1°TÍTULO: Efecto antibacteriano del aceite esencial de canela (Cinnamomum zeylanicum),

orégano (Origanum vulgare) y romero (Rosmarinus officinalis) sobre Pectobacterium

carotovora in vitro

2°ANTECEDENTES

Pectobacterium carotovora es un patógeno ubicuo necrotrófico implicado en la pudrición

blanda bacteriana de muchas frutas, cultivos ornamentales y vegetales producidos en regiones
templadas, resultando en serias pérdidas económicas. Son bacterias Gram-negativas,
anaeróbicas facultativas, móviles no esporuladas pertenecientes a la Familia Enterobacteriacea.
(1)

Los síntomas de pudrición blanda causados por Pectobacterium spp., están mediados por la
secreción de múltiples exoenzimas, que actúan sinérgicamente para degradar las paredes de
células vegetales. Las enzimas de degradación de pectina comprenden el grupo principal de
estas enzimas. La mayoría de las exoenzimas, incluido la pectatoliasa (Pel), poligalacturonasa
(Peh), celulasa (Cel), pectingliasa (Pnl) y las proteasas (Prt) son secretadas por el sistema de
secreción tipo II (T2SS), bajo el control del requisito de sensibilidad y colectividad determinan la
patogenicidad bacteriana. (2)

Como todo patógeno, debe ser controlado para poder así disminuir los daños ocasionados por
este. La Industria Agropecuaria suele recurrir al uso de productos químicos ya que estos, tienen
un efecto rápido en cuanto al control de enfermedades en plantas, pero no tienen en cuenta el
daño que estos productos ocasionan en el consumidor

Buscar párrafo de unión, decir q como es una patógeno necesia ser controlado pero que se usasn
químicos entoces otra propuesta seria los aceites esenciaels

El mecanismo de acción de los aceites esenciales sobre los microorganismos es complejo, y aún
no ha sido explicado totalmente. Es generalmente reconocido que la acción antimicrobiana de
los aceites esenciales depende de su carácter hidrofílico y lipofílico. Los terpenoides son un
ejemplo de los agentes solubles en lípidos que afectan las actividades de las enzimas de
membrana catalizante. Por ejemplo, su acción sobre la cadena respiratoria. Ciertos
componentes de los aceites esenciales pueden actuar como desacopladores cuando interfieren
con la translocación de protones dentro de una vesícula de membrana y subsecuentemente
interrumpen la fosforilación del ADP (metabolismo de la energía primaria). Los terpenoides
específicos con grupos funcionales tales como alcoholes fenólicos o aldehídos, además
interfieren con la integración de membrana o la asociación de proteínas enzimáticas deteniendo
su producción o actividad. (2)

El modo de acción de los antimicrobianos, también depende del tipo de microorganismo y está
relacionado principalmente a la estructura de su pared celular y a la disposición de la membrana
externa en bacterias gram-negativas, por ejemplo, Pseudomonas aeruginosa presenta una
resistencia intrínseca a una amplia variedad de aceites esenciales la cual está asociada con las
superficies hidrofílicas de su membrana externa que es rica en moléculas de lipopolisacaridos.
Una barrera de permeabilidad contra los agentes tóxicos es formada. Pequeñas moléculas
hidrofílicas no son impedidas de atravesar la membrana externa debido a la acción abundante
de las proteínas porinas. Sin embargo, macromoléculas hidrofóbicas tal como las constituyentes
son incapaces de penetrar la barrera. (2)

Los aceites esenciales son productos naturales de valor e importancia económica. Su

bioactividad se investiga a partir de los efectos farmacológicos, producidos por sus metabolitos,
(3)
los cuales son obtenidos por diferentes técnicas fisicoquímicas de los tejidos vegetales . Los
aceites esenciales son en su mayoría sustancias terpénicas y fenilpropánicas, que se almacenan
en los tejidos de órganos vegetales secretores de compuestos aromáticos. (4). En este proyecto
se trabajarán con las hojas (romero y orégano) y el tallo (canela) para la elaboración de aceites
esenciales.

El aceite esencial de romero (Rosmarinus officinalis) contiene α-pineno, camfeno, mirceno,

limoneno, 1,8-cineol, alcanfor, borneol, cariofileno, el aceite esencial de orégano (Origanum
vulgare) está constituido por γ-terpinene, p-cimeme, linalool, cariophyllene, thymol
cravacrol, phenyl-Methyl-Benzoate el aceite esencial de canela (Cinnamomum zeylanicum),
está constituido α-curbebene, linalool, cariophyllene, eugenol, cinnalmaldehyde, 2-propionyl
benzodioxol, eugenil acetate, cinnamil alcohol acetate.(1,4) colocar los trabajos relizados de cada
aceite, en que se trabajó etc

3°JUSTIFICACION

Los productos alimenticios están frecuentemente propensos a la contaminación causada por

agentes fitopatógenos, algunos de ellos generados durante o después de la cosecha, lo que trae
consigo pérdidas significativas en la calidad, cantidad y composición de nutrientes, con la
consecuente reducción del valor en el mercado.

En los últimos años, la producción de maíz ha crecido en más del doble, esto se debe a que cada
[5]
vez son mayores las áreas sembradas. Económicamente el maíz es el tercer cultivo más
importante a nivel nacional [6] el maíz como muchos otros cultivos, es susceptible a diversas
enfermedades que afectan el desarrollo de la planta y su fruto. Las enfermedades se ven
favorecidas por las condiciones ambientales.

Según la Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación, los casos
registrados de pérdidas de alimentos en mal estado en los que se incluyen cereales, granos,
nueces, frutas, verduras, carnes y especias, se reportan en cifras equivalentes a toneladas
métricas de alimentos cada año.[7] Gran cantidad de microorganismos fitopatógenas se
encuentran ampliamente distribuidas en la naturaleza, para combatirlos se aplican
generalmente pesticidas que son sustancias químicas que si bien ayudan a eliminar estos
fitopatógenos también llegan a causar daño a los consumidores por tanto, la necesidad de
reducir el uso de químicos sintéticos en la agricultura ha incrementado el interés por la posible
aplicación de aceites esenciales para el control de fitopatógenos, con el fin de garantizar la
seguridad alimentaria.

En los últimos años los aceites esenciales naturales se han convertido en un tema de
investigación en beneficio de la industria alimentaria puesto que han demostrado una
importante actividad antifúngica frente a hongos fitopatógenos del aceite esencial de romero,
orégano y canela pero no se ha demostrado la actividad antibacteriana o bacteriostático por lo
tanto es justificable comprobarlo sobre la acción que tienen en la bacteria Pectobacterium
carotovora

4° PROBLEMA

¿Cuál es el efecto antibacteriano del aceite esencial de las hojas de Rosmarinus officinalis
“romero”, Origanum vulgare “orégano” y del tallo de Cinnamomum zeylanicum “canela” a
las concentraciones de 5, 25 y 100 ug/ml sobre la viabilidad de Pectobacterium carotovora in
vitro?

Variable dependiente: viabilidad de Pectobacterium carotovora.

Variable independiente: las concentraciones a usar de los aceites esenciales.

5°HIPOTESIS

Los aceites esenciales de las hojas de Rosmarinus officinalis “romero”, Origanum vulgare
“orégano” y del tallo de Cinnamomum zeylanicum “canela” a las concentraciones de 5ug/mL
no tiene acción bacteriana en cambio, a la concentración de 25 ug/mL se tiene acción
bacteriostática y, a la concentración de 100 ug/ mL se tiene acción bactericida sobre la viabilidad
de Pectobacterium carotovora.
6° POBLACIÓN MUESTRAL

MATERIAL BIOLOGICO

Población Muestral 1: Todos los cultivos de Pectobacterium carotovora –código- del laboratorio
de Fitopatología existentes entre Julio-diciembre del 2018 de la Universidad Nacional de Trujillo-
Perú.

Muestra 1: Un cultivo de Pectobacterium carotovora del laboratorio de Fitopatología.

Unidad Muestral: 3x 108 bacterias/mL

Población Muestral 2: Todas las plantas de Rosmarinus officinalis “romero” del mercado La
Hermelinda Trujillo- Perú expendidos entre Julio-diciembre del 2018.

Muestra 2: ¿Cuánto se utlizara?

Unidad Muestral: 1ug/mL

Población Muestral 3: Todas las plantas de Origanum vulgare “orégano” del mercado La
Hermelinda Trujillo- Perú expendidos entre Julio-diciembre del 2018.

Muestra 3: ¿Cuánto se utlizara?

Unidad Muestral: 1ug/mL

Población Muestral 4: Todas las plantas de Cinnamomum zeylanicum “canela” del mercado La
Hermelinda Trujillo- Perú expendidos entre Julio-diciembre del 2018.

Muestra 2: ¿Cuánto se utlizara?

Unidad Muestral: 1ug/mL

7°DISEÑO EXPERIMENTAL

ANTES DESPUÉS

A A´

A A A A1´ A2´ A3´

A A A A1´ A2´ A3´

A A A A1´ A2´ A3´

A: Cultivo in vitro de Pectobacterium carotovora

A´: Cultivo in vitro de Pectobacterium carotovora sin estímulo.

A1´: Cultivo in vitro de Pectobacterium carotovora después de aplicado el estímulo del aceite
esencial de Rosmarinus officinalis “romero”.

A2´: Cultivo in vitro de Pectobacterium carotovora después de aplicado el estímulo del aceite
esencial de Origanum vulgare “orégano”.

A3´: Cultivo in vitro de Pectobacterium carotovora después de aplicado el estímulo del aceite
esencial de Cinnamomum zeylanicum “canela”.

Concentración de 5 ug/mL del aceite esencial.

Concentración de 25 ug/mL del aceite esencial.

Concentración de 100 ug/mL del aceite esencial.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS mas referencias

(1) Velluti A, Sanchis V, Ramos A.J, Egido J, Marin S. Inhibitory effect of cinnamon, clove,
lemongrass, orégano and palmarose essentil oil on growth ant fumonisin B1 production
by Fusarium proliferatum in maize grain. Intern J Food Microbiol. 2008;89:145-154.
(2) Kalemba D, Kunicka A. Antibacterial and Antifungal Properties of Essential Oils. Current
Medicinal Chem. 2003;10(10):813-829.
(3) Carhuapoma M, López S, Roque M, Velapatiño B, Whu C, Bell C, Whu-W D.
Actividad antibacteriana del aceite esencial de Minthostachys mollis griseb
“Ruyaq muña”. Ciencia e Investigación. 2009;12(2):83-89.
(4) Santoyo S, Cavero S, Jaime L, Ibáñez E, Senorans FJ, Reglero G. Chemical
composition and antimicrobial activity of Rosmarinus officinalis L. essential oil
obtained via supercritical fluid extraction. J Food Prot. 2005;68(4):790-795.
(5) Instituto Nacional de Estadística e Informática (INEI). Nota de Prensa. Lima (Perú). Nº
009 – 23 enero 2018
(6) Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentacion (FAO).
Pérdidas y desperdicio de alimentos en el mundo. Roma (Italia). 2015: 42 p.
(7) Cano C, Bonilla P, Roque M, Ruiz J. Actividad Antimicótica in vitro y Metabolitos
del Aceite esencial de las hojas de Minthostachysmollis (Muña). Rev Peru Med
Exp Salud Publica. 2008;25(3):298-301.
(8) Lara-Cortez, E . Elaboración de un empaque biodegradable con actividad antimicrobiana
a base de proteína de suero. Tesis de Maestría en Ciencias. Programa de Postgrado en
Alimentos del Centro de la Republica (Propac). Universidad Autónoma de Querétaro.
México.2006

Activación de Pectobacterium carotovora

La cepa de Pectobacterium carotovora será donada por Mg. Wilson krugg del Laboratorio de
Fitopatología de la Universidad Nacional de Trujillo -Perú. La cepa será almacenada en una
mezcla criogénica a 70°C (preguntar cómo se almacenó). Para la activación, la bacteria se
sembrará en tubos que van a contener 3 ml del Caldo Infusión Cerebro- Corazón e incubar por
24 horas a 30°C. Para confirmar la pureza de la cepa, se realizará una siembra por puntura en
Agar Soya- Triptofano(TSA), una vez verificada la pureza se realizará una resiembra inclinando
los tubos de prueba y añadiendo Agar Soya-Triptofano e incubar a 30°C por 24 horas ( Lara-
Cortez, 2006)

CURVA DE CRECIMIENTO DE LA BACTERIA PARA AVERIGUAR A QUE TIEMPO ES LA FASE

LOGARITMICA PARA PODER APLICAR EL ACEITE ALLI
OBTENER PLANTAS

PREPARAR O SELECCIONAR (LAS SANAS LAS MAS VERDES INTEGRAS SIN LESIONES SIN INDICIOS
DE HONGOS O ATAQUES POR BACTERIAS

Preparación para el extracto(secas o verdes )

En que y cuanto tiempo para que se sequen

Que indicio para que se sequen

(T tiempo lugar)

El extracto en si

La preparación de las concentraciones

Preparación del medio de cultivo,

Evaluación: inoculación medición control

estadistica