UNIVERSIDAD NACIONAL DEL

SANTA
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOTECNOLOGÍA

BIOTECNOLOGIA AGRICOLA
“CULTIVO IN VITRO DE PLANTAS”

PRESENTADO POR

PAREDES NARVAEZ, Helman

Chimbote – Perú
2018

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 CULTIVO IN VITRO DE PLANTAS

(Práctica 3)

I. INTRODUCCION

Cultivo de Tejidos Vegetales: se define como el cultivo in vitro en condiciones asépticas

de células, tejido u órganos vegetales. Esta metodología tiene un gran potencial para
estudios básicos y aplicados a la micropropagación de especies económicamente
importantes y sirve como un modelo para estudios morfológicos, fisiológicos, bioquímicos
y genéticos.

Esta técnica tiene diversas aplicaciones en agricultura, citando entre las más destacadas:
la erradicación de patógenos sistémicos, la propagación clonal masiva y rápida y el
mejoramiento genético. Esto significa que podemos obtener actualmente una planta sana
a partir de otra infectada, propagar con facilidad y rapidez aquellas especies vegetales de
multiplicación lenta y difícil y lo que es más importante en tubas de ensayo se pueden
obtener y seleccionar plantas con mayores y mejores rendimientos, resistencia a
enfermedades y tolerancia a condiciones estresantes externas como heladas, sequia,
salinidad, etc.

II. OBJETIVOS

 Preparar medio de cultivo Murashige y Skoog (MS)

 Introducir semillas
 Evaluar el crecimiento del explante in vitro

III. MATERIAL DE PRÁCTICA

Material biológico: Semillas de alfalfa.

Material de laboratorio:
01 litro de alcohol comercial
01 paquete de papel de aluminio
01 paquete de algodón (100 g)
01 pinza de punta fina
10 frascos de vidrio
01kg de agar-agar
01liego de papel de filtro
01 caja de fósforos
02 placas petri
01 litro de ron comercial
01 bolsa de detergente (250 gr)
01 botella de lejía (250 ml)
01 bisturí con navaja
01 plumón marcador
01 mechero de vidrio
01 mascarilla
250 ml de agua estéril
100 g de azúcar blanca

IV. PROCEDIMIENTO

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A. Preparación de medios de cultivo (MS)
 Preparar medio basal MS, según indicaciones del profesor.
 Incluir la sacarosa, el agar y medir el pH.
 Repartir MS en recipientes de vidrio
 Cubrir recipiente de vidrio con papel de aluminio
 Autoclavar en autoclave por treinta minutos
 Dejar enfriar para luego introducir explantes.

B. Preparación e introducción de explante

 Seleccionar el explante a trabajar (semillas).
 Lavar varias veces (3) con agua corriente.
 Cortar en segmentos de tres centímetros, depositar en recipiente de vidrio
y lavar con detergente al 10% durante 30 minutos y con agitación
permanente. Lavar con agua corriente hasta que desaparezca detergente.
 Limpiar su mesa de trabajo con lejía (2,5%) utilizando algodón.
 Prender sus mecheros que contienen ron.
 Desinfección de los explantes: Colocarlos en alcohol (70%) por treinta
segundos, luego lavar con agua estéril.
 Dejar en lejía (2.5%) por dos minutos. Agitación constante. Lavar con agua
estéril por tres veces.
 Los explantes desinfestados colocarlos en placa petri estéril en cuyo
interior hay papel de filtro estéril.
 Desinfestar pinza y bisturí (quemar en llama del mechero) y cortar en
segmentos de un centímetro
 Introducir en recipiente de vidrio con medio nutritivo.
 Colocarlos en sala de incubación con fuente luminosa (fluorescentes)
 Observar a los cinco días.

V. CUESTIONARIO
 ¿Cuáles son las áreas de un Laboratorio de Cultivo de Tejidos
Vegetales?
Dentro de las áreas tenemos: Área de preparación de medios de cultivo,
area de lavado de esterilización, Área de transferencia, Área de
incubación, Área de crecimiento in vivo, Area de cuarentena y de control
fitosanitario.

 ¿Cuál es el material de vidrio que se utiliza con frecuencia?

Matraces y los pequeños frascos de vidrios llamados viales.

 Cuáles son los equipos/aparatos indispensables en un laboratorio de

cultivo de tejidos?
Autoclave,
Medidores de PH
Balanzas analíticas
Hornos para secado

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  ¿Qué desinfectantes se utilizan para introducir explantes libres de
patógenos?
Se utilizan mayormente hipoclorito de sodio, etanol al 75% y benomilo

 En el medio MS, cuales son los macronutrientes?

Nitrógeno, el carbono, el oxígeno, el fosforo y el hidrógeno
 ¿Cuál es el rango de pH que debe tener un medio de cultivo?
Debe ser de 5.5 a 6.5 de Ph

 ¿Porque se agrega sacarosa al medio de cultivo?

Por qué el explante no hace la fotosíntesis eficientemente por lo tanto es
necesario darle una fuente de carbono fácilmente asimilable
 ¿Cuáles es la finalidad de suplementar el medio de cultivo con
reguladores del crecimiento?

Crear una planta con una vía dirigida

VI. RESULTADOS
A los cinco días anotar sus resultados.

Tabla 1. Evaluación de germinación de semillas in vitro a los 07 días de edad

Variables Contaminado Necrosado Medio Semillas Tall

Explante s s fenolizad germinada o
o s Raíz
1 1 0 1 3 3
2 0 0 0 5 5
3 2 0 0 3 3
4 0 0 0 5 5
5 0 0 0 5 5
6 0 0 0 5 5
7 0 0 0 5 5
8 0 0 0 5 5
9 0 0 1 4 4
10 0 0 0 5 5
Promedi 3 0 2 45 45
o

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 Semilla de alfalfa Semilla de alfalfa en Semilla de alfalfa
contaminada crecimiento fenolizado

Se observa el hongo Cultivo finalizado por mal

invasivo a los 7 días de tratamiento del explante, estuvo
empezado el fotoperiodo. dañado y las enzimas se
combinaron y no dejaron crecer al
explante

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 Semillas germinadas donde se observa los tallos y algunas raíces:

VII. CONCLUSIONES
 Se preparó 100 ml de medio MS para poder sembrar semillas de alfalfa y observar
su crecimiento por 7 días y así poder evaluarlas.
 Se esterilizaron 50 semillas de alfalfa y se fueron introduciendo 2 por cada vial a
evaluar sin embargo se observó cada semilla individual y no por vial.
 Evaluamos el crecimiento del explante para siete días y comprobamos que el
método de esterilización fue muy efectivo por observarse una contaminación
mínima en los explantes.

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