APUNTES Alirio Ignacio Cadena perez

CROMATOGRAFÍA DE GAS-SOLIDO Química 8 semestre

 Aspectos importantes:
 La fase móvil es un gas
 Interacción a relación entre la fase móvil y la fase estacionaria la elución se lleva a
cabo gracias a la fase móvil.
Fundamento: se fundamenta en la adsorción.
 Sirve para separar especies que no son fácilmente retenidas
 Se realiza con sustancias gaseosas sobre fases estacionarias sólidas.
 Se lleva a cabo en una columna de relleno o tubulares abiertos en capas porosas
POlH.
Características de la fase estacionaria

 Los adsorbentes son tamices moleculares o poliméricos.

 Los tamices se califican por medio del tamaño o diámetro máximo de las moléculas
que pueden pasar por los poros.
 Es basada en la estructura geométrica de los poros extremos.
 A moléculas más pequeñas, mayor es el área superficial.
Los materiales más empleados son:

 El gel de silica, alúmina, carbón activado etc.

 Polímeros porosos: pequeñas esferas de polímeros que tienen tamaño de
uniforme, fabricado con estireno entrelazado o polimerizado divinilbenceno.
 Especies polares gaseosas (aplicadas).
Limitación:

 La retención es semipermeable de las moléculas activas o polares

 El tiempo de retención es relativamente bajo.
 No es tan utilizada como la cromatografía de gases
 Adsorción irreversible
 Separa gases
 Compuestos volátiles
 Compuestos polares
Características de las columnas:
 De relleno: vidrio, acero inoxidable
 Longitud 2-3cm
 Plot: pared interna está recubierta por una red adsorbente
CROMATOGRAFÍA DE REPARTO O PARTICIÓN

 1941: Richard Laurence; Archer John Porter Martin. Inicio el uso de la cromatografía
de reparto o partición.
 Se utiliza una fase liquida sobre un soporte adecuado.
 Fase estacionaria adsorberte.
Principio
 Los componentes se separan según sus solubilidades.
 Alto valor de α en sustancias ya que son movilizadas.
 Se utiliza para la separación de alta y media polaridad.
Columna

 Columna de fase liquida unida: los líquidos están ligados por medio de un enlace
iónico.
 Pellets muy estables e insolubles
Fase estacionaria
Soporte sólido y un relleno líquido retenido.

 Fases solidas que retienen el agua por adsorción.

 Fases solidas por puentes de hidrogeno.
Fase móvil
Capacidad transportadora de un solvente que puede evaluarse atraves de su capacidad
para formar puentes de hidrogeno.
Cromatograma: se debe elegir el solvente que menos hidrofilico; que permita el
desplazamiento.
Fase normal
 F.E: Polar
 F.M: Apolar
El analito polar es el primero en salir por lo cual el componente menos polar eluye primero.
Fase inversa
 F.E: Apolar
 F.M: Polar
Los compuestos más retenidos son los más apolares.

 La retención y la selectividad se controlan con la composición de la fase móvil.

 Los componentes apolares aparecen primero.
Aplicaciones
Farmacéutica, química alimenticia, clínica.
CROMATOGRAFIA DE PAPEL Y CAPA FINA
CROMATOGRAFÍA DE PAPEL
Es un proceso para el análisis de cualitativo ya que no requiere de equipos sofisticados. En
esta técnica la fase estacionaria es una tira de papel o circulo de papel. En esta la muestra
se deposita en un extremo del papel. Luego el adsorbente o mezcla de disolventes
empleados como fase móvil se hacen ascender por capilaridad en el papel.
CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA
Es una técnica cromatografica que utiliza una placa inmersa verticalmente. Esta placa
cromatográfica consiste en una fase estacionaria polar adherida a una superficie sólida.
Parámetros
 Coeficiente de partición o de reparto de un componente (K): Se define como el
cociente entre la concentración de componente presente en la fase estacionaria y
la concentración de componente presente en la fase móvil.
 Frente del eluyente: máximo recorrido de la fase móvil
 Frente del analito: máximo recorrido del analito; entendiéndose por analito cada uno
de los componentes individuales de la mezcla.
 Relación de recorridos o frentes (Rf): Cociente entre el frente de cada analito y el
frente del eluyente.
Características de la fase estacionaria

 Solido poroso
 Polar
 El tamaño de las partículas del adsorbente: cuanto más finamente dividido esté
mayor será su adhesión al soporte.
 Para algunos casos se puede utilizar yeso como adherente.

•Almidón
• Tipo de muestra
•Azúcares
• Componentes
polifuncionales •Carbón activo (carbón en
• polvo)
(Plantas y animales) •Kieselguhr (tierra de
diatomeas Silica: Si)
• Componentes
neutros o
ligeramente básicos
o lipófilos •Gel de Sílice (polar)
• •(pH 4-5)
• (no susceptibles a la •10-40 mm agente
acidez: Esteroides,
ácidos grasos, ceras •aglomerante: CaSO4
vitaminas •Revelantes: Amarillo y
liposolubles) Verde
Características de la fase móvil

 Generalmente menos polar que la fase estacionaria.

 Los componentes que se desplacen con mayor velocidad serán los menos polares.
 Eluyentes polares rompen mejor las uniones muestra-Fase estacionaria.
Eluyentes no polares no rompen las uniones muestra-fase estacionaria.
Elección del eluyente
 Precio
 Pureza
 No utilizar mezclas complejas
 No utilizar compuestos volátiles
 Evitar que contenga trazas de metales
Eluyentes más empleados
En orden ascendente de derecha a izquierda.

Acetato de
hexano Cloroetano Cloroformo acetona 2-propanol metanol agua
etilo

Aplicaciones
 Separación de colorantes
 Separación de componentes más puros para otros usos.
 Se suele usar para tomar pruebas de la escena de un crimen (en el análisis de
muestras de sangre o de telas).
 Verificación de incendios provocados (identificación de las sustancias químicas
responsables de un fuego).

Ventajas

 Análisis químico de materias orgánicas complejas

 Separación e identificación de compuestos o mezclas
 Identificación en cantidades del orden en microgramos
 No se requieren cantidades grandes de muestra
 Sencillo, barato y con una pureza alta
Desventajas
 Las propiedades de la fase estacionaria pueden alterarse mediante la adición
disoluciones tampón para mantener el pH deseado
  No es un método cuantitativo.
 Es un análisis que resalta frente a otros análisis esto por su simplicidad.
 El disolvente debe agregarse antes para tener una buena capilaridad.

CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN O CROMATOGRAFÍA LIQUIDO-SOLIDO

Aquellos métodos que emplean como fase estacionaria un sólido, se denominan de
adsorción; mientras que los que utilizan un líquido se denominan de partición. La adsorción
se clasifica en tres categorías:
 Adsorción por intercambio: El soluto y el adsorbente se atraen por fuerzas
electrostáticas.
 Adsorción por fuerzas de Van der Waals o Fisisorción: : Es el fenómeno por el cual
un compuesto químico (agente adsorbente) se adhiere a una superficie, y en el que
la especie adsorbida conserva su naturaleza química.
 Adsorción química: Hay interacción química entre el adsorbato y adsorbente.

cromatografia

Adsorcion Particion

Cromatografia Cromatografia Cromatografia Cromatografia

L-S G-S L-L L-G

Características generales

Sílice (SiO2)
Alúmina (Al2O3)
Fase
estacionaria Polaridad
Inercia química
Cromatografía
Tamaño de poro
de adsorción
Solvente
relativamente no
Fase móvil polar como el
hexano o el
isopropiléter.
Polaridad
Las polaridades de varios grupos funcionales del analito se incrementan en el orden
siguiente: hidrocarburos < éteres < ésteres < cetonas < aldehídos < amidas < aminas <
alcoholes < fenoles < ácidos carboxílicos. El agua es más polar que cualquier compuesto
que contenga alguno de los anteriores grupos funcionales.
CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IONICO
Esta hace parte de la cromatografía HPLC. Proceso que permite separar iones, moléculas
polares según las propiedades de carga de las moléculas. Permite separar casi cualquier
tipo de moléculas cargadas; grandes proteínas y pequeños nucleótidos.
PRINCIPIO:
Separa y determina iones mediante el uso de resinas de intercambio iónico.
Como permite separar moléculas cargadas pueden ser unidos y desunidos cambiando el
ambiente iónico y también pueden adherirse en forma irreversible a intercambiadores, se
pueden cambiar en forma química o por el analito.
Conserva los analitos basándose en las interacciones de Coulomb. La separación en los
intercambios iónicos consta de dos fases:

 Sustancias a separar se unen al intercambiar.

 Las sustancias retenidas eluyen de la columna.
DIVISIÓN DE LA CROMATOGRAFÍA IÓNICA

Retiene cationes F.E grupos

C.I.I ANIONICOS
funcionales cargados Positivamente

Retiene cationes F.E grupos

C.I.I CATIONICO
funcionales cargados negativamente

 Sulfonados para resina aniónica: si es resina de aniones eluye primero los cationes,
de lo contrario (resina catiónica) eluye primero los aniones
 Cuando el poro es mayor al tamaño de partícula, esta va a hacer mayor retenida y
el proceso más lento.
 Cuando el poro es menor al tamaño de la partícula, esta va a hacer menor retenida
y queda absorbida en la fase. Este se va alimentando por medio de un buffer bajo
de sal.
Dentro de cada columna hay grupos funcionales que interactúan tanto dentro como fuera.
Intercambios aniónicos más utilizados son:

 METILAMINOETANOL: son menos voluminosos y más hidrofilicos y la unión más

efectiva de los ácidos nucleicos.
 DIETILAMINOETIL: utilizan resinas para eliminar contaminantes presentes en el
ADN y luego de esto se hace columna.
COLUMNAS: Las columnas son las espinas dorsales del análisis de alto rendimiento de
iones y sustancias polares mediante la cromatografía iónica, estas incluyen mecanismos
de separación conocidos como:

 Intercambio de iones.
 Exclusión de iones.
 Formación de par iónico.
RESINAS:

 Aniones con o sin supresión (método electrolítico que suprime o despega ácidos
orgánicos, carbohidratos, aminas).
DETECTORES:

conductividad del Ion

CONDUCTIVIDAD
analito

corriente que se genera por

AMPEROMETRICO
la oxidación o reducción

ESPECTROMETRÍA limitado absorción de la

UV.VIS energía electromagneticas.

CONDUCTIVIDAD: mide conductancia de ion analito cuando pasa a través de una célula
de conductividad, tanto muestra y eluyentes son especies iónicos con elevada
conductividad de fondo.
AMPEROMETRICO: mide la corriente eléctrica selectiva para la oxidación, este se le aplica
un potencial por diferentes electrodos.

 Electrodo de trabajo.
 Electrodo auxiliar.
 Electrodo de referencia.
UV-VIS: observa la absorción de REM, grupos cromoforos presentes en el analito, cuya
aplicación de longitud de onda, la cual depende de enlaces químicos dentro de la molécula,
es utilizado en determinación de nitrotos y aniónicos en agua de mar.
APLICACIONES:
Según el detector:

 Cationes y aniones inorgánicos.

 Oxihaluros.
 Acetatos y haloacetatos.
Con detección UV-VIS:

 Nitratos y aniónicos
 Cromo (Gt) (derivatización + detección uv)
Con detección amperometrica:

 Azúcares en zumos, mieles, vinos y alcoholes de azúcar.

CROMATOGRAMA
Es el resultado gráfico donde se presentan los resultados obtenidos de acuerdo al análisis.
Requisito de muestra:

 La muestra debe ir etiquetada, sellada y filtrada de 0.45Mm y se necesita 2L de

muestra.
 La conductividad máxima será de 2000us
 Si la muestra contiene materia orgánica deben ser pasados por columnas para
eliminarla.

VENTAJAS:

 Alta capacidad
 Alta resolución.
 Paso concentrador.
 Con una misma columna se pueden utilizar diferentes PH y obtener diferentes.

DESVENTAJAS:

 Las muestras deben estar desmineralizadas

ETAPAS DEL PROCESO

 Equilibración ---- FE condiciones adecuadas.

 Lavado de muestra.
 Elución.
 Regeneración.
CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓNPOR TAMAÑO
La Cromatografía de exclusión por tamaño, también se denomina “cromatografía de
permeación en gel” (GPC) o Cromatografía de filtración gel (GFC).
La cromatografía de exclusión por tamaño, es un tipo de cromatografía de líquidos en la
que la fase estacionaria es un material poroso que permite la elución diferencial de los
solutos en función de sus tamaños moleculares.
Tipos
Cromatografía de Filtración
 Disolvente agua
 Muestras Solubles en agua,
 Biopolímeros
 Empaque Suave, Gel
 Hidrofílica (Sephadex)
Cromatografía Permeación
 Disolventes THF, Decalina,
 Tolueno
 Muestras Polímeros Orgánicos
 Empaque, Poliestireno entrecruzado (Styragel)
CARACTERISTICAS
1. El tiempo de residencia medio en los poros depende del tamaño efectivo de las
moléculas del analito.
2. El analito no interacciona física o químicamente con la fase estacionaria.
3. La Fase estacionaria es inerte, por lo que la columna no se desactiva.
4. Hay un límite superior para el tiempo de retención.
5. Los rellenos son pequeñas partículas (10μm) de sílice o de polímeros.
6. Usa las características físicas de los analitos.
7. Los solutos son generalmente sustancias de peso molecular elevado.
La separación es sencilla, sin complicaciones
Con la SEC, las moléculas se separan de más grandes a más pequeñas en proporción a
su peso molecular en disolución.
LÍMITE DE EXCLUSIÓN
El límite de exclusión es la masa molecular máxima de una especie que podrá penetrar en
los poros.
 Rellenos de columna
 Distintos tamaños promedio de poro.
 Copolímeros de estireno y divinilbenceno entrecruzados.
  Son hidrófobos.
 En la actualidad se fabrican geles hidrofilicos .
 Tamaño de poro fácilmente controlable según el grado de entrecruzamiento.
Aplicaciones
 Separación de las moléculas de elevada masa molecular , de productos naturales
de las especies de baja masa molecular y de las sales.
 Separación de homólogos y oligómeros.
 Deterxminación rápida de las masas moleculares o en la distribución de masas
moleculares en los grandes polímeros o en los productos naturales.
 Desalado. Proteínas, polisacáridos, polipéptidos etc. Pueden ser desalados antes
de ser concentrados o liofilizados.
 Eliminación de fenol de las preparaciones de ácidos nucléicos.
Ventajas
 Sólo una cantidad limitada de bandas se pueden acomodar porque la escala de
tiempo de Cromatograma es corta
 Inaplicabilidad en muestras con analito de dimensiones similares (como los
isómeros).
 En general, se requiere una diferencia de 10% en las masas moleculares para
conseguir una resolución razonable.
 Se obtiene una medición aproximada, ya que la relación entre volumen
hidrodinámico y peso molecular no es la misma para todos los polímeros,
 Limitada capacidad de pico (baja resolución)

Desventajas
 Tiempos de separación cortos y muy bien definidos.
 Bandas estrechas que permiten una buena sensibilidad.
 No hay pérdida de muestra porque los solutos no interaccionan con la fase
estacionaria.
 No se desactiva la columna por la interacción del soluto con el relleno.
 Trabaja con altos PM y tiene tiempos de corrida cortos
 Tiempos de separación y orden de elución fácilmente predecibles
 No existen pérdidas o reacciones en la columna
 Desarrollo de métodos relativamente simple, sin gradientes
CROMATOGRAFÍA DE FLUIDO SUPERCRITICO
Aquel que tiene propiedades que están en un rango intermedio de estado gas-solido
propiedades como densidad y viscosidad
Difusividad: propiedad de cualquier sustancia de generar difusión en otro medio.
CFS

 Tiene estructura similar a la CL pero usa un fluido supercrítico en fase móvil.

 Maneja condiciones hibridas entre la fase liquida y la fase gaseosa, puede incluir
propiedades tanto de la CL como de la CG.
 Comportamiento termodinámico regulado por la temperatura y la presión

𝐶𝑓𝑒
𝐾=
𝐶𝑓𝑚

 Interacción entre las moléculas del flujo de entrada y moléculas de soluto.

 Efecto mecánico de la presión sobre la fase estacionaria.
 Efecto termodinámico afecta la solubilidad.
 La temperatura no es un factor diferenciador de la solubilidad pero la presión si lo
es.
Fase móvil
 El CO2 es de mayor uso
 Tiene rango de temperaturas y presiones.
 Es un excelente solvente para números grandes d moléculas orgánicas no polares.
 Es una sustancia transparente en el ultravioleta
 Algunas veces se hacen modificaciones orgánicas (como metanol) son introducidas
en pequeñas concentraciones (1%) para mejorar la selectividad.
 Poseen densidad con el líquido y facilidad de expansión como los gases, tiene baja
tensión superficial facilitando la miscibilidad con otras sustancias (penetrabilidad)
Instrumentación
 Es similar a la HPLC aunque los requerimientos de T° y P, deben ser regulados
según el fluido supercrítico.
 Debido a la baja viscosidad de los fluidos SC, las columnas deben ser mucho mas
largas que la de CL.
 Se pueden aplicar las mismas columnas usadas en CL y CG pero más largas y de
menor diámetro.
Son de mayor uso las capilares
 PLOT
  WCOT
 SCOT
 Las columnas empaquetadas son de menor uso
Detectores

 Detector de fotoionización: Son universales y de uso común en esta cromatografía

 Detector fotométrico de llama y termoiónico.
 Detector de emisión de fluorescencia
 Detector de masas
 Detector UV
Propiedades
Alta Difusividad
Solvatación; interacción iónica
 Compresividad
 Baja viscosidad
 Baja tensión superficial penetrabilidad
 Amigable con el medio ambiente porque usa solventes orgánicos
 El analito es fácilmente recuperado, mediante la reducción de presión del sistema
cambiando el estado de la fase móvil.
 Puede ser usado para el análisis de moléculas a temperaturas de hasta 30 C°.
Efectos de la presión
 Temperatura critica es aquella en la que hay una distinción dela fase liquida regulada
por la presión.
 La presión incrementa los resultados en menor tiempo de retención mejor
resolución y menor tiempo de retención.
 Mejor resolución y menor tiempo de retención al ejercer gradientes de presión.
 Separa componentes que no se pueden manejar fácilmente en la CL ni en CG.
 Las separaciones son más rápidas que en la CL.
 Corre a menor temperatura que la CG
 Benéfico industrial: purificación más rápida de eluyentes.
Aplicaciones
 Alimentos
 Medicamentos
 Producción de ácidos
 Producción de alcohol
FIN