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INDICE.

1) Determinación de Hemoglobina.( Método de Cianometahemoglobina ) .

2) Determinación del Volumen Globular.( Hematocrito ).( Método de Wintrobe ) .

3) Conteo Global de Leucocitos .

4) Conteo Diferencial de Leucocitos.

5) Eritrosedimentación.

(1) Hemoglobina .

Método: Cianometahemoglobina .
Fundamento: Se diluye la sangre en una solución de ferrocianuro potásico y cianuro
potásico. El ferrocianuro potásico oxida las hemoglobinas a hemoglobina (Hi ;
metahemoglobina ) , y el cianuro potásico proporciona los iones cianuro (CN ) para formar
hemoglobincianuro (HiCN ,cianometahemoglobina ),que tiene una absorción máxima a una
longitud de onda de 540nm .El resultado de la muestra se obtiene por comparación con una
solución de HiCN estándar.
Composición de Reactivos:

Preparación del Reactivo de Drabkin


Pesar 1 g de bicarbonato de sodio ,0.05 g de cianuro de potasio (veneno) y 0.02 g de
ferricianuro de potasio se disuelven en agua (400-500 ml ) y se completa en disolución a1
litro con agua .Esta solución debe guardarse al abrigo de la luz

Estabilidad:

Muestra:

De 3 a 5 ml de sangre total para 1 gota (50 l) de EDTA 10% , (1 mg/ml de sangre).
Mezclar.

Técnica:

A. Se miden 5ml de reactivo de Drabkin y se colocan en un tubo de ensayo de 13 x 100


mm.
B. Se toman 0,02 ml de sangre con una pipeta de Sahli ; se limpia bien la pipeta por
fueray se
diluye en el reactivo, mezclándose se esperarán 10 min.
C. Se lee con el filtro a longitud de onda escogida contra blanco de reactivo.

Cálculo:

Si se utiliza patrón se emplea la fórmula fundamental de la colorimetría:

CM = DOM x CP
DOP
Si se utiliza un espectrofotómetro a 546 nm se multiplicará la DO de la muestra por 36,8
( coeficiente de extinción molar).
Si se utiliza curva de calibración, buscar directamente en ella de acuerdo con el % de T ó la
DO.

Factor de conversión: g/dl x 10 = g/l


Valores de referencia:
Edad(años) Hb(g/l)
0.6 a 4 110
5a9 115
10 a 14 120
Varones adul 130-160
tos
Mujeres adultas 120-145
Mujeres gestantes 110

Control de calidad:

Introducción de muestras duplicadas a ciegas. ( Repetibilidad )


Correlación intra e intersección. ( Repetibilidad )

Materiales requeridos:

D. Pipeta de Sahli.
E. Pipeta de 5 ml o dispensador.
F. Tubos de 13 x 100 mm.
G. Equipo de lectura (fotómetro).

Semiología:

A) Aumento:
H. Hemoconcentración. ( Policitemia, quemaduras graves )
I. Enfermedad pulmonar obstructiva cónica.
J. Fallo cardíaco congestivo.

B) Disminución:
K. Anemias.
L. Hipertiroidismo.
M. Cirrosis hepática.
N. Hemorragia severa.
O. Reacciones hemolíticas debidas a:
P. Transfusiones sanguíneas incompatibles.
Q. Reacciones a sustancias químicas y drogas.
R. Reacciones a agentes infecciosos.
S. Reacciones a agentes físicos ( quemaduras severas y válvulas cardíacas
artificiales).
T. Varias enfermedades sistémicas.
a. Enfermedad de Hodkin.
b. Leucemia.
c. Linfoma.
d. Lupus eritematoso sistémico.
e. Carcinomatosis.
f. Sarcoidosis.
g. Necrosis renal cortical.
C) Variación en los niveles de hemoglobina:

Después de transfusiones, hemorragias, quemaduras ( la hemoglobina y el hematocrito


aumentan durante e inmediatamente después de la hemorragia).

Bibliografía

1- Henry, J. B. Diagnóstico y Tratamiento en el Laboratorio Clínico. Edit. Jims. Barcelona


1993.
2- Fischbach F. A Manual of Laboratory & Diagnostic Tests 1992.
(2) Determinación del Volumen Globular ( Hematocrito )

El hematocrito venoso mide e tanto por ciento del volumen total de una muestra de sangre
venosa ocupado por los hematíes o, dicho de otro modo ,es la relación entre el volumen de
eritrocitos y el de sangre total. Se expresa como fracción de la unidad.
El hematocrito se puede determinar mediante procedimientos manuales tales como : el
macrométodo de Wintrobe y por micrométodo.

Macrométodo

Método : Wintrobe .

Fundamento:

El volumen globular ó hematocrito se obtiene sometiendo un volumen determinado de


sangre a una fuerza centrífuga de 2260 G (3500 r p m), durante 30 min. en un tubo graduado
o no de un diámetro interno uniforme, estableciendo el volumen en % del total de sangre
centrifugada.

Muestra:

De 3 a 5 ml de sangre total para 1 gota (50 l) de EDTA 10% , (1 mg/ml de sangre).
Mezclar.

Técnica:

Homogeneizar muestra.
Con una jeringuilla que posea una aguja de longitud similar al tubo de diámetro interno
uniforme llenar los tubos hasta la marca de 10 de la derecha si estos están graduados .
Centrifugar a 3500 r.p.m. durante 30 min.
Realizar la lectura en la escala de la derecha del tubo graduado de la columna de
eritrocitos aglomerados. Informar el % del volumen globular según el SI o como fracción
de la unidad.
Factor de Conversión:

fracción de la unidad x 100 = %

Valores de referencia:
Edad (años) Hto (l/l )
0.6 a 4 0.33
5a9 0.34
10 a 14 0.36
Adultos varones 0.40
Adultos mujeres 0.38
Mujeres gestantes 0.33

Micrométodo:

Método :

Fundamento:

La sangre se centrifuga en tubos capilares con una fuerza centrífuga relativa de 14 490 g
durante 4 min.

1ml de sangre para 10 µl de EDTA al 10% (1 mg/ml de sangre). Mezclar.


Si los capilares vienen con anticoagulante, se podrán montar estos directamente del pulpejo
del dedo o del talón teniendo el cuidado de no apretar este para facilitar la salida de la
sangre pues se diluirá la muestra con el líquido tisular, lo que falseará el resultado por mayor
dilución.
Técnica:

U. Mezcle y llene el capilar con sangre total procedente del tubo, del pulpejo del dedo o
del talón del pie en caso de que el capilar contenga anticoagulante.
V. Selle el capilar por uno de los extremos con plastilina o calor, en este último caso
aleje la llama de la muestra de sangre presente en el interior del capilar para evitar
hemólisis.
W. Centrifugar de 3 a 5 mints según especifique el fabricante para el uso de la
microcentrífuga.
X. Leer el volumen globular en un lector de microhematocritos.

Factor de Conversión:

fracción de la unidad x 100 = %

Valores de referencia:
(3) Recuento Global de Leucocitos.

Fundamento:

El recuento leucocitario es un proceder imprtante en el diagnóstico y pronóstico de las


enfermedades. Patrones específicos de respuesta pueden ser esperados en los distintos
tipos de patologías. Es conocido que ciertas enfermedades se acompañan del incremento o
la disminución de un tipo leucocitario que es proporcional a la severidad de los signos y
síntomas de la enfermedad .
Debido a que los leucocitos son afectados por numerosas entidades morbosas, el conteo
global de leucocitos sirve como una guía útil de la severidad de la enfermedad.

Al extraer la sangre venosa con un anticoagulante y ser diluida con un ácido débil,los
hematies se destruyen quedando exclusivamente los leucocitos y de esta forma se efectúa
con facilidad el recuento de estos.

Procedimiento:

(Dilución en tubo):

Diluir en 1 ml de ácido acético al 2% , 0,02 ml de sangre total.Mezclar bien ,llenar la cámara


de neubawer y se procede a realizar el conteo de leucocitos en los cuatro grandes
cuadrantes de los ángulos, que contienen 16 cuadrados, con un lente objetivo de 20 y un
ocular de 10.El recuento se comenzará por el último cuadrado de la hilera
superior,incluyendo la línea divisoria de la derecha y arriba.

Cálculos:

A) Cálculos para dilución en Pipeta de Thomas:

suma de los
Leucocitos/mm³ = leucos contados x 10 x 20
4
donde:
4) son los mm² contados y es el divisor,puede buscarse el promedio que hay en un mm².

10) es el factor para convertir la altura del cubreobjeto (0,1mm) en 1mm para informar los
resultados en mm³.

20) es la dilución de la sangre (Pipeta de Thomas).

Simplificado: 10 x 20 = 50
4

B) Cálculos para la dilución en tubo:

10 x 50 = 125
4

50) es la dilución en tubo. (0,02ml de sangre/1ml de ácido acético(2%).

Valores de referencia:

5 - 10 x 109 /l

CONTROL de CALIDAD
Introducción de muestras duplicadas a ciegas.(Repetibilidad)
Correlación intra e intersección(Repetibilidad)

Materiales Requeridos: Pipeta de Shalí


Pipeta de 1ml o Dispensador
Tubos de 12x75mm
Cámara de Neubauer
Tabuladora de células
Microscopio Óptico

Semiología:
Leucocitosis( conteo leucocitario superior a 10x 10 9 /l )
1-La leucocitosis es generalmente debida al aumento de un tipo específico de leucocito,
confiriéndole el nombre del tipo de célula blanca que muestra el principal incremento.
a) Leucocitosis neutrofílica o neutrofilia.
b)Leucocitosis linfocítica o linfocitosis.
c)Leucocitosis eosinofílica o eosinofilia.
d)Leucocitosis monocítica o monocitosis.
e)Leucocitosis basofílica o basofilia.
2-Un aumento en los leucocitos circulantes es raro que se produzca a consecuencia de un
aumento proporcional de los diferentes tipos de leucocitos. Cuando esto ocurre, es
generalmente debido a hemoconcentración
3-En ciertas enfermedades tales como (sarampión,rubéola,tos ferina y sepsis )el aumento de
los leucocitos es tan marcado que el cuadro sanguíneo obligará a descartar una leucemia La
leucocitosis de naturaleza transitoria debe ser diferenciada de una leucemia .En la leucemia
la leucocitosis es permanente y progresiva Anormalidades asociadas l con el conteo de
hematíes y plaquetas pueden hacer difícil la diferenciación entre infección severa y
leucemia. El examen de la médula ósea puede ser necesario .
4-La leucocitosis ocurre en infecciones agudas en las cuales el grado de aumento de las
cé:lulas blancas depende de :
a) La severidad de la infección
b) La resistencia del paciente
c) La edad del paciente
d) La reserva y eficiencia medular
5- Otras causas de leucocitosis incluye :
a) Hemorragia
b) Trauma o daño tisular postquirúrgico
c) Cáncer, especialmente del tractus gastroentestinal ,hígado ,hueso y metástasis
d) Toxinas, uremia, coma , eclampsia,
e) Drogas , especialmente el éter , chloroform , quinine , adrenalin , factores estimuladores
de colonia
f) Enfermedad del suero
g)Enfermedades circulatorias
h) Inflamación y necrosis de tejido
i)Leucemia (en la leucemia aguda se produce un aumento en el número de leucocitos
con una disminución en las células de aspecto normal
6- Ocasionalmente se detecta leucocitosis sin evidencias clínicas de enfermedad .
Tales hallazgos sugieren la presencia de uno de los estados siguientes :
a) Enfermedad oculta
b) Leucocitosis fisiológica debida a excitación ,ejercicio, dolor , frío , anestesia
7- La terapia esteroidea modifica la respuesta leucocitaria
a)Cuando se administra ACTH a personas sanas , se produce leucocitosis.
b)Cuando se administra ACTH a pacientes con infección severa , la ,infección puede
propalarse rápidamente sin producirse la esperada leucocitosis ;

8- Desórdenes hematológicos ;recuperación de la depresión medular , hemólisis ,


esplenectomía , desórdenes mieloproliferativos
9- Hábito de fumar

Leucopenia (disminución en el número de leucocitos por debajo de 4x 10 9/l )


.Ocurre durante y subsiguiente a:
1.Infecciones virales
2.Hiperesplenismo
3.Depresión de la médula ósea debida a:
Y. Drogas
Antimetabolitos
Barbitúricos
Bencina
Antibióticos
Antihistamínicos
Anticonvulsivos
Drogas antitirideas
Quimioterapia del cáncer (causa una disminución de los leucocitos; el recuento
leucocitario es utilizado
Drogas cardiovasculares
Diuréticos
Analgésicos y antinflamatorios
b)Metales pesados
c)Radiaciones

4.Desórdenes primarios de la médula ósea


a) Leucemia
b)Mieloma
c)Anemia aplástica
Z. d)Síndromes mielodisplásticos

5- Enfermedades que ocupan médula: infecciones por hongos , tumores metastásicos


4) Conteo Diferencial de Leucocitos.

Fundamento:
Los leucocitos circulantes se diferencian en cinco tipos celulares , cada uno de los cuales
desempeña una función específica .
Célula Función
Neutrófilos Infecciones piógenas
Eosinófilos Desórdenes alérgicos e infestaciones parasitarias
Basófilos Infecciones parasitarias
Linfocitos Infecciones virales (sarampión rubeóla
Mononucleosis infecciosa )
Monocitos Infecciones severas, por fagocitosis

Técni ca:

Realizar frotis sanguíneo.Secar rápido para mantener la forma de los hematíes.


Fijar el extendido,con el objetivo de conservar el protoplasma celular con el menor grado de
alteración en comparación con la célula viva (puede realizarse con metanol,mezcla de
alcohol metílico-acetona a partes iguales,etanol absoluto,etc).
Proceder finalmente a la coloración con Giemsa.

1 gota de Giemsa/ml de sangre ~ 30 mints


2 gota de Giemsa/ml de sangre ~ 20 mints

Lavar con agua corriente,secar,quedan listos para ser examinados.


Consiste en contar 100 células por lo menos,procediendo a su clasificación para determinar
el porcentaje de cada variedad en la sangre periférica.

Valores de referencia:

Stabs............. 0.00 – 0.03


Neutrófilos.... 0.55 – 0.65
Eosinófilos.... 0.01 – 0.05
Basófilos....... 0.00 – 0.01
Linfocitos...... 0.25 – 0.40
Monocitos..... 0.03 - 0.08

Semiología

Neutrofilia: viene definida por una cifra de neutrófilos superior a 7.5 x10 9/L.
Infecciones bacterianas y fúngicas
Invasión de la médula por células metastásicas
Procesos inflamatorios como vasculitis y colagenosis
Grandes quemados
Necrosis tisular
Hemorragia cerebral
Post esplenectomía
Algunas intoxicaciones
Eclampsia, gota, acidosis metabólicacias de estrés, la ovulación,
Reambio plasmático
Feocromocitoma
Neoplasias en general
Después de hemorragia o hemólisis
Diversas circunstan

Linfocitosis:se define por una cifra superior de 4.0x 10 9/L linfocitos.

5) Determinación de la Velocidad de Sedimentación de los Hematíes. (VSG)

Fundamento:
La Velocidad de Sedimentación Globular (VSG) mide la velocidad de sedimentación de los
eritrocitos en su plasma original anticoagulado. La sedimentación tiene lugar en tres etapas,:
1. Formación Roleaux (apilamiento de hematíes).
2. Descenso del apilamiento a velocidad constante.
3. Sedimentación lenta cuando las células empiezan a empaquetarse.
Se ha demostrado que el factor o factores determinantes de las VSG se encuentran en el
plasma y no en los eritrocitos, fracciones globulínicas del plasma especialmente el
fibrinógeno y otras proteinas de alto peso molecular. Estos factores provocan el apilamiento
de los glóbulos rojos y su posterior sedimentación, al aumentar de tamaño estos agregados y
por ende su peso. También influyen en las VSG la concentración, tamaño y la forma de los
glóbulos rojos. A mayor tamaño, mayor VSG.
La sangre mezclada con el anticoagulante en una proporción definida, es introducida en una
pipeta especial la cual es colocada en forma completamente vertical y se mide la altura del
plasma claro por encima de la columna de hematíes. La altura es indicativa de la velocidad
de descenso de los hematíes y se expresa como milímetros en la primera hora.
Procedimiento:
1. Extraer sangre venosa y mezclar 2 ml de esta con 0.5 ml de citrato de sodio al 3.8%
en un tubo graduado.
2. Mezclar bien la sangre con el anticoagulante, y llenar la pipeta de Westergreen hasta
la marca 0 mm. Colocar completamente vertical en el soporte apropiado.
3. Transcurrido exactamente una hora se observa el lugar donde comienza de forma
nítida la columna de eritrocito y se cuentan los mm que hay desde la marca 0 hasta
ella.
Valores de Referencia:
Mujeres: 5-20 mm/h
Hombres: 3-10 mm/h

Semiología:

Fisiológicamente la VSG está elevada en la menstruación, embarazo, puerperio, y en el 10%


de niños aparentementes normales.
La prueba no es específica pero es sensible a la inflamación, daño tisular y desórdenes
linfoproliferativos.
La VSG está aumentada en las siguientes condiciones:
1. Infecciones, por ejemplo tuberculosis, enfermedad inflamatoria pélvica, lupus
eritematoso sistémico y artritis reumatoidea y piógena, debido al aumento de
inmunoglobulinas y reaccionantes de fase aguda.
2. Aumento relativo de globulinas: condiciones que conducen a la pérdida de albúmina y
que dan un aumento relativo de globulinas, por ejemplo, enfermedades del riñón,
enfermedad crónica del hígado y enteritis.
3. Aumento absoluto de globulinas, por ejemplo, mieloma múltiple, crioglobulinemia,
macroglobulinemia y linfomas.
4. Necrosis tisular extensiva (tumores maligno e IMA).
5. Envenenamiento por plomo (anemia), cirrosis (albúmina descendida,
hiperglobulinemia policlonal. Una hipofibrinogenemia grave puede neutralizar una
VSG acelerada.
6. Anemia hemolítica positiva de Coombs.
7. Causas no explicadas. En raras ocasiones, especialmente en pacientes ancianos.

La VSG es normal ó casi normal en las siguientes condiciones:


1. Desórdenes hematológicos, por ejemplo mononucleosis infecciosa.
2. Infección localizada.
3. Neoplasmas benigno.
La VSG está disminuida en las siguientes condiciones:
1. Policitemia Vera. (puede ser incluso 0).
2. Anemia de células falciformes.
3. Algunas formas de macroglobulinemia, por ejemplo síndrome de hiperviscosidad

Conteo de reticulocitos
Principio:
Se incuban volúmenes iguales de sangre y colorante, y se hacen frotis de la mezcla.

Reactivos:
Azul brillante de cresilo(acuoso).
Técnica:
Mezclar una gota de sangre fresca capilar o venosa anticoagulada con iguales cantidades de
colorante (azul brillante de cresilo)en un tubo de 12x75.
Incube a 37 durante 20 min.
Realizar frotis en una lámina portaobjeto y una vez seca, llevar acabo el conteo de
reticulocitos.
Contar 1000 glóbulos rojos en campos consecutivos de inmersión de aceite, y registrar el
número de células que contienen material azul oscuro en gránulos o hebras. La numeración
de reticulocitos en 1000 eritrocitos es suficiente para recuentos altos de reticulocitos, pero
para recuentos bajos deben examinarse 2000 células o más.
Cálculos:
Reticulocitos (%)= Reticulocitos en 1000 GR
10
GR: Glóbulos rojos.
Nota: El factor 0.01 convierte los reticulocitos(%) en el SI.
Valores de referencia: Adultos:5-15 x 10-3
Al nacimiento 25- 65 x10-3
Nota: Una forma más práctica de realizar el conteo resulta de cuantificar los reticulocitos
presentes en 10 campos que posean aproximadamente 100 hematíes cada uno e informarlos
directamente . En caso de valores bajos deberán contarse los reticulocitos presentes en 20
campos dividiendo el resultado entre dos antes de informarlo.

Recuento de reticulocitos corregidos


Principio:
En circunstancias fisiológicas 1% de los reticulocitos son liberados diariamente en la san

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