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5) Eritrosedimentación.
(1) Hemoglobina .
Método: Cianometahemoglobina .
Fundamento: Se diluye la sangre en una solución de ferrocianuro potásico y cianuro
potásico. El ferrocianuro potásico oxida las hemoglobinas a hemoglobina (Hi ;
metahemoglobina ) , y el cianuro potásico proporciona los iones cianuro (CN ) para formar
hemoglobincianuro (HiCN ,cianometahemoglobina ),que tiene una absorción máxima a una
longitud de onda de 540nm .El resultado de la muestra se obtiene por comparación con una
solución de HiCN estándar.
Composición de Reactivos:
Estabilidad:
Muestra:
De 3 a 5 ml de sangre total para 1 gota (50 l) de EDTA 10% , (1 mg/ml de sangre).
Mezclar.
Técnica:
Cálculo:
CM = DOM x CP
DOP
Si se utiliza un espectrofotómetro a 546 nm se multiplicará la DO de la muestra por 36,8
( coeficiente de extinción molar).
Si se utiliza curva de calibración, buscar directamente en ella de acuerdo con el % de T ó la
DO.
Control de calidad:
Materiales requeridos:
D. Pipeta de Sahli.
E. Pipeta de 5 ml o dispensador.
F. Tubos de 13 x 100 mm.
G. Equipo de lectura (fotómetro).
Semiología:
A) Aumento:
H. Hemoconcentración. ( Policitemia, quemaduras graves )
I. Enfermedad pulmonar obstructiva cónica.
J. Fallo cardíaco congestivo.
B) Disminución:
K. Anemias.
L. Hipertiroidismo.
M. Cirrosis hepática.
N. Hemorragia severa.
O. Reacciones hemolíticas debidas a:
P. Transfusiones sanguíneas incompatibles.
Q. Reacciones a sustancias químicas y drogas.
R. Reacciones a agentes infecciosos.
S. Reacciones a agentes físicos ( quemaduras severas y válvulas cardíacas
artificiales).
T. Varias enfermedades sistémicas.
a. Enfermedad de Hodkin.
b. Leucemia.
c. Linfoma.
d. Lupus eritematoso sistémico.
e. Carcinomatosis.
f. Sarcoidosis.
g. Necrosis renal cortical.
C) Variación en los niveles de hemoglobina:
Bibliografía
El hematocrito venoso mide e tanto por ciento del volumen total de una muestra de sangre
venosa ocupado por los hematíes o, dicho de otro modo ,es la relación entre el volumen de
eritrocitos y el de sangre total. Se expresa como fracción de la unidad.
El hematocrito se puede determinar mediante procedimientos manuales tales como : el
macrométodo de Wintrobe y por micrométodo.
Macrométodo
Método : Wintrobe .
Fundamento:
Muestra:
De 3 a 5 ml de sangre total para 1 gota (50 l) de EDTA 10% , (1 mg/ml de sangre).
Mezclar.
Técnica:
Homogeneizar muestra.
Con una jeringuilla que posea una aguja de longitud similar al tubo de diámetro interno
uniforme llenar los tubos hasta la marca de 10 de la derecha si estos están graduados .
Centrifugar a 3500 r.p.m. durante 30 min.
Realizar la lectura en la escala de la derecha del tubo graduado de la columna de
eritrocitos aglomerados. Informar el % del volumen globular según el SI o como fracción
de la unidad.
Factor de Conversión:
Valores de referencia:
Edad (años) Hto (l/l )
0.6 a 4 0.33
5a9 0.34
10 a 14 0.36
Adultos varones 0.40
Adultos mujeres 0.38
Mujeres gestantes 0.33
Micrométodo:
Método :
Fundamento:
La sangre se centrifuga en tubos capilares con una fuerza centrífuga relativa de 14 490 g
durante 4 min.
U. Mezcle y llene el capilar con sangre total procedente del tubo, del pulpejo del dedo o
del talón del pie en caso de que el capilar contenga anticoagulante.
V. Selle el capilar por uno de los extremos con plastilina o calor, en este último caso
aleje la llama de la muestra de sangre presente en el interior del capilar para evitar
hemólisis.
W. Centrifugar de 3 a 5 mints según especifique el fabricante para el uso de la
microcentrífuga.
X. Leer el volumen globular en un lector de microhematocritos.
Factor de Conversión:
Valores de referencia:
(3) Recuento Global de Leucocitos.
Fundamento:
Al extraer la sangre venosa con un anticoagulante y ser diluida con un ácido débil,los
hematies se destruyen quedando exclusivamente los leucocitos y de esta forma se efectúa
con facilidad el recuento de estos.
Procedimiento:
(Dilución en tubo):
Cálculos:
suma de los
Leucocitos/mm³ = leucos contados x 10 x 20
4
donde:
4) son los mm² contados y es el divisor,puede buscarse el promedio que hay en un mm².
10) es el factor para convertir la altura del cubreobjeto (0,1mm) en 1mm para informar los
resultados en mm³.
Simplificado: 10 x 20 = 50
4
10 x 50 = 125
4
Valores de referencia:
5 - 10 x 109 /l
CONTROL de CALIDAD
Introducción de muestras duplicadas a ciegas.(Repetibilidad)
Correlación intra e intersección(Repetibilidad)
Semiología:
Leucocitosis( conteo leucocitario superior a 10x 10 9 /l )
1-La leucocitosis es generalmente debida al aumento de un tipo específico de leucocito,
confiriéndole el nombre del tipo de célula blanca que muestra el principal incremento.
a) Leucocitosis neutrofílica o neutrofilia.
b)Leucocitosis linfocítica o linfocitosis.
c)Leucocitosis eosinofílica o eosinofilia.
d)Leucocitosis monocítica o monocitosis.
e)Leucocitosis basofílica o basofilia.
2-Un aumento en los leucocitos circulantes es raro que se produzca a consecuencia de un
aumento proporcional de los diferentes tipos de leucocitos. Cuando esto ocurre, es
generalmente debido a hemoconcentración
3-En ciertas enfermedades tales como (sarampión,rubéola,tos ferina y sepsis )el aumento de
los leucocitos es tan marcado que el cuadro sanguíneo obligará a descartar una leucemia La
leucocitosis de naturaleza transitoria debe ser diferenciada de una leucemia .En la leucemia
la leucocitosis es permanente y progresiva Anormalidades asociadas l con el conteo de
hematíes y plaquetas pueden hacer difícil la diferenciación entre infección severa y
leucemia. El examen de la médula ósea puede ser necesario .
4-La leucocitosis ocurre en infecciones agudas en las cuales el grado de aumento de las
cé:lulas blancas depende de :
a) La severidad de la infección
b) La resistencia del paciente
c) La edad del paciente
d) La reserva y eficiencia medular
5- Otras causas de leucocitosis incluye :
a) Hemorragia
b) Trauma o daño tisular postquirúrgico
c) Cáncer, especialmente del tractus gastroentestinal ,hígado ,hueso y metástasis
d) Toxinas, uremia, coma , eclampsia,
e) Drogas , especialmente el éter , chloroform , quinine , adrenalin , factores estimuladores
de colonia
f) Enfermedad del suero
g)Enfermedades circulatorias
h) Inflamación y necrosis de tejido
i)Leucemia (en la leucemia aguda se produce un aumento en el número de leucocitos
con una disminución en las células de aspecto normal
6- Ocasionalmente se detecta leucocitosis sin evidencias clínicas de enfermedad .
Tales hallazgos sugieren la presencia de uno de los estados siguientes :
a) Enfermedad oculta
b) Leucocitosis fisiológica debida a excitación ,ejercicio, dolor , frío , anestesia
7- La terapia esteroidea modifica la respuesta leucocitaria
a)Cuando se administra ACTH a personas sanas , se produce leucocitosis.
b)Cuando se administra ACTH a pacientes con infección severa , la ,infección puede
propalarse rápidamente sin producirse la esperada leucocitosis ;
Fundamento:
Los leucocitos circulantes se diferencian en cinco tipos celulares , cada uno de los cuales
desempeña una función específica .
Célula Función
Neutrófilos Infecciones piógenas
Eosinófilos Desórdenes alérgicos e infestaciones parasitarias
Basófilos Infecciones parasitarias
Linfocitos Infecciones virales (sarampión rubeóla
Mononucleosis infecciosa )
Monocitos Infecciones severas, por fagocitosis
Técni ca:
Valores de referencia:
Semiología
Neutrofilia: viene definida por una cifra de neutrófilos superior a 7.5 x10 9/L.
Infecciones bacterianas y fúngicas
Invasión de la médula por células metastásicas
Procesos inflamatorios como vasculitis y colagenosis
Grandes quemados
Necrosis tisular
Hemorragia cerebral
Post esplenectomía
Algunas intoxicaciones
Eclampsia, gota, acidosis metabólicacias de estrés, la ovulación,
Reambio plasmático
Feocromocitoma
Neoplasias en general
Después de hemorragia o hemólisis
Diversas circunstan
Fundamento:
La Velocidad de Sedimentación Globular (VSG) mide la velocidad de sedimentación de los
eritrocitos en su plasma original anticoagulado. La sedimentación tiene lugar en tres etapas,:
1. Formación Roleaux (apilamiento de hematíes).
2. Descenso del apilamiento a velocidad constante.
3. Sedimentación lenta cuando las células empiezan a empaquetarse.
Se ha demostrado que el factor o factores determinantes de las VSG se encuentran en el
plasma y no en los eritrocitos, fracciones globulínicas del plasma especialmente el
fibrinógeno y otras proteinas de alto peso molecular. Estos factores provocan el apilamiento
de los glóbulos rojos y su posterior sedimentación, al aumentar de tamaño estos agregados y
por ende su peso. También influyen en las VSG la concentración, tamaño y la forma de los
glóbulos rojos. A mayor tamaño, mayor VSG.
La sangre mezclada con el anticoagulante en una proporción definida, es introducida en una
pipeta especial la cual es colocada en forma completamente vertical y se mide la altura del
plasma claro por encima de la columna de hematíes. La altura es indicativa de la velocidad
de descenso de los hematíes y se expresa como milímetros en la primera hora.
Procedimiento:
1. Extraer sangre venosa y mezclar 2 ml de esta con 0.5 ml de citrato de sodio al 3.8%
en un tubo graduado.
2. Mezclar bien la sangre con el anticoagulante, y llenar la pipeta de Westergreen hasta
la marca 0 mm. Colocar completamente vertical en el soporte apropiado.
3. Transcurrido exactamente una hora se observa el lugar donde comienza de forma
nítida la columna de eritrocito y se cuentan los mm que hay desde la marca 0 hasta
ella.
Valores de Referencia:
Mujeres: 5-20 mm/h
Hombres: 3-10 mm/h
Semiología:
Conteo de reticulocitos
Principio:
Se incuban volúmenes iguales de sangre y colorante, y se hacen frotis de la mezcla.
Reactivos:
Azul brillante de cresilo(acuoso).
Técnica:
Mezclar una gota de sangre fresca capilar o venosa anticoagulada con iguales cantidades de
colorante (azul brillante de cresilo)en un tubo de 12x75.
Incube a 37 durante 20 min.
Realizar frotis en una lámina portaobjeto y una vez seca, llevar acabo el conteo de
reticulocitos.
Contar 1000 glóbulos rojos en campos consecutivos de inmersión de aceite, y registrar el
número de células que contienen material azul oscuro en gránulos o hebras. La numeración
de reticulocitos en 1000 eritrocitos es suficiente para recuentos altos de reticulocitos, pero
para recuentos bajos deben examinarse 2000 células o más.
Cálculos:
Reticulocitos (%)= Reticulocitos en 1000 GR
10
GR: Glóbulos rojos.
Nota: El factor 0.01 convierte los reticulocitos(%) en el SI.
Valores de referencia: Adultos:5-15 x 10-3
Al nacimiento 25- 65 x10-3
Nota: Una forma más práctica de realizar el conteo resulta de cuantificar los reticulocitos
presentes en 10 campos que posean aproximadamente 100 hematíes cada uno e informarlos
directamente . En caso de valores bajos deberán contarse los reticulocitos presentes en 20
campos dividiendo el resultado entre dos antes de informarlo.