFIIA
• TFIIB
4.4. Elementos del promotor para los genes transcritos por la ARN
polimerasa II
➢ TATA box: centrada en una posición -25 (25 pares de bases upstream del
lugar de iniciación). Es rica en los pares de bases adenina-timina, por lo
que quiere decir que es una zona en dónde se despliegan las dos zonas
del dúplex para iniciar la transcripción.
7
ARN polimerasa II + factores de transcripción generales.
84
Capítulo 7. Transcripción y maduración del ARN
Se reconocen
secuenciando las zonas
del ADN, alineándolas y
mirando las bases que
se van repitiendo. En la
práctica, en muchos
genes de proteínas no
tiene sus promotores
todos estos elementos.
En alguna bibliografía,
siempre se incluye la caja TATA, ya que se observa que aproximadamente la mitad
presenta esta caja y la otra mitad no (los llamados TATA less).
Con mayor frecuencia se encuentra que el 50% de los genes contienen la TATA
box y el elemento iniciador. En el otro 50% de los genes con promotores TATA less
están constituidos por el elemento iniciación y el elemento DPE.
85
Capítulo 7. Transcripción y maduración del ARN
¿Qué función tiene esta caperuza y por qué se adiciona tan rápido? A esta
caperuza se la han atribuido diferentes funciones. La primera, proteger el extremo 5’
de los mensajeros de la degradación por exonucleasas que avancen en dirección 5’
3’. La segunda función es que esta caperuza facilita el transporte de la molécula de
mensajero del núcleo al citoplasma. Coopera esta caperuza en el fenómeno de
splicing. La última función que se le atribuye a la caperuza es que facilita la unión del
extremo 5’ del mensajero con el ARN-ribosómico que contiene la subunidad menor
del ribosoma denominada 40S8. A veces hay modificaciones de los extremos 5’
distintas.
8
La de las bacterias era 30S.
86
Capítulo 7. Transcripción y maduración del ARN
9
Procedente del MIT.
10
Procedente de un laboratorio de New York.
87
Capítulo 7. Transcripción y maduración del ARN
Se utilizó una técnica de hibridar una de las dos cadenas del gen que codifica la
ovoalbúmina en gallina con la molécula de ARN mensajero resultante. Se observa que sólo
algunos segmentos del ADN del gen son capaces de hibridar con el mensajero. Esas son las
regiones codificadoras. Encuentra que existen regiones de ADN que no son capaces de
encontrar representación en el mensajero, y que sobresalen de la estructura molecular en
forma de lazos o bucles. Estas son las regiones no codificadoras que interrumpen las
regiones si codificadoras.
La molécula de ADN se
transcribe continuamente.
Esta molécula precursora de
88
Capítulo 7. Transcripción y maduración del ARN
ARNm, hay que eliminar los intrones. Esto se realiza por un mecanismo denominado
splicing.
• Spliceosoma
Una forma de que el aparto de splicing sea tan preciso es que hay secuencias en el
ARN muy conservadas, para que el sistema las pueda reconocer. Se coge la molécula de
ARN, se secuencia, y ver si hay secuencias conservadas (la selección natural las conserva).
Son las secuencias consenso en los intrones GT-AG. Estos son los intrones mayoritarios en
89
Capítulo 7. Transcripción y maduración del ARN
los genes codificadores de proteínas. Hay otro tipo de intrones que se dan con menos
frecuencia, que son los intrones AT-AC. Nos centraremos en los GT-AG.
Estamos en el ADN. Lo que cabe esperar es que las secuencias de unión entre el
intrón y el exón sean secuencias muy conservadas. La primera y segunda base del extremo
5’ es GT y están en el 100% de los intrones. Está siempre.
En el extremo 3’, la penúltima y última base del intrón, este extremo se llama lugar
aceptor 3’. En el extremo 3’, en el 100% de los casos aparece una AG. Es por esto por lo
que son intrones GT-AG.
90
Capítulo 7. Transcripción y maduración del ARN
Esta reacción realizada in vitro está incompleta. ¿Son reacciones que hace el
ARN per se o está ayudada? No se realiza sola, requieren de complejos
ribonucleoproteicos, que constituye el spliceosoma11.
6.2. Spliceosoma
Los spliceosomas son complejos ribonucleoproteicos pequeños nucleares, por lo que
están constituidos por ARN y proteínas. Estos complejos se conocen con el acrónimo
ARNpn. Hay cinco complejos ribonucleoproteicos pequeños nucleares, y están formados
por cinco tipos de ARN pequeños nucleares (ARNpn, small nuclear ARN).
Estos complejos contienen moléculas de ARN que tienen complementariedad con las
secuencias conservadas. Por ejemplo, RNPpnU1 se asocia con la secuencia conservada con
el extremo 5’ o donador por complementariedad de bases y/o mediante puentes de
hidrógeno.
Las ribozimas fueron descubiertos por Thomas Cech en 1981 a partir de sus
investigaciones en el protozoo Tetrahymena, y en concreto, estudiando la maduración de
una molécula precursora de ARN ribosómicos que para este precursor tiene un peso
molecular de 26S.
La molécula precursora tiene dos exones: exón izquierdo y derecho. Están separados
por un intrón con una longitud de 413 bases.
11
Complejo que ayuda al splicing.
91
Capítulo 7. Transcripción y maduración del ARN
Este nombre se sigue manteniendo hoy en día, incluso con una concepción
equivocada, porque Altman descubre que existen moléculas de ARN que son capaces de
actuar sobre un sustrato dando lugar a un producto. Lo comprobó en la ARNasa fosfato
(ribonucleasa fosfato). Esta enzima se encarga de madurar moléculas precursoras del
transferente.
92
Capítulo 7. Transcripción y maduración del ARN
Una unidad de transcripción simple es aquella que da lugar a una única molécula de
mensajero, y por tanto a una única proteína.
Las unidades de transcripción complejas son aquellas capaces de producir dos o más
moléculas de ADN mensajero y por tanto dos o más proteínas. ¿Qué tipos hay?
• Splicing alternativo
• Ambos
En este caso sólo hay un lugar poliadenilable. Tiene que haber un lugar de splicing
S1 y otro S2 (la longitud del intrón). Se origina una molécula de ARN-m llevando a cabo el
proceso de splicing (eliminando el intrón y uniendo los exones). Puede haber splicing
alternativo, es decir, que las moléculas precursoras de ARNm tengan más lugares de splicing
S3. Actúa el spliceosoma, y se escoge el lugar de splicing S1 y S3, por lo que se coge la
distancia entre S1 y S3 como un intrón, y se empalman los exones.
93
Capítulo 7. Transcripción y maduración del ARN
«El intrón de un gen es el exón de otro gen». Si hay un splicing alternativo, se pueden
originar dos mensajeros diferentes y dos proteínas distintas. Estas proteínas proceden del
mismo gen, por lo que se
denomina isoformas. ¿Qué
función tienen estas
isoformas en las células?
Cuando se analiza la función
de estas proteínas, se
observa que pueden tener
funciones similares, o
incluso distintas, llegando en
muchos casos a tener
funciones antagónicas. Las
proteínas de la familia SR
juegan un papel
fundamental en el mecanismo regulador del splicing alternativo, que es el que determina
que lugares de splicing hay que elegir para obtener las diferentes isoformas.
➢ Más del 90% de los genes codificadores de proteínas exhiben una organización
discontinua.
94
Capítulo 8
El código genético
➢ El código no tiene comas. Una vez que comienza la traducción del ARNm, los tripletes
se leen por orden y sin ninguna interrupción.
➢ El código contiene señales de inicio y fin, codones que son señal del inicio y finalización
de la traducción.
➢ El código es casi universal, los seres vivos usan generalmente un solo diccionario
codificante.
95
Capítulo 8. El código genético
Hay que hacer referencia a Sidney Brenner1. Empezó a estudiar el código genético desde
muy joven. Empezó sus estudios sobre esto en 1960 aproximadamente. Se sabía que había 20
aminoácidos. En el ARN mensajero hay ribonucleótidos. Piensa que cada base da lugar a un
aminoácido, pero:
n = 1 x 41 = 4 posibilidades
n = 2 x 42 = 16 posibilidades
n = 3 x 43 = 64 posibilidades
Esta idea teórica necesitaba apoyo experimental. Crick Barnett, Brenner & Watts-Tobin en
1961 someten al ADN del fago T4 a una sustancia química que se denomina colorante de acridina
proflavina2.
Se fijan en un locus concreto que es el locus rII. Observan que cuando se incorpora o se
inserta en el ADN un par de nucleótido (uno
en una cadena y otro en la otra), si fuera una
guanina-citosina, se incorporaría en una
determinada zona una citosina en el
mensajero. Cuando se incorpora una
citosina en medio del mensaje, se produce
un desfase de la pauta de lectura, es decir, si
se lee ordenadamente la secuencia en
tripletes, se cambia la secuencia, a partir del
lugar de inserción. Si se introducen dos pares
de nucleótidos, también se produce un
desfase de la pauta de lectura, pero que
cuando se incorporan tres pares de
nucleótidos, el efecto es muy distinto. En la
molécula de mensajero se insertarán tres
ribonucleótidos, se producen alteraciones
de sólo una pequeña parte del mensaje, pero el resto mantiene la pauta de lectura. Con la
inserción de tres pares no hay corrimiento de los tripletes. Esto demuestra la hipótesis de
Brenner.
1
Nobel de medicina en el año 2002 por el desarrollo y muerte celular.
2
Es un mutágeno químico, introduce mutaciones del tipo de inserciones o deleciones de pares
de bases en el ADN.
96
Capítulo 8. El código genético
¿Hay espacios entre los tripletes, hay comas? Estudios pioneros realizados en el virus del
mosaico del tabaco, concretamente en el gen que codifica proteínas de la cubierta llegaron a la
conclusión de que los codones, los tripletes en la molécula de mensajero, contenían la
información justa para especificar los aminoácidos de la proteína. No había espacio para los
nucleótidos que no formaran parte en los tripletes. Los codones se van interpretando sin comas
unos adyacentes a otros.
Otro dato interesante que aportó Crick es que propuso que para que se realizara la
traducción del mensajero debía haber moléculas que él denominó moléculas adaptadoras. Esas
moléculas adaptadoras por un lado deberían de reconocer el mensajero (los codones de ese
mensajero) y al mismo tiempo debían de llevar unido el aminoácido correspondiente. Fue en
1959, y en el 63 se descubrieron esas moléculas adaptadoras, y se llamaron «transferentes».
Es posible que un único ARNm tenga múltiples lugares de iniciación para llevar a cabo
la traducción, dando lugar a los llamados «genes solapados». La existencia de estos genes
se descubrió inicialmente en el fago φx174 (genoma circular y de pequeño tamaño, por lo
que tiene que optimizar la poca información genética que tiene). La traducción se puede
97
Capítulo 8. El código genético
iniciar en diferentes AUG. Puede haber codones de iniciación alternativos. Puede haber
genes solapados que pueden dar lugar a 7 proteínas.
98
Capítulo 8. El código genético
con fenilalanina. Esto se hace para los cuatro ribonucleótidos. Ahora se usan
heteropolímeros para seguir descifrando el código.
• Puede haber que sintetice tres adeninas juntas. La probabilidad de esto es (1/6)3
o sea, una probabilidad del 0,4 %.
Se observa que hay lisina con una probabilidad inferior menor al 1 %. El codón más
probable serían 3 adeninas. La glutamina se observa que hay un 2% de glutamina, se
aproxima mucho a una citosina y dos adeninas. Y así con todos.
Se ha avanzado que Ochoa dijo cuál era la composición de los codones que codifican
los aminoácidos. Lo que no se pudo determinar es la secuencia de ribonucleótidos de cada
codón.
99
Capítulo 8. El código genético
Para seguir conociendo cuál era la secuencia, se usó la técnica de unión al triplete3,
desarrollada en 1964 por Nirenberg y Leder, pudiéndose llevar a cabo la asignación
específica de gran parte de los tripletes (50 tripletes de 64).
En esta técnica, se parte de la idea de que in vitro, los ribosomas pueden unirse a
moléculas de ARN sintetizadas in vitro y constituidas por tres ribonucleótidos (la longitud
del codón). El ribosoma se pude poner en contacto con un ARN sintético. Para saber que
aminoácido corresponde, se puede ir ensayando con diferentes transferentes que portan
los distintos aminoácidos. El que se corresponda al codón, formará un complejo ARN-
transferente-ribosoma-mensajero. Si el transferente no reconoce el codón, no forma el
complejo.
3
Secuencia de ARN de tres ribonucleótidos.
4
Marcaje radiactivo del transferente.
100
Capítulo 8. El código genético
Los copolímeros repetidos son moléculas de ARNm sintético, constituidos por cortas
secuencias repetidas muchas veces. Esta molécula de mensajero no tiene un lugar de
iniciación fijo, pudiendo ser interpretado de manera distinta.
Con esta observación, junto con las obtenidas anteriormente, permitió descifrar el
código genético.
5. El código genético
El código genético es
claramente degenerado, porque
la gran mayoría de los aminoácidos están especificados por dos, tres o cuatro codones
diferentes. Algunos, como la met, sólo hay un codón, pero, por ejemplo, la prolina tiene 4
codones, y la serina puede venir codificada por seis5.
5
Nivel máximo de degeneración.
101
Capítulo 8. El código genético
6
Triplete que se une al codón mediante puentes de hidrógeno.
102
Capítulo 9
Leyes de la herencia: Mendelismo
103
Capítulo 9. Leyes de la herencia: Mendelismo
2. Ley de la segregación
A continuación, procede a
autofecundar estas plantas. Obtiene la
segunda generación filial o F2. En la F2
obtiene plantas altas y enanas. El carácter
enano de la generación parental que estaba
oculto en F1 vuelve a aparecen en F2.
Contabiliza cuantas plantas son enanas y
cuantas altas, y encuentra que el carácter
alto enana se da en una proporción de 3:1.
Estos experimentos los interpreta Mendel
cómo que existen dos factores mendelianos
104
Capítulo 9. Leyes de la herencia: Mendelismo
a los que ahora se reconocen cómo genes. Hay dos factores mendelianos en los híbridos de la
F1 que se separan o segregan en los gametos, y la observación de que en F1 todas las plantas
sean altas se debe a que el factor mendeliano (o alelo en la actualidad) para alto es dominante
sobre el alelo para bajo que tiene una condición de recesivo. La segregación en los gametos es
un concepto muy importante, ya que por aquella época se pensaba que la herencia se debía a
una mezcla entre los dos materiales genéticos.
El carácter línea pura se puede decir que son homocigóticos, o sea, que tienen el mismo
alelo.
Otra técnica es el cruzamiento prueba, que sirve para reconocer se una planta es
homocigótica o heterocigótica (si tiene un único alelo o contiene 2). Esta técnica consiste
en cruzar los individuos problema con el homocigótico recesivo. Si el individuo que hay que
probar es homocigótico, sólo producirá A, y al cruzarlo con a, sólo dará Aa, o sea, fenotipo
alto (el dominante). Si es un heterocigoto, entonces puede producir dos tipos de gametos
(A y a). Habrá un fenotipo dominante Aa y un fenotipo recesivo aa. Si es un homocigótico,
todos los descendientes serán de fenotipo alto, y si es heterocigótico, habrá una proporción
1:1 los dos fenotipos (alto y enano).
105
Capítulo 9. Leyes de la herencia: Mendelismo
En la anafase II, los productos son diferentes (en la anterior era igual).
106
Capítulo 9. Leyes de la herencia: Mendelismo
Ahora Mendel autofecunda las plantas de F1. Cuando se analiza F2 se concluye que hay 315
plantas liso amarillo, 108 liso verde, 101 rugoso amarillo y 32 rugoso verde. El doble
heterocigótico es un dihíbrido (porque se refiere a dos caracteres). Se observan proporciones
de 9:3:3:1.
El homocigótico recesivo
sólo produce un tipo de gametos.
El heterocigótico produce 4 tipos
de gametos en proporciones
similares. Cuando se cruza con un
homocigótico recesivo se
producen 4 fenotipos en
proporciones idénticas.
107
Capítulo 9. Leyes de la herencia: Mendelismo
108
Capítulo 9. Leyes de la herencia: Mendelismo
• Locus: localización cromosómica de una secuencia de uno o más nucleótidos. Plural: loci
(lo términos “gen” y “locus” a veces se utilizan indistintamente).
• Alelo salvaje: alelo que codifica el tipo salvaje o silvestre que es el fenotipo frecuente o
estándar del organismo en la naturaleza.
• Alelo mutante: alelo que difiere del alelo presente en el tipo estándar (salvaje o
silvestre).
• Alelo salvaje: se representa a menudo por una o más letras que corresponden a alelos
mutantes seguido del superíndice “+”, o simplemente por “+”. La primera letra es
mayúscula si el alelo es dominante o minúscula si el alelo es recesivo.
• Alelo mutante: se representa por una o más letras. Con mayúscula si el alelo es
dominante o con minúscula si el alelo es recesivo, con respecto a los otros alelos bajo
consideración.
• Genotipo: se representa con los símbolos de los alelos sin espacio intermedio. En el caso
de dos o más loci se representan el genotipo del primer locus seguido del genotipo del
segundo locus, y así sucesivamente, sin espacios intermedios. Alternativamente, los
alelos de cada genotipo pueden separarse por una barra oblicua (“/”).
109
Capítulo 9. Leyes de la herencia: Mendelismo
110
Capítulo 10
Extensiones del mendelismo
1. Interacciones alélicas
Existen casos de dominancia entre alelos. En el caso de Mendel, los alelos de un locus
enmascaran el efecto del otro alelo. Un alelo es dominante sobre otro. Depende de los dos
alelos que estean en ese heterocigoto (las relaciones de dominancia dependen de los
alelos). Para un carácter se puede establecer una escala (fenotípica) y establecer las
diferentes relaciones de dominancia que pueden existir.
111
Capítulo 10. Extensiones del Mendelismo
112
Capítulo 10. Extensiones del Mendelismo
1.2. Letalidad
Un alelo puede ser dominante sobre el fenotipo, pero letal se comportan como
recesivos. Ejemplo: color pelaje amarillo en ratones.
Cuando en descendencias
de heterocigóticos existen
desviaciones de 3/4 1/4 nos
sugiere que hay un gen letal. En
concreto, cuando aparecen
proporciones de 2/3 1/3. Este
alelo es dominante para el color
del pelaje, pero es recesivo para
la letalidad.
Este hecho lo encontró un francés en 1905. Hoy en día se tiene una explicación
molecular. En los ratones agutí, en los pelos se forman unas bandas de color amarillo.
¿Por qué AY produce este efecto? En AY hay una selección en el ADN que afecta a la
región reguladora del locus de tal manera que constantemente se expresa el color amarillo.
Es por esto por lo que es dominante el color amarillo.
Es letal porque esta selección implica a un gen adyacente que es el gen Merc, y juega
un papel fundamental en el desarrollo embrionario del ratón. Es por esto por lo que el gen
no sobrevive.
113
Capítulo 10. Extensiones del Mendelismo
2. Interacción no alélica
2.1. Epistasis
La epistasis es la interacción entre alelos de loci distintos. Los alelos de un locus (locus
epistático) interfieren o inhiben la expresión fenotípica de los alelos del otro locus (locus
hipostático)
114
Capítulo 10. Extensiones del Mendelismo
3. Pleitropía
Esta enfermedad se puede actuar sobre ella en neonatos realizando pruebas de sangre y
test bioquímicos para detectarla. Si se diera el caso, se le da una dieta baja de fenilalanina y
entonces el niño se desarrolla normalmente.
No todo se encuentra en los genes. No hay nada fijo en los genes. En la mayoría de los casos
requiere esa combinación del ambiente con los genes.
115
Capítulo 10. Extensiones del Mendelismo
➢ La relación genotipo – fenotipo no tiene por qué ser unívoca en cualquiera de las
direcciones. Así, distintos genotipos pueden dar lugar al mismo fenotipo y, viceversa
distintos fenotipos pueden deberse a un único genotipo.
6.1. Penetrancia
La penetrancia es
el porcentaje de
individuos que
manifiestan el efecto de
una mutación. Una
mutación puede tener
distintos efectos
dependiendo de su
porcentaje de
penetrancia ya que el
ambiente influye. Hay
casos de penetrancia
completa (100%).
116
Capítulo 10. Extensiones del Mendelismo
En una enfermedad hay una probabilidad que tenga una mutación que no se exprese
o sí, y luego, puede expresarse más fuerte o más débil.
Esta mutación tiene expresividad variable. Puede producir diferencias muy claras en
la reducción del tamaño del ojo. En este caso vemos como los dos fenómenos están
relacionados.
7. Heterogeneidad genética
Este gen se denomina DMD (gen más grande encontrado: 2,4 Mb). A nuestras células
producir el gen tarda horas y horas. Este locus codifica una proteína que es la
distrofina. Ésta es una proteína fundamental en la estructura y dinámica de las fibras
musculares. Si se producen mutaciones, se produce alteraciones de la estructura del
músculo y por tanto su función, provocando distrofia. La más común en humanos es
la distrofia de Duchenne.
117
Capítulo 10. Extensiones del Mendelismo
En otra parte del gen se pueden producir otras mutaciones que produce la distrofia
muscular de Becker que tiene un efecto más suave que el de Duchenne.
➢ Heterogeneidad no alélica o del locus: mutaciones en diferentes loci (no alelos) causan
enfermedades aparentemente parecidas. Este fenómeno es muy frecuente en las
poblaciones humanas.
• Retinitis pigmentosa
Gen autosómico dominante (8q12.1); gen autosómico recesivo (14q31.3); gen en el
cromosoma X (Xp11.4), etc.
8. Fenocopias
Si unas plantas crecen en un medio seco y en uno húmedo con dos genotipos AA y aa, y
estas plantas se pesan, los resultados que se obtienen bajo estas condiciones son que los
recesivos tiene un mayor peso en el medio húmedo.
Un genotipo no se convierte bien en todos los ambientes. En uno sí, pero no tan bien en
otro. Es lo que se llama interacción genotipo-ambiente.
118
Capítulo 10. Extensiones del Mendelismo
En la gráfica, las cruces no son paralelas por lo que hay interacción con un efecto relativo
de las mutaciones.
119
Capítulo 10. Extensiones del Mendelismo
120
Capítulo 11
Base cromosómica de la herencia y
ligamiento al sexo
1. Teoría cromosómica
El inicio del estudio de los caracteres ligados al sexo se pudo comenzar a principios del siglo
XX cuando se reconocieron el cromosoma X y cromosoma Y, y cuando se llegó a reconocer la
teoría cromosómica de la herencia (Sutton y Boveri). Llegaron a la conclusión de que los genes
están en los cromosomas ya que encuentran un paralelismo en el comportamiento de los genes
y los cromosomas durante la meiosis.
Mendel decía que había dos factores llamados genes. Se dan cuenta que uno de los
cromosomas procede de un progenitor y el otro cromosoma del otro progenitor. Los dos genes
mendelianos segregan durante la meiosis según Mendel.
2.1. Características
121
Capítulo 11. Base cromosómica de la herencia y ligamiento al sexo
Empezó a
realizar cruzamientos
con una cepa hembra
de tipo salvaje1 (ojos
rojos) y con machos de
ojos blancos.
La primera
generación da a todos
los individuos de tipo
salvaje. Luego analiza
los cruzamientos entre
estos individuos de F1
para obtener la
segunda generación.
Morgan interpretó de que el locus para ojos blancos estaba ligado en el cromosoma
X.
1
Carácter dominante frente a ojos blancos.
122
Capítulo 11. Base cromosómica de la herencia y ligamiento al sexo
2
No ocurre en los autosomas.
123
Capítulo 11. Base cromosómica de la herencia y ligamiento al sexo
➢ Loci en el cromosoma X
Cuando comparamos el
cromosoma Y encontramos loci que
pueden encontrarse en el cromosoma
X o Y.
3
El término “ligado al sexo” se refiere a los loci que se localizan en el cromosoma X.
4
Su base genética reside en el loci del cromosoma Y.
5
Falsamente autosómicos.
6
Tenemos loci que están compartidos.
124
Capítulo 11. Base cromosómica de la herencia y ligamiento al sexo
de autosomas, pero el que inicia el paso del determinismo del sexo es SRY. En etapas
tempranas del desarrollo promueve que el tejido gonadal indiferenciado conduzca a la
formación de testículos. Se forman hormonas como la testosterona y la hormona inhibidora
de los conductos de Müller en la mujer. Lo que hace SRY es producir un factor de
transcripción que se une a regiones promotoras activando la expresión de otros genes que
intervienen en el dimorfismo sexual.
3. Análisis de genealogías
En estos organismos, la
determinación de los patrones
hereditarios de los caracteres se basa
en el estudio de genealogías.
125
Capítulo 11. Base cromosómica de la herencia y ligamiento al sexo
126
Capítulo 11. Base cromosómica de la herencia y ligamiento al sexo
Existen otros dos fenómenos que son rasgos que tienen un modo de herencia
limitado por el sexo, aunque los genes implicados están en ambos sexos. Por ejemplo,
serían genes implicados en el desarrollo de los ovarios o mamas, o implicados en la creación
de leche en mamíferos, o de la creación de esperma.
Otros son los caracteres influidos o controlados por el sexo. Se dan en ambos sexos,
pero más en uno que en otro. Un carácter típico sería la calvicie en humanos. El gen para la
calvicie humana es dominante en hombres y recesivo en mujeres. En mujeres produce que
el pelo sea más endeble.
➢ Efectos de un solo gen: el sexo viene determinado por un único alelo o por
alelos múltiples no asociados con cromosomas heteromórficos.
127
Capítulo 11. Base cromosómica de la herencia y ligamiento al sexo
128
Capítulo 12
Ligamiento y recombinación
1. La recombinación
Para ver la capacidad que tiene de cambio genético miramos todas las secuencias de ADN
y en cada par de nucleótidos la posibilidad de cambio son cuatro bases.
Se hizo cruzamientos para cuerpo amarillo y ojos blancos en Drosophila melanogaster. Son
genes recesivos ligados al sexo.
Hace un primer cruce partiendo de una hembra homocigótica con fenotipo cuerpo amarillo
y ojos blancos y la cruza con un macho de tipo salvaje. A partir de este cruzamiento se obtienen
hembras heterocigóticas y machos de cuerpo amarillo y ojos blancos. Éstos se cruzan entre sí y
se observa que en un 98,7% de los descendientes contienen fenotipos presentes en los
progenitores.
Sin embargo, observa unas clases nuevas1 (1,38%) donde los machos son simplemente de
ojos blancos o solo de cuerpo amarillo y en hembras ocurre lo mismo.
Morgan imaginó que esto sucedía porque los alelos para cuerpo amarillo y ojos blancos se
separan durante la meiosis.
El siguiente paso fue realizar un cruzamiento donde intervienen una hembra de ojos
blancos y otro locus cuya mutación recesiva produce alas pequeñas, y se cruza con un macho
salvaje. Se observa que en F2 hay tipos parentales, machos o hembras, que son salvajes para los
1
Fenotipos y genotipos nuevos.
129
Capítulo 12. Ligamiento y recombinación
dos loci, o mutantes para los dos. También observa tipos nuevos, tipos recombinantes como
individuos con alas pequeñas y ojos blancos.
Lo que llama la atención comparando los dos cruzamientos, es que los porcentajes de tipos
recombinantes son muy distintos (1,3% y 37,2%).
Se concluyó que:
2
Constitución genética diferente a los parentales.
130
Capítulo 12. Ligamiento y recombinación
2. Ligamiento
A veces el ligamiento es parcial porque los loci están suficientemente separados del
cromosoma como para que se den con cierta probabilidad entrecruzamientos entre ellos
durante la meiosis.
Existen dos cromátidas que permanecen invariables (clases parentales) por lo que se
observan dos gametos sin entrecruzamientos que mantienen las combinaciones
parentales.
131
Capítulo 12. Ligamiento y recombinación
La recombinación
solo es posible en los doble
heterocigotos. Cuando los
alelos dominantes están en
un mismo cromosoma se
denomina acoplamiento.
Se siguen teniendo
heterocigotos, pero los
alelos dominantes no se
encuentran en el mismo
cromosoma.
Si no se tiene un
doble heterocigoto, solo es
heterocigoto para el locus
a/A. Sí puede haber
entrecruzamiento físico,
pero no se producen
combinaciones nuevas. Es
decir, excepto en los dobles
heterocigotos se producen
entrecruzamientos, pero
no combinaciones nuevas.
Los recombinantes no se
producen al azar. Hay zonas donde
aumenta la recombinación.
132
Capítulo 12. Ligamiento y recombinación
podía utilizarse como indicador cuantitativo de su distancia genética entre los loci en el
cromosoma. De esta manera se podrían elaborar mapas genéticos.
Las frecuencias de recombinación nos indican la distancia. Cuanta más frecuencia, más
distante, cuanta menos frecuencia más próximos.
La unidad de mapa (um) es la distancia entre loci para la cual uno de cada 100 productos
meióticos es recombinante. A esa unidad de mapa se expresa en centimorgan (cM), que
equivale a una frecuencia de recombinación del 1%. De 100 gametos uno es recombinante. Las
distancias de mapa son aditivas, o más bien aproximadamente aditivas.
133
Capítulo 12. Ligamiento y recombinación
Cuanto más lejos estean los loci, hay más probabilidad de doble entrecruzamiento.
134
Capítulo 12. Ligamiento y recombinación
CC = FDRo / FDRe
135
Capítulo 12. Ligamiento y recombinación
La interferencia se cuantifica
restando el valor del CC de la unidad.
Si no hay interferencia, CC = 1; si
hay interferencia, CC > 1; si no interfiere,
I = 0, CC = 1, I = 1 – CC.
136
Capítulo 12. Ligamiento y recombinación
137
Capítulo 12. Ligamiento y recombinación
138
Capítulo 13
Herencia extranuclear
Las mitocondrias ejercen una función esencial para la vida de las células. En las
mitocondrias tiene lugar el proceso de fosforilación oxidativa mediante el cual se oxidan los
nutrientes de la célula para dar lugar
ATP (adenosín trifosfato). El ATP es el
principal dador de energía de las células,
aunque no es el único, pero sí el más
eficiente. La mitocondria genera
entorno al 90% del ATP por lo que son
fundamentales como dadores de
energía.
El ADN mitocondrial humano es una molécula de ADN generalmente de doble cadena que
tiene una longitud de 16569 pb (≈ 17Kb). Es una molécula pequeña, de un tamaño promedio de
un gen codificador de proteínas del genoma nuclear.
139
Capítulo 13. Herencia extranuclear.
Una forma de caracterizar el ADNmt es analizar el contenido del guanina y citosina. Este
contenido lo podemos reconocer en base a la técnica de gradiente de densidad de ClCs. Cuando
la célula tenga más guanina y citosina irá al fondo del tubo. Si cogemos ADNmt tendremos una
banda que equivale al 44% guanina y citosina.
Si se cogiera todo el ADN mitocondrial y nuclear se vería que el ADN nuclear bandea por
encima del ADNmt en un 41% de guanina y citosina. Por lo tanto, se deduce que el ADNmt tiene
un mayor contenido de guanina y citosina.
El ADNmt también bandea en modo de una banda satélite. El ADN satélite está en bandas
satélites, pero no todas las bandas satélites son ADN satélite. Por el contenido de guanina y
citosina podemos separar el ADNmt.
Hay dos cadenas de ADN y difieren en su secuencia de bases porque una de las dos cadenas
hay preponderancia de guaninas. A esta cadena se le denomina cadena pesada o cadena H.
La otra cadena del dúplex es rica en la base citosina y se le denomina cadena ligera o cadena
L (también cadena púrica).
El ADNmt se replica con una enzima específica que es el ADN polimerasa ɣ. El ADN
polimerasa ɣ lo inicia a partir de dos orígenes de replicación. Existen secuencias específicas que
sirven como orígenes de replicación. Tiene un origen para la cadena pesada (oH) y hay otro para
la cadena ligera (OL). En estos orígenes es donde se comienza la replicación del ADNmt.
140
Capítulo 13. Herencia extranuclear.
De los 37 genes del ADNmt, 13 codifican polipéptidos. Estos polipéptidos forman parte de
los complejos multiproteicos que intervienen en la cadena de transporte electrónico en el
proceso de fosforilación oxidativa que conduce la formación de ATP. De estos 13 polipéptidos,
intervienen en todos los complejos del transporte de electrones menos el complejo II.
Los restantes 24 dan lugar a ARN no codificador. Dos son ARN ribosómico (ARNr) y 22 dan
lugar a ARNt.
Los complejos tienen que estar en las mitocondrias y la mayor parte de los polipéptidos que
necesitan proceden de la expresión de genes del núcleo. Primero hace falta que esos genes se
transcriban en el núcleo, luego que sufran modificaciones transcripcionales, que los ARNm
maduros salgan por los poros, luego que sean interceptados por los ribosomas en el citoplasma
141
Capítulo 13. Herencia extranuclear.
para iniciar la traducción de polipéptidos, éstos que entren a la mitocondria y por último que
participen en los complejos de la cadena de transporte de electrones.
Los ARNr que sintetizan en su interior son suficientes para intervenir en la síntesis proteica
en la mitocondria, pero los ribosomas están formados por ARN y proteínas1 las cuales vienen de
genes codificados en el núcleo. Los ribosomas mitocondriales son los que traducen los 13 ARNm
para esos polipéptidos.
Para que se lleve a cabo la síntesis se necesita ARNt. El ADNmt solo tiene 22 ARNt, los
suficientes para sintetizar los 13 polipéptidos.
No tiene genes para el ADN polimerasa ɣ. La información para su síntesis viene del núcleo
donde se localiza el gen que codifica ese ADN polimerasa ɣ.
3.1. Transcripción
En el lazo D o ADN 7S2 está una región promotora para la cadena H que se denomina
PH. Es donde se inicia la transcripción. Se realiza por ADN polimerasa ɣ procedente del ADN
nuclear y genera largos transcritos multicistrónicos3. Esos transcritos o moléculas
precursoras se fragmentan en moléculas individuales que dan lugar a los productos
correspondientes.
En la cadena L, existe otro promotor (PL). Éste es utilizado por la ARN polimerasa para
dar lugar a largos transcritos multicistrónicos se sintetizan en dirección opuesta a la cadena
H
En bacterias hay que destacar que la información genética está muy compactada y
que el 93% del genoma mitocondrial contiene información. De hecho, sus genes no
contienen intrones. Además, los ARNm de alto peso molecular, el que está asociado a la
subunidad mayor es 23S y la subunidad menor es 16S4.
1
Aproximadamente 80 proteína ribosomales.
2
Tríplex
3
Característico de bacterias.
4
El genoma mitocondrial contiene ribosomas 23S y 16S.
142
Capítulo 13. Herencia extranuclear.
5
No se conocen muy bien en las primeras etapas embrionarias.
143
Capítulo 13. Herencia extranuclear.
para estudiar periodos evolutivos avanzados se usa el ADN nuclear, y para estudiar periodos
evolutivos más cortos se usa el ADNmt.
➢ Más rondas de replicación que el ADN nuclear: cada ciclo de replicación, las
ADN polimerasas son muy precisas, pero a veces introducen mutaciones.
Tienen probabilidad de tener más mutaciones y van acumulando más
variaciones.
➢ ADN no protegido por histonas: las histonas protegen al ADN de las agresiones
fisicoquímicas. En el ADNmt al no tener proteínas histonas, no está protegido
y sufre más mutaciones.
➢ Sistemas de reparación del ADN menos eficaces: tienen más altas tasas de
mutación porque estos sistemas son menos eficaces, pero no significa que no
los tengan.
4.3. Heteroplasmia
En este fenómeno se dan que fragmentos de ADN tienen la misma secuencia, pero
ocasionalmente se originan mutaciones en el ADNmt. Estas mutaciones pueden elevar su
frecuencia en el conjunto en la población total de moléculas de ADNmt dando lugar al
fenómeno conocido por heteroplasmia.
144
Capítulo 13. Herencia extranuclear.
¿Por qué hay esa oscilación? La variación puede ser debido a un fenómeno de
segregación pasiva. Puede haber diferencias en las proporciones de ADN mutante y normal
debido a un proceso de error de muestreo a medida que se dividen las células. Se tiene un
tejido y las células se dividen pasando y repartiendo moléculas de ADNmt a las células hijas,
pero no en proporciones equivalentes. Esto es lo que se conoce por un problema de
muestreo por segregación pasiva.
Otra explicación por la que hay esta oscilación es por el proceso de la formación de
óvulos. Cuando se forman en división meiótica, existen cuellos de botella que cambian en
gran medida los grados de heteroplasmia. Aquí el error de muestreo es enorme. En la
formación se acentúa la diferencia en los grados de heteroplasmia.
Las mujeres que tengan mutantes en las mitocondrias, las traspasan a sus hijos con
grandes variaciones. Una mujer que sufra una enfermedad puede que su hijo no la sufra y
viceversa.
5. Enfermedades mitocondriales
145
Capítulo 13. Herencia extranuclear.
➢ Hipertensión
➢ Esclerosis múltiple
➢ Parkinson
➢ Deficiencia en carnitina
➢ Obesidad
Los individuos que tengan una mayor heteroplasmia, mayor será el grado de
afectación de enfermedades.
Mutaciones en el ADNmt están implicadas en más del 20% de los casos de diabetes
del tipo 2.
146
Capítulo 13. Herencia extranuclear.
enfermedades tales como el Parkinson y el SM. Estudios recientes (Alam & Rahman, 2014)
muestran que un suplemento de coenzima Q10 puede ser útil para el tratamiento de la
obesidad y el estrés oxidativo.
Llegaron a concluir que cuando el ADNmt de las madres está dañado y tiene
mutaciones, entonces se acelera el envejecimiento en ratones hijos.
Si queremos evitar que mutaciones pasen a los hijos primero lo que debemos realizar
es un diagnóstico genético preimplantacional (DGP), que es el estudio del ADN de
embriones humanos para seleccionar los que cumplen determinadas características y/o
eliminar los que portan algún tipo de defecto congénito. Para ello se cogen cigotos en
estado de 6-8 células.
147
Capítulo 13. Herencia extranuclear.
Se parte de dos óvulos no fertilizados. Por un lado, el óvulo de la paciente y por otro
el óvulo de una mujer donadora con mitocondrias normales no mutadas. A este óvulo se le
retira los cromosomas6, y esto se hace extrayéndole el huso mitótico. Al final tenemos un
óvulo donador con mitocondrias normales y retirado el material hereditario.
Este óvulo final se fertiliza con el esperma del varón y tenemos un cigoto que se
desarrolla dando lugar al embrión.
➢ Experimentos en monos
(2009)
➢ Experimentos en humanos
(2013) pero no se dejó llevar
a cabo el desarrollo del
embrión.
6
El material nuclear
148
Capítulo 13. Herencia extranuclear.
El problema que puede dar esta técnica es que al haber tres genomas distintos puede
haber incompatibilidad y dar problemas posteriores.
149