TEMA: “USO DEL HEMOCITÓMETRO.

”
OBJETIVOS

 Objetivo general

 Reconocer el uso y manejo del hemocitómetro o cámara de Neubauer para

el conteo de células.

 Objetivos específicos

 Determinar la concentración de células por conteo en el hemocitómetro,

expresándolas en unidades de células/L.
 Establecer las ventajas y desventajas del hemocitómetro para el recuento
de células en este caso de levaduras y esporas.

RESULTADOS OBTENIDOS

Tabla N°01: Datos obtenidos en el laboratorio.

ESPORAS LEVADURAS

17 9
C1
4x4 28 3

14 3

29 5

9 5
C2
5x5 17 3

13 11

14 7
 24 4

24 2
C3
4x4 42 3

28 1

31 2

Tabla N°02: Concentración total de levaduras y esporas.

Cuadricula Concentración

Levaduras 4.035x1010esp/L

Esporas 1.39x108levd/L
DISCUSIÓN

Durante la práctica de laboratorio se realizó el conteo del número de células en

este caso esporas y levaduras en las celdas que se encuentran en la diagonal
del cuadrado mayor (Ver Gráfico 1), posteriormente se contó el número de
células ubicadas en la diagonal de la celdas cuyos resultados se pueden
observar en la Tabla 1, para la primera y tercera celda la diagonal consta de 4
subceldas, es decir se obtuvo 8 datos mediante los cuales se obtendrá la
media, de la misma forma para la celda 2, pero en esta la diferencia es que
existe 5 subceldas como diagonal por lo tanto su volumen también será
diferente a comparación de las demás celdas, para determinar la concentración
de la muestra se obtiene el promedio entre ambos resultados obtenidos (Ver
Tabla 2.), y para la determinación de la muestra original bastaría con multiplica
el factor de dilución por el cual se realizó el proceso. Se pudo observar con la
ayuda del microscopio las esporas y levaduras en cada subcelda que se
encuentre en el interior de la misma, en caso de que se encuentre en la línea
del cuadrado se considera solo si están dentro de la forma de L del cuadrado
de la parte inferior, caso contrario no se la toma en cuenta para el respectivo
conteo. (Rivera, 2012)

Además la máxima cantidad representativa de manera estadística es de 60

células, sobrepasado este límite no se considera debido a que el margen de
error es mucho mayor y se reporta el dato como inaceptable, para evitar que
esto suceda se prefiera trabajar con diluciones de 10-3 y 10-4, con diluciones
de 10-1 y 10-2 se incrementara considerablemente el número de células y
mientras más sea diluida de la muestra original no existirá o escasamente
habrá una muy baja cantidad de esporas. (…., 2008)

Existe muchas ventajas para el uso del hemocitómetro una de ellas es que
permite el recuento rápido de partículas suspendidas como bacterias, esporas,
levaduras, glóbulos blancos y glóbulos rojos, el proceso es muy efectivo
siempre y cuando se lo realice de manera correcta, la agitación previa del
medio liquido es fundamental para colocar la muestra representativa en el
hemocitómetro y así obtener resultados satisfactorios y evitar lo que se conoce
como distribución irregular de la muestra.
Según (Carlosama, 2014), en la técnica de conteo de células hay que tener en
cuenta que en esta técnica uno de los factores que afecta la observación de las
células de levadura es la correcta dilución de la muestra empleada se puede
decir que si durante el conteo se observan aproximadamente 69 células la
muestra se encuentra muy concentrada, mientas que si se observan menos de
20 células, la muestra se encuentra muy diluida. En nuestra experiencia se
observó las células sin dificultad lo que permite obtener un resultado más
confiable.

Este es un instrumento muy utilizado en medicina y biología para realizar el

recuento de células en un medio líquido que puede ser un cultivo celular,
sangre, orina, etc, en este caso se lo realizó con levaduras. Donde se obtuvo
una cantidad grande de esporas por litro como se muestra en la tabla N°02 en
que se obtuvo 2.68 x109 en la cuadricula de 4 x 4 y 2.85 x 109 en la cuadricula
5 x5, cabe destacar que es un método poco preciso, puesto que la distribución
de las células en cada cuadro varia, por lo que se saca un promedio de los
datos, aun así no es muy exacto el resultado, por encima de 2,5 millones (2,5
X 106 ) la probabilidad de cometer errores de conteo crece demasiado, y
también el tiempo y esfuerzo necesario para realizar un recuento con fiabilidad,
por lo por encima de esta concentración es conveniente diluir la muestra para
acercar la concentración al rango óptimo, siendo la concentración óptima para
conteo en hemocitómetro es de 1 millón de células por ml = 106 células /ml
(Mantilla, 2011 ).

CONCLUSIONES

 Se aprendió el uso del hemocitómetro y su correcta manipulación, no

obstante este método de recuento produce errores de hasta 20% y 30%
debido al pipeteo, a los errores estadísticos por ser la muestra poco
representativa, errores del volumen de muestra realmente introducido en
la cámara, etc. Sin embargo, el hemocitómetro sigue siendo uno de los
métodos más ampliamente utilizados en los laboratorios de todo el
mundo.
 Se determinó la biomasa presente en una solución de levadura utilizando
el hemocitómetro y se expresó en unidades de células/L obteniéndose
 un resultado de 2.68 x109 en la cuadricula de 4 x 4 y 2.85 x 109 en la
cuadricula 5 x5 con un promedio de 16.5 y 11.4 de células
respectivamente por cada cuadro.
 El recuento de microorganismos en el hemocitómetro no es un método
muy exacto debido a las irregularidades en la distribución de la muestra,
además de que no se distinguen las células vivas de muertas, sin
embargo tiene la ventaja de ser un equipo sencillo, rapidez para obtener
los resultados y la facilidad para observar la morfología de los
microorganismos presentes.

RECOMENDACIONES

 En caso de que aparezcan burbujas, el cubreobjetos se haya movido se

tiene que repetir el procedimiento.
 Enfocar el microscopio hasta que pueden verse nítidas las células para
que el conteo puede ser exacto y no genere alteraciones en el resultado.
 Contar la mayor cantidad de cuadros posibles ya que al contar más
cuadros, se obtendrá más precisión.
 Agitar bien la dilución con el fin de tener una muestra más homogénea y
al momento de colocar la muestra sobre la cámara hacerlo
correctamente para evitar que se pierda parte de esta de tal manera que
el conteo sea el adecuado.

BIBLOGRAFÍA

Carlosama, P, (2014). Crecimientos de poblaciones en levaduras. Recuperado

el 06 de Diciembre del 2017 de:
https://es.scribd.com/document/250197058/Conteo-de-Levaduras

Mantilla, D, (2011).hemocitometro o cámara de Neubauer. Recuperado el 06 de

Diciembre del 2017 de
http://www.celeromics.com/es/resources/docs/Articles/Conteo-Camara-
Neubauer.pdf

Rivera, M. (2012). Viabilidad y conteo celular. Recuperado de:

https://es.slideshare.net/uscbio225/viabilidad-y-conteo-celular, el 09 de
Diciembre del 2017
ANEXOS
Grafico 1. Hemocitómetro

C1

C2

C3

CÁLCULOS:

Área de C1 y C3 Volumen de C1 y C3
A1,2 = (0.25)2 VC1,C3 = (6.25X10-2)(0.1)
A1,2 = 6.25x10-2mm2 VC1,C3 = 6.25X10-3mm3

Área de C2 Volumen de C2
A2 = (0.2)2 VC2 = (4X10-2)(0.1)
A2 = 4x10-2mm2 VC2 = 4X10-3mm3

Cálculo de esporas:
17+28+14+29+24+42+28+31 9+17+13+14+24
C1,3 = C2 =
8 5
C1,3 = 26.6 ≈ 27 C2 = 15.1 ≈ 15

C1,3 C1,3
27 → 6.25X10-3mm3 15 → 4X10-3mm3
X → 1000mm3 = X → 1000mm3 =
4.36x106esp/L 3.75x106esp/L

4.32X106 +3.75X106
CT = 2
8.07X106
CT = esp/µL
2
CT = (4.035x10 esp/µL)(1x104)
6

CT = 4.035x1010esp/L

Cálculo de levaduras:
 9+3+3+5+2+3+1+2 5+3+11+7+4
C1,3 = C2 =
8 5
C1,3 = 3.5 ≈ 4 C2 = 6

C1,3 C1,3
4 → 6.25X10-3mm3 6 → 4X10-3mm3
X → 1000mm3 = 640levd/L X → 1000mm3 = 1500levd/L

640+1500
CT = 2
CT = 1390levd/L
CT = (1390levd/L)(1x104)
CT = 1.39x108levd/L