RESULTADOS:

Curva tipo de nitritos

Tubo no. 1 Nanomoles de nitrito Absorbancia a 520nm
1 0 0
2 5 0.173
3 10 0.296
4 20 0.549
5 30 0.778
6 40 0.912
7 50 1.037

CURVA TIPO DE NITRITOS

1.2
y = 0.0208x + 0.0742
1 R² = 0.9768
ABSORBANCIA A 520NM

0.8

0.6
Absorbancia a 520nm

0.4 Linear (Absorbancia a 520nm)

0.2

0
0 10 20 30 40 50 60
NANOMOLES DE NITRITO

Curva tipo de proteínas

Tubo no. 1 Ug de albumina Absorbancia a 600nm
1 0 0
2 100 0.204
3 200 0.394
4 300 0.600
5 400 0.731
6 500 0.871
 CURVA TIPO DE PROTEINAS
1
0.9 y = 0.0018x + 0.028
R² = 0.9921
0.8
ABSORBANCIA A 600NM

0.7
0.6
0.5
Absorbancia a 600nm
0.4
Linear (Absorbancia a 600nm)
0.3
0.2
0.1
0
0 100 200 300 400 500 600
Ug de albumina

Determinación de actividad de formiato deshidrogenasa.

Tiempo Extracto de los cultivos Absorción a 600nm
(minutos) 1 2 3 4 Testigo
Cada 30 seg
0 1.291 1.412 1.499 1.343 1.436
1 1.142 1.394 1.488 0.953 1.430
2 1.048 1.375 1.476 0.412 1.425
3 0.916 1.366 1.465 0.079 1.405
4 0.823 1.356 1.456 0.079 1.396
5 0.687 1.349 1.448 1.387
6 0.563 1.339 1.437 1.376
7 0.424 1.331 1.427 1.367
8 0.324 1.326 1.422 1.356
9 0.212 1.317 1.415 1.348
10 0.130 1.308 1.407 1.338
11 0.112

Determinación de la actividad total de nitrito reductasa.

Extractos de cultivos Dilución Absorbancia a 520nm nMolnitrito/mL
1 0.906 79980
2 0.353 26800
3 0.460 37080
4 1:4 0.729 251840
Testigo 0.028 0
Determinación de la actividad del complejo formiato deshidrogenasa-nitrato reductasa.
Extractos de cultivos Dilución Absorbancia a 520nm nMolnitrito/mL
1 1:2 0.650 55360
2 0.096 1048
3 0.069 0
4 1:2 0.687 58920
Testigo 0.049 0

Determinación de proteína.
Extractos de Alícuota de la Absorbancia a Absorbancia a Ug proteína/mL
cultivos dilución 600nm para 0.2 600nm para 0.4 promedio
1 0.2 0.4 0.284 0.463 36.95
2 0.2 0.4 0.268 0.467 32.83
3 0.2 0.4 0.260 0.442 31.33
4 0.2 0.4 0.308 0.556 38.85
MANEJO DE DATOS.
-Cuantificación de nitritos.
Se calculan los nanomoles de nitritos interpolándolos en la ecuación de la recta.
Ecuación de la curva tipo de nitritos.

𝑦 = 0.0742 + 0.0208𝑥
Despejando x obtenemos que
𝑦 − 0.0742
𝑥=
0.0208
PASO 1-Para cada uno de los extractos determinamos los nanomoles de nitrito.
0.906 − 0.0742
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 =
0.0208
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 39.99𝑛𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠𝑁𝑖𝑡𝑟𝑖𝑡𝑜
0.353 − 0.0742
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 =
0.0208
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 13.40𝑛𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠𝑁𝑖𝑡𝑟𝑖𝑡𝑜
0.460 − 0.0742
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 =
0.0208
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = 18.54𝑛𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠𝑁𝑖𝑡𝑟𝑖𝑡𝑜
0.729 − 0.0742
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 =
0.0208
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 31.48𝑛𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠𝑁𝑖𝑡𝑟𝑖𝑡𝑜
PASO 2-Calcular los nanomoles por mililitro de nitrito para cada extracto.
1
nMolesnitrito/mL = nMoles(𝑎𝑙𝑖𝑐𝑢𝑜𝑡𝑎)(𝐹. 𝐷)(𝐹. 𝐷 𝑒𝑥𝑡𝑟𝑎)
 1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = (39.99)( )(200)
0.1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 79980𝑛𝑀𝑜𝑙𝑛𝑖𝑡𝑟𝑖𝑡𝑜/𝑚𝐿
1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = (13.40)( )(200)
0.1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 26800𝑛𝑀𝑜𝑙𝑛𝑖𝑡𝑟𝑖𝑡𝑜/𝑚𝐿
1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = (18.54)( )(200)
0.1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = 37080𝑛𝑀𝑜𝑙𝑛𝑖𝑡𝑟𝑖𝑡𝑜/𝑚𝐿
1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = (31.48) ( ) (200)
0.1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 251840𝑛𝑀𝑜𝑙𝑛𝑖𝑡𝑟𝑖𝑡𝑜/𝑚𝐿
PASO 3-Calcular los nmoles de nitrito/mL/min
79980
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 =
10
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 7998nMolnitrito/mL/min
26800
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 =
10
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 2680nMolnitrito/mL/min
37080
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 =
10
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = 3708nMolnitrito/mL/min
251840
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 =
10
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 25184nMolnitrito/mL/min
PASO 4-Calcular la actividad específica para nitrito.
7998
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 =
36.95
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 216.45nMolnitrito/mg/min
2680
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 =
32.83
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 81.63nMolnitrito/mg/min
3708
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 =
31.33
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = 118.35nMolnitrito/mg/min
25184
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 =
38.85
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 648.23nMolnitrito/mg/min
-Determinación de la actividad del complejo formiato deshidrogenasa-nitrato reductasa.
Se calculan los nanomoles del complejo interpolándolos en la ecuación de la recta.
Ecuación de la curva tipo de nitritos.

𝑦 = 0.0742 + 0.0208𝑥
Despejando x obtenemos que
𝑦 − 0.0742
𝑥=
0.0208
PASO 1-Para cada uno de los extractos determinamos los nanomoles del complejo.
0.650 − 0.0742
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 =
0.0208
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 27.68𝑛𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠
0.096 − 0.0742
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 =
0.0208
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 1.098𝑛𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠
0.069 − 0.0742
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 =
0.0208
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = −0.25𝑛𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠
0.687 − 0.0742
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 =
0.0208
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 29.46𝑛𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠
PASO 2-Calcular los nanomoles por mililitro de complejo para cada extracto.
1
nMolesnitrito/mL = nMoles(𝑎𝑙𝑖𝑐𝑢𝑜𝑡𝑎)(𝐹. 𝐷)(𝐹. 𝐷 𝑒𝑥𝑡𝑟𝑎)

1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = (27.68)( )(100)(2)
0.1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 55360𝑛𝑀𝑜𝑙/𝑚𝐿
1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = (1.048)( )(100)
0.1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 1048𝑛𝑀𝑜𝑙/𝑚𝐿
1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = (−0.25)( )(100)
0.1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = 0𝑛𝑀𝑜𝑙/𝑚𝐿
1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = (29.46) ( ) (100)(2)
0.1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 58920𝑛𝑀𝑜𝑙/𝑚𝐿
PASO 3-Calcular los nmoles de complejo/mL/min
 55360
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 =
10
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 5536nMol/mL/min
1048
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 =
10
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 104.8nMol/mL/min
58920
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 =
10
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 5892nMol/mL/min
PASO 4-Calcular la actividad específica para el complejo.

5536
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 =
36.95
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 149.82nMol/mg/min
104.8
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 =
32.83
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 3.19nMol/mg/min
5892
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 =
38.85
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 151.66nMol/mg/min
-Determinación de actividad de formiato deshidrogenasa.
PASO 1-Se resta el valor de la absorbancia inicial a la absorbancia inicial para cada extracto.
∆𝐴600𝑛𝑚 = 𝑇𝑜 − 𝑇𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙.
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 1.291 − 0.112 = 1.179∆𝐴600𝑛𝑚
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 1.412 − 1.308 = 0.104∆𝐴600𝑛𝑚
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = 1.499 − 1.407 = 0.092∆𝐴600𝑛𝑚
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 1.343 − 0.079 = 1.264∆𝐴600𝑛𝑚
𝑇𝑒𝑠𝑡𝑖𝑔𝑜 = 1.436 − 1.338 = 0.098∆𝐴600𝑛𝑚
∆𝐴600𝑛𝑚
PASO 2-Calcular los 𝑑𝑒 𝑓𝑜𝑟𝑚𝑖𝑎𝑡𝑜 𝑑𝑒𝑠ℎ𝑖𝑑𝑟𝑜𝑔𝑒𝑛𝑎𝑠𝑎.
𝑚𝐿

∆𝐴600𝑛𝑚 1
= ∆𝐴600𝑛𝑚 ( ) (𝐹. 𝐷)
𝑚𝐿 𝑎𝑙𝑖𝑐𝑢𝑜𝑡𝑎
1 ∆𝐴600𝑛𝑚
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 1.179(0.1) (20) = 235.8 𝑚𝐿

1 ∆𝐴600𝑛𝑚
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 0.104 ( ) (20) = 20.8
0.1 𝑚𝐿
 1 ∆𝐴600𝑛𝑚
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 0.092 ( ) (20) = 18.4
0.1 𝑚𝐿
1 ∆𝐴600𝑛𝑚
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 1.262 ( ) (20) = 252.8
0.1 𝑚𝐿
∆𝐴600𝑛𝑚
PASO 3- calcular los de la formiato deshidrogenasa.
𝑚𝐿/𝑚𝑖𝑛

235.8
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 =
6
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 39.3∆𝐴600𝑛𝑚 /mL/min
20.8
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 =
10
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 2.08∆𝐴600𝑛𝑚/mL/min
18.4
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 =
10
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = 1.84∆𝐴600𝑛𝑚/mL/min
252.8
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 =
4
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 63.2∆𝐴600𝑛𝑚/mL/min
PASO 4-Calcular la actividad específica para la formiato deshidrogenasa.
39.3
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 =
36.95
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 1.063∆𝐴600𝑛𝑚 /mg/min
2.08
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 =
32.83
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 0.0633∆𝐴600𝑛𝑚 /mg/min
1.84
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 =
38.85
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = 0.05872∆𝐴600𝑛𝑚/mg/min
63.2
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 =
38.85
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 1.6267∆𝐴600𝑛𝑚 /mg/min
-Determinación de proteína.

PASO 1- Calcular los Ug de proteína sustituyéndolos en la ecuación de la curva tipo de proteína.

𝑦 = 0.0279 + 0.00175𝑥
Despejando x obtenemos que
𝑦 − 0.0279
𝑥=
0.00175
Para alícuota de 0.2mL
0.284 − 0.0279
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = = 146.34𝑢𝑔
0.00175
0.268 − 0.0279
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = = 137.2𝑢𝑔
0.00175
0.260 − 0.0279
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = = 132.62𝑢𝑔
0.00175
0.308 − 0.0279
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = = 160.05𝑢𝑔
0.00175
Para alícuota de 0.4mL
0.463 − 0.0279
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = = 248.62𝑢𝑔
0.00175
0.467 − 0.0279
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = = 250.91𝑢𝑔
0.00175
0.442 − 0.0279
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = = 236.62𝑢𝑔
0.00175
0.556 − 0.0279
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = = 301.77𝑢𝑔
0.00175
PASO 2-Convertir ug a mg
Para alícuota de 0.2mL
146.34𝑢𝑔(1𝑚𝑔)
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = = 0.14634𝑚𝑔
1000𝑢𝑔
137.2𝑢𝑔(1𝑚𝑔)
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = = 0.1372𝑚𝑔
1000𝑢𝑔
132.52𝑢𝑔(1𝑚𝑔)
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = = 0.13262𝑚𝑔
1000𝑢𝑔
160.05𝑢𝑔(1𝑚𝑔)
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = = 0.16005𝑚𝑔
1000𝑢𝑔

Para alícuota de 0.4mL

248.62𝑢𝑔(1𝑚𝑔)
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = = 0.24862𝑚𝑔
1000𝑢𝑔
250.91𝑢𝑔(1𝑚𝑔)
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = = 0.25091𝑚𝑔
1000𝑢𝑔
236.62𝑢𝑔(1𝑚𝑔)
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = = 0.23662𝑚𝑔
1000𝑢𝑔
301.77𝑢𝑔(1𝑚𝑔)
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = = 0.30177𝑚𝑔
1000𝑢𝑔

PASO 3- obtener los mg/mLproteína

 𝑚𝑔 1
= 𝑚𝑔𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎 ( ) (𝐹. 𝐷)
𝑚𝐿𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 𝑎𝑙𝑖𝑐𝑢𝑜𝑡𝑎
Para alícuota de 0.2mL
1 36.57𝑚𝑔
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 0.14634 ( ) (50) =
0.2 𝑚𝐿
1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 0.1372 ( ) (50) = 34.3𝑚𝑔/𝑚𝐿
0.2
1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = 0.13262 ( ) (50) = 33.15𝑚𝑔/𝑚𝐿
0.2
1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 0.16005 ( ) (50) = 40𝑚𝑔/𝑚𝐿
0.2
Para alícuota de 0.4mL
1 37.32𝑚𝑔
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = 0.24862 ( ) (50) =
0.2 𝑚𝐿
1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = 0.25091 ( ) (50) = 31.36𝑚𝑔/𝑚𝐿
0.2
1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = 0.23662 ( ) (50) = 29.52𝑚𝑔/𝑚𝐿
0.2
1
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = 0.30177 ( ) (50) = 37.71𝑚𝑔/𝑚𝐿
0.2
PASO 4- Promediar las alícuotas.
36.57 + 37.32
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 1 = = 36.95𝑚𝑔/𝑚𝐿
2
34.3 + 31.36
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 2 = = 32.83𝑚𝑔/𝑚𝐿
2
33.15 + 29.52
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 3 = = 31.33𝑚𝑔/𝑚𝐿
2
40 + 37.71
𝐸𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 4 = = 38.85𝑚𝑔/𝑚𝐿
2