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Objetivos
•Comprender la estructura y
organización del material hereditario.
Experimento de transformación de
Avery, MacLeod y McCarty
• Lisaron bacterias IIIS y aislaron sus componentes.
• El ADN es el agente transformante.
• Marcan fagos T2
– DNA (32P)
– Proteínas (35S)
• Infectan E. coli.
• 32P aparece en las
bacterias y progenie.
Reglas de Chargaff
• Chargaff (1949):
– (A + G) / (C + T) = 1
– A/T = 1
– G/C = 1
– (A + T) / (G + C) = %GC
ADN-B
Genética CC Mar 2005/6 • D. Posada, Universidad de Vigo 17
Un descubrimiento revolucionario
Los fagos pares son ADN!1. El Fago "X174 infecta E. coli. Tiene un
genoma de T4 abarca 168 kb. En una El fago # es parecido a
único cromosoma circular de ADN de los fagos T. Genoma
población los distintos genomas son 5386 nucleótidos. Forma icosaédrica.
permutaciones circulares de los ADN!2. Presenta
mismos genes. Algunos genes se extremos pegajosos
repiten al principio y final del complementarios.
cromosoma, lo que se denomina
redundancia terminal.
Genética CC Mar 2005/6 • D. Posada, Universidad de Vigo 23
Cromosomas procarióticos
• La mayoría ADN!2 circular.
• En Bacteria y Archaea el cromosoma se localiza una
masa densa (nucleoide).
• E. coli: 1 cromosoma de 4.6 Mb
– Superenrrollamiento
– Lazos
Cromatina
• La cromatina es el complejo de ADN y proteínas
cromosómicas. Parecida en todos los eucariotas.
• En la cromatina encontramos proteínas histonas y no
histonas.
• Las histonas son comunes, pequeñas, básicas (+)
– Papel fundamental en el empaquetamiento de la cromatina.
– Cinco tipos principales H1, H2A, H2B, H3 y H4,
– En peso, histonas/ADN =1 en todos los eucariotas.
– Muy conservadas evolutivamente (H4 de vacas y guisantes se
diferencian en 2 aminoácidos).
• Las proteínas no histonas son a menudo acídicas (-)
– Difiere mucho entre los tipos celulares y entre los diferentes
organismos.
– En peso, no histona / ADN = 50-100%.
Dominios en lazo
Fibras de 30 nm
Eucromatina y heterocromatina
• Eucromatina: sigue los ciclos habituales de
condensación (máxima en metafase)y
descondensación durante el ciclo celular.
– La mayoría del genoma de una célula activa es eucromatina.
– Transcripción activa.
– Secuencias no repetidas.
Absorbancia UV a 260 nm
• El menor grado de absorción se produce en
estado de doble hélice.
• La absorción aumenta cuando se produce la
desnaturalización pasando a estado de hélice
sencilla (efecto hipercrómico, aumento de la
absorbancia).
• Si degradamos este ADN de hélice sencilla a
nivel de nucleótidos libres, de nuevo aumenta
la absorbancia.
ADN polimerasa I
• Arthur Kornberg (1955): la ADN polimerasa I
lleva a cabo la síntesis de ADN.
• Los componentes necesarios son:
– La ADN polimerasa I
– Desoxirribonucleósidos trifosfato (dNTPs = dATP,
dCTP, dGTP, dTTP), precursores de los
nucleótidos.
– Un molde de ADN.
– Iones de magnesio (Mg2+), que optimizan la
actividad de la ADN polimerasa.
5’ Proteínas SSB
Fragmentos de Okazaki
1 ATP
Polimerasa III 2
Helicasa
Hebra retardada 3 +
Proteínas Iniciadoras
3’
primasa Pares de bases
5’
Polimerasa III
Replisoma
• Las proteínas que intervienen en la replicación forma
un complejo denominado replisoma.
• La hebra retardada puede plegarse:
– las polimerasas de las dos hebras forman un complejo.
– Se acercan los fragmentos de Okazaki. El primosoma puede
ser reusado en la misma horquilla.
Orígenes de replicación
• En levaduras se han identificado secuencias
específicas que parecen conferir la habilidad de
replicación autónoma (secuencias de replicación
autónoma o ARSs).
• Se cree que por lo menos algunas de estas secuencias
corresponden con orígenes de replicación.
• En eucariotas más complejos los orígenes de
replicación no están bien definidos.