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PROCEDIMIENTOS DIAGNÓSTICOS  Recuento celular  • 1

TEMA 27: Recuento celular: fundamento, técnica y aplicaciones

Esquema:

1. Concepto
2. Recuentos en cámara
2.1. Material necesario
2.2. Reactivos
2.3. Muestra
2.4. Limpieza del material
3. Recuentos en contadores electrónicos
3.1. Componentes de que consta un contador electrónico
3.2. Métodos electrónicos de recuento celular
3.2.1. Método de la resistencia eléctrica o de la impedancia
3.2.2. Métodos de la dispersión de la luz o de la difracción
3.3. Parámetros que determina un contador electrónico
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4. Técnicas de recuento manuales


4.1 Recuento de hematíes
4.2 Recuento de reticulocitos
4.3 Recuento de leucocitos
5. Conclusiones
6. Bibliografía

1. CONCEPTO
Los recuentos celulares son una serie de procedimientos que tienen por
objeto determinar el número de cada uno de los tipos celulares que
están comprendidos en una unidad de volumen de sangre
(generalmente, en 1 mm3).
Todos los recuentos celulares constan de 3 fases:
1ª Dilución de la sangre.
2ª Cómputo del número de células.
3ª Cálculo matemático del número de células presentes en 1 mm3 de
sangre.
Los recuentos celulares pueden realizarse mediante métodos manuales
(recuentos en cámara) o automáticos (recuentos en contadores
electrónicos).
REV.: 10/09

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2. RECUENTOS EN CÁMARA

2.1. Material necesario


Cámara de recuento
También se llama cámara cuentaglóbulos o hemocitómetro.
Consiste en una placa gruesa de cristal con forma de porta, cuya
porción central está dividida en 3 bandas perpendiculares al eje
longitudinal de la cámara. De ellas, las dos laterales se hallan
sobreelevadas 0,1 mm con respecto a la central, y en esta última hay
grabado un retículo cuadrangular.
La banda central puede estar, a su vez, subdividida en 2 semibandas
idénticas y separadas por un surco paralelo al eje longitudinal de la banda.
En cada una de estas dos semibandas hay grabado un retículo idéntico
(véase figura 1).

Figura 1. Cámaras de recuento. A = Visión superior (cámara con un


retículo).
B = Visión superior (cámara con dos retículos). C = Visión lateral.
Hay varios tipos de retículos, de los cuales los más utilizados son el de
Bürker, el de Thoma, y sobre todo el de Neubauer (véase figura 2).

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Figura 2. Cuadrados de los distintos tipos de retículos de recuento.


A = Cuadrado grande. B = Cuadrado mediano. C = Cuadrado pequeño.
Cubreobjetos
Preferiblemente, debe ser algo más grueso que los normalmente
utilizados.
Se coloca de forma que apoye sobre las dos bandas laterales de la
porción central de la cámara. De esta manera queda delimitado un
espacio entre la banda central y el cubre, en el que se deposita la
muestra y cuyo espesor es de 0,1 mm.
Algunas cámaras también constan de dos pinzas especiales que parten,
cada una, de una de las porciones laterales de la cámara y que tienen
por misión la de asegurar la fijación del cubre a la misma.
Cuando está bien montado sobre la cámara, se observan unas
irisaciones de colores entre las dos láminas de vidrio llamadas anillos de
Newton.
Pipetas diluidoras de Thoma
Son unas pipetas especiales de cristal que constan de un largo tubo
capilar graduado y de una dilatación ampular o bulbo.
El tubo capilar termina en punta, a nivel de uno de sus extremos, y se
continúa con el bulbo, a nivel del otro de sus extremos. Además, está
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dividido en 10 partes iguales, y en su superficie están especialmente


bien marcadas la 5ª división (con un 0,5) y la 10ª (con un 1).
El bulbo contiene una perla de vidrio para facilitar la mezcla de la sangre
con el líquido de dilución, y acaba en un tubo capilar corto. La perla de
vidrio es roja en las pipetas empleadas para el recuento de hematíes, y
blanca en las usadas para el recuento de leucocitos. Además, en las
pipetas para hematíes la capacidad del bulbo es 100 veces superior a la
del tubo capilar largo, por lo que en el tubo capilar corto hay una marca
de 101, y en las pipetas para leucocitos la capacidad del bulbo es 10
veces mayor que la del tubo capilar largo, por lo que en el tubo capilar
corto hay una marca de 11.
Goma de aspiración
Es un tubo de goma que permite la aspiración de la muestra y del líquido
de dilución.
En uno de sus extremos tiene encajada una boquilla, y por el otro se
ensambla al tubo capilar corto de cualquiera de las pipetas de Thoma
(véase figura 3).

Figura 3. Pipetas diluidoras: A = pipeta para recuento de glóbulos rojos.


B = pipeta para recuento de glóbulos blancos.
2.2. Reactivos
Líquido de dilución
Hay varias clases.
Su composición varía según el tipo de células que se pretende contar.
Los que se utilizan para el recuento de hematíes contienen cloruro
sódico para hacerlos isotónicos con respecto al plasma y evitar, de esta
forma, la hemólisis. Pero algunos incorporan también anticoagulantes
como el citrato de sodio, e incluso antisépticos como la formalina.
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Los que se emplean para el recuento de leucocitos contienen una


sustancia, como el ácido acético glacial, que rompe los hematíes y un
colorante, como el violeta de genciana, que tiñe el núcleo de los
leucocitos.
Los que se usan para el recuento de plaquetas pueden incorporar una
sustancia hemolítica y un antiagregante plaquetario.
Los líquidos diluyentes más utilizados son el de Hayem, para el recuento
de hematíes, y el de Türck, para el recuento de leucocitos.
2.3. Muestra
Sangre capilar o venosa anticoagulada con EDTA. Esta sangre se
utilizará convenientemente diluida.
2.4. Limpieza del material
Limpieza de la cámara de recuento
Tras su uso, ha de ser aclarada con agua tibia y posteriormente debe
secarse con un paño suave y limpio o dejándola al aire.
Limpieza de las pipetas diluidoras
Después de su empleo, tienen que lavarse interiormente de la siguiente
forma:
• Primero, haciendo pasar a través de ellas agua corriente, una vez.
• Luego, haciendo pasar a través de ellas agua destilada, 3 veces.
• Y, finalmente, haciendo pasar a través de ellas acetona o alcohol de 95º,
una vez.
Tras ello, ha de secarse su interior, preferentemente mediante un
secador de aire o en estufa.

3. RECUENTOS EN CONTADORES ELECTRÓNICOS


3.1. Componentes de que consta un contador electrónico
Diluidor
Disminuye la concentración de la sangre hasta el nivel adecuado para el
funcionamiento del contador (generalmente diluye a 1/500 para el
recuento de leucocitos, y a 1/50.000 para el de hematíes). Como líquido
diluyente utiliza una solución isotónica con capacidad conductora.

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Compresor-aspirador
Aporta la presión y el vacío necesarios para transportar la sangre,
convenientemente diluida, al dispositivo de medida.
Dispositivo de medida
Es la cámara donde se cuentan realmente las células sanguíneas.
Su diseño depende del método de recuento utilizado por cada modelo
de contador.
Transductor
Transforma las señales, procedentes del dispositivo de medida, en
impulsos eléctricos.
Suele ser un fotomultiplicador.
Discriminador
Diferencia los impulsos eléctricos generados por cada uno de los tipos
de células sanguíneas.
Lector
Recoge los datos obtenidos, los procesa y los proyecta en una pantalla.
Registrador
Imprime en papel los resultados conseguidos.
3.2. Métodos electrónicos de recuento celular
3.2.1. Método de la resistencia o de la impedancia
Es el utilizado por los primeros contadores, ya que fue descubierto por
Coulter en 1956.
Se basa en lo siguiente:
• Mientras que las células sanguíneas conducen mal la electricidad, el
líquido diluyente es un buen conductor de la electricidad (posee una
gran conductividad eléctrica).
• El dispositivo de medida consiste en un pequeño orificio, a través del
cual se hace pasar la sangre diluida. Tiene colocados un electrodo a su
entrada y otro a su salida.
• También se hace pasar una corriente eléctrica constante a través de
ese mismo orificio.

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• Si el orificio es atravesado solamente por líquido diluyente, la


resistencia eléctrica medida por los electrodos es mínima y constante,
pero cuando el orificio es atravesado por una célula sanguínea, se
produce un aumento de la resistencia eléctrica y un cambio de potencial
entre los electrodos.

• El número de señales eléctricas generadas indica el número de células


presentes en la sangre y la amplitud de estas señales es directamente
proporcional al volumen celular (véase figura 4).

Figura 4. Esquema de dispositivo de medida basado en la medida de la


impedancia.

3.2.2. Métodos de la dispersión de la luz o de la difracción


Método del campo oscuro
El dispositivo de medida consiste en un capilar por el que circula la
sangre diluida y que es atravesado por un haz de luz halógena.
Cuando no pasan células a lo largo del capilar, el haz de luz incide sobre
una zona no sensible (disco de campo oscuro); pero si una célula pasa a
través del capilar, dispersa los rayos del haz luminoso hacia afuera del
disco, donde son captados por un fotodetector.
El número de señales lumínicas detectado indica el número de células
presentes en la sangre, y la intensidad de la dispersión lumínica
producida por cada una de ellas es directamente proporcional al tamaño
de éstas (véase figura 5).

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Figura 5. Esquema del dispositivo de medida basado en el método del


campo oscuro.
Método del rayo láser
El dispositivo de medida consta de un detector situado detrás de un
capilar por el que circula un flujo continuo de sangre diluida; es pues un
citómetro de flujo. Un rayo láser atraviesa el capilar y se dirige hacia el
detector.
Cuando no pasan células a lo largo del capilar, el rayo láser incide sobre
el detector, pero si una célula pasa a través del capilar, el rayo láser es
interceptado por ella y deja de incidir sobre el detector.
El número de interferencias indica el número de células presentes en la
sangre, y el grado de interferencia que produce cada célula a su paso es
directamente proporcional a su tamaño.
En este método se basan, por ejemplo, los autoanalizadores Technicon
de la serie H (véase figura 6).

Figura 6. Esquema del dispositivo de medida basado en el método del


rayo láser.
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3.3. Parámetros que determina un contador electrónico


Los contadores electrónicos pueden llegar a determinar los siguientes
parámetros:
• Número de hematíes por mm3 de sangre.
• Número de leucocitos por mm3 de sangre.
• Número de plaquetas por mm3 de sangre.
• Valor hematocrito.
• Concentración de Hb en la sangre.
• Índices hematimétricos.
• Fórmula leucocitaria.

Para el recuento de leucocitos es necesaria una lisis previa de los


hematíes mediante sustancias tensioactivas (detergentes).
Para el recuento de plaquetas es necesaria la separación de los
hematíes, por ejemplo, mediante centrifugación.
La concentración de la Hb se mide colorimétricamente con el método de
la cianmetahemoglobina.
Los índices hematimétricos pueden ser calculados electrónicamente.
Los autoanalizadores Technicon de la serie H determinan la fórmula
leucocitaria mediante el estudio de los leucocitos bajo dos aspectos:
• El aspecto morfológico de su núcleo, mediante su análisis con
técnicas de difracción luminosa, es decir, por la desviación o
descomposicón del rayo luminoso al incidir sobre él.
• Su actividad biológica, mediante la cuantificación del contenido en
peroxidasa de su citoplasma (véase figura 7).

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Figura 7. Esquema de un automatizador hematológico.

4. TÉCNICAS DE RECUENTO MANUALES


4.1 Recuento de Hematíes
El recuento de hematíes o RBC (Red Blood Count) consiste en la
determinación del número de eritrocitos presentes en un volumen
determinado de sangre (generalmente, en 1 mm3 o µl).
Para el recuento de glóbulos rojos en cámara, se diluye la sangre
problema en un líquido apropiado y con la pipeta de Thoma para
hematíes. Posteriormente se deposita en la cámara de recuento, donde
se cuentan las células presentes en algunos cuadrados de uno de los
retículos.
Reactivos
• Líquido de dilución. Éste debe ser isotónico con el plasma, para evitar
la alteración morfológica e incluso la lisis de los hematíes.
El más utilizado es el de Hayem, que se compone de las siguientes
sustancias:
- 2,5 g de sulfato sódico.
- 0,5 g de cloruro sódico.
- 0,25 g de cloruro mercúrico.

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- 100 ml de agua destilada.


Si contiene precipitados, antes de usarlo debe ser filtrado.
Muestra
• Sangre capilar obtenida por punción del pulpejo de un dedo o sangre
venosa procedente de una punción venosa y anticoagulada con EDTA.
Técnica
1º. Situar un cubre sobre el retículo de la cámara. Para facilitar su
adhesión a ésta, se ejerce una ligera presión al tiempo que se desliza el
cubre sobre las bandas laterales, previamente humedecidas con H2O,
de su porción central.
2º. Aspirar la sangre hasta la señal de 0,5 (si se cree que puede haber
una policitemia) o hasta la de 1 (si se piensa que puede existir una
anemia).
En el caso de que se sobrepase algo el enrase, se hace descender la
columna de sangre tocando la punta de la pipeta con un algodón.
3º. Limpiar cuidadosamente el exterior de la pipeta con un algodón y sin
hacer bajar el nivel de sangre.
4º. Aspirar líquido diluyente hasta la señal 101.
5º. Desenganchar el tubo de goma de la pipeta y homogeneizar el
contenido del bulbo. Para ello se sujeta la pipeta por sus extremos, con
los dedos pulgar e índice, y se agita suavemente en sentido horizontal
durante 2 ó 3 minutos.
6º. Desechar las 3 primeras gotas emitidas por la pipeta.
7º. Depositar la siguiente gota entre la cámara y el cubre. Esto se realiza
ubicándola en uno de los bordes no adheridos del cubre y dejándola que
penetre por capilaridad, en el espacio existente entre ambas estructuras.
Durante esta operación hay que evitar que se formen burbujas y que
rebose la sangre diluida por fuera de los bordes del cubre.
Para ello se coloca la pipeta en posición casi vertical, se sitúa la punta
de la pipeta en el borde apropiado, se disminuye algo la presión ejercida
por el dedo índice sobre el otro extremo de la pipeta y se retira ésta justo
antes de que se llene completamente el espacio comprendido entre el
cubre y la cámara.
8º. Dejar reposar la sangre diluida, contenida en la cámara, durante
unos minutos, para que las células presentes en ella puedan
sedimentarse.
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9º. Enfocar el retículo con el objetivo de 40 x y con el condensador a


baja altura, y verificar que la distribución de los hematíes es homogénea.
10º. Contar los hematíes presentes en 80 cuadrados pequeños del
cuadrado grande central. Esto se logra, por ejemplo, contando los
hematíes que hay en los 4 cuadrados medianos de las esquinas y en el
del centro (véase figura 8).

Figura 8. Forma de hacer un recuento en cámara de hematíes.


Para evitar contar repetidamente los mismos hematíes, sólo se cuentan
los que están contenidos dentro del cuadrado y los que están en
contacto con sus líneas de demarcación superior o derecha (véase
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figura 9).

Figura 9. Forma correcta de contar los hematíes contenidos en un


cuadrado pequeño (los hematíes rayados se cuentan y los no rayados
no se cuentan).
A la hora de observar los cuadrados, se sigue un orden en “zig-zag”
(véase figura 10).

Figura 10. Orden que se debe seguir a la hora de observar los


cuadrados pequeños de un cuadrado mediano.
Lectura de resultados
Como se cuentan los hematíes presentes en 5 cuadrados medianos del
cuadrado grande central, y éste tiene 25 cuadrados medianos, hay que
multiplicar por 5 la cifra obtenida en el recuento, para calcular el número
de hematíes que hay en un cuadrado grande.
Como la longitud de cada uno de los lados del cuadrado grande central
es de 1 mm, y la longitud del espacio comprendido entre éste y el cubre
es de
0,1 mm, hay que multiplicar por 10 el resultado anterior, para determinar
así el número de hematíes existentes, no en 0,1 mm3, sino en 1 mm3.
Como la sangre, previamente al recuento propiamente dicho, se diluye,
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hay que multiplicar el resultado anterior por 100, si se ha partido de la


sangre entera contenida hasta el enrase de 1, o por 200, si se ha partido
de la sangre entera contenida hasta el enrase de 0,5 (para calcular las
diluciones realizadas, no se tiene en cuenta el líquido contenido en el
tubo capilar largo de la pipeta diluidora, pues se considera que éste no
se mezcla con el resto a nivel del bulbo).
En definitiva, para su cálculo puede emplearse la siguiente fórmula:
RBC = H x 5 x 10 x D.
RBC = recuento de hematíes (número de hematíes por mm3 de sangre)
H = hematíes contados en 5 cuadrados medianos
D = factor de dilución (100 ó 200)
El margen de error de esta técnica es alto (un ± 20%).
Interpretación clínica de los resultados obtenidos
La disminución del RBC se produce en las anemias. Y su aumento se da
en las policitemias.
Se considera normal un RBC comprendido entre los 4 y los 5,5
millones/mm3 en las mujeres, y entre los 4,5 y los 6 millones/mm3 en los
varones.
4.2. Recuento de Reticulocitos
Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros que contienen, como su
nombre indica, un retículo o red cromatínica formada por restos de ARN
(ribosomas), mitocondrias y otros órganos celulares.
Tienen un tamaño de 7 a 10 μm de diámetro. Permanecen en médula
ósea unos 2 o 3 días y después salen a sangre periférica, donde
terminan el proceso de maduración en unas 24 horas.
Su cantidad en sangre periférica es un reflejo de la actividad
eritropoyética medular.
Podemos observar los reticulocitos al microscopio óptico mediante la
tinción con colorantes vitales, azul de metileno nuevo o azul de cresil
brillante. Estos colorantes dan lugar a la precipitación de los restos de
ARN, y se observan como filamentos de color azul intenso en el interior
de la célula.
Según el grado de maduración que posea el reticulocito presentará un
modelo de retículo distinto, de ovillo denso en el caso de los más
inmaduros o de gránulos escasos para los más maduros. Se pueden
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clasificar en cuatro grupos distintos tal como se observa en la figura 11.

Figura 11. Grados de maduración del reticulocito.


Reactivos
• Azul de cresil brillante en polvo
• Solución salina al 0,9%
• Citrato sódico al 3%
• Agua destilada
• Aceite de inmersión
Muestra
Sangre anticoagulada con EDTA.
Debido a que los reticulocitos también maduran in vitro, es aconsejable
que la sangre utilizada se haya extraído recientemente, como máximo 6
horas antes de su análisis.
Técnica
1. Preparación del colorante:
Mezclamos 80 ml de solución salina y 20 ml de citrato sódico al 3%.
Pesamos 1 g de azul de cresil brillante y lo disolvemos en la mezcla
anterior.
Filtramos antes de usarlo.
2. Tinción de los reticulocitos:
Es una tinción supravital, es decir, se hace mientras las células aún
están vivas.
Para ello echamos 3 gotas de la solución colorante en un tubo de
hemólisis y otras 3 gotas de sangre total previamente homogeneizada.

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Mezclamos suavemente y tapamos con papel parafilm. Introducimos en


el baño maría a 37º C durante 5 minutos.
Pasado este tiempo volvemos a homogeneizar y tomamos una gota de
la suspensión para depositarla en un porta.
Realizamos una extensión y dejamos secar al aire.
Lectura de resultados
Con una gota de aceite de inmersión observamos la extensión con el
objetivo de 100 x.
Los hematíes se habrán teñido de color verde amarillento y los
reticulocitos se diferencian porque presentan en su interior unos hilos
finos de color azul.
Se deben contar 2.000 hematíes en total, y el cálculo del porcentaje de
reticulocitos es el siguiente:

% reticulocitos = Nº de reticulocitos contados x 100


Nº de hematíes contados
Para descartar errores en la técnica, debemos realizar dos extensiones
y hacer el recuento en ambas, de manera que la diferencia entre ellas
sea igual o menor a 5 reticulocitos.
El resultado final es la media de los dos porcentajes obtenidos.
Interpretación clínica de los resultados obtenidos
En adultos y niños los valores normales están entre 0,5 y 1,5%.
Se produce reticulopenia o disminución en la cifra de reticulocitos, en
casos de aplasia medular, anemia ferropénica, anemia megaloblástica y
anemias que cursan con dificultad en la eritropoyesis.
Por el contrario, hay reticulocitosis en anemias hemolíticas y post-
hemorrágicas, donde se aumenta el nivel de producción de hematíes
para contrarrestar su pérdida.
La cantidad de reticulocitos expresada en tanto por ciento es un valor
relativo referido a una cifra normal de hematíes. Por ello, cuando existe
una anemia con disminución en la cantidad de hematíes se compensa
con un aumento en el número de reticulocitos y debemos corregir su
valor en tanto por ciento para poder considerarlo real.
La corrección se hace en base al valor hematocrito (HCT) del paciente, y
se calcula de la siguiente forma:
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% de reticulocitos corregido = % reticulocitos x HCT. paciente


HCT. normal
Si existe una anemia muy intensa, aparece en sangre periférica un
número de reticulocitos mayor del que correspondería por regeneración
eritroblástica. Esto se debe a que el estímulo eritropoyético
compensador va acompañado de un período de maduración
intramedular más corto y una etapa de maduración en sangre periférica
más larga.
Esto se conoce como “desviación reticulocitaria” y se observa en el frotis
por la aparición de hematíes grandes con un color azulado (macrocitos
policromáticos). Para evitar pensar que hay una capacidad regenerativa
medular intensa se debe hacer una segunda corrección del % de
reticulocitos en función de los días que tarda en madurar el reticulocito
en sangre periférica, y a esto se le llama índice de producción
reticulocitaria (IPR).
Se obtiene con la siguiente fórmula:

IPR = % reticulocitos corregido


días de maduración en sangre periférica
Los días que tarda en madurar el reticulocito están reflejados en la
siguiente tabla, cuyos valores se han obtenido experimentalmente.

El IPR nos da un valor numérico de la estimulación hematopoyética por


encima de la actividad de la línea base normal.
Un IPR mayor de 3 nos indica un aumento de la actividad eritropoyética
medular, mientras que un IPR menor de 2 indica una escasa actividad
eritropoyética.

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4.3 Recuento de Leucocitos (WBC)


El recuento de leucocitos (WBC) consiste en la determinación del
número de leucocitos presentes en un volumen determinado de sangre
(generalmente en 1 mm3).
Para el recuento de glóbulos blancos en cámara, se diluye la sangre
problema en un líquido apropiado y con la pipeta de Thoma para
leucocitos. Posteriormente se deposita en la cámara de recuento, donde
se cuentan las células presentes en algunos cuadrados de uno de los
retículos.
Reactivos
· El líquido de dilución más utilizado es el de Turck, que se compone de
las siguientes sustancias:
- 2 ml de ácido acético glacial.
- 1 ml de solución acuosa de violeta de genciana al 1%.
- 100 ml de agua destilada.
El ácido acético produce la lisis de los eritrocitos sin alterar a los
leucocitos.
El violeta de genciana tiñe el núcleo de los leucocitos para que éstos
puedan observarse mejor. El violeta de genciana puede ser sustituido
por azul de metileno.
Muestra
La misma que en el RBC.
Técnica
Es la misma que en el recuento de hematíes, pero se cuentan los
leucocitos presentes en los 4 cuadrados grandes de las esquinas del
retículo (cada uno de ellos está dividido a su vez en 16 cuadrados
medianos). (Véase fig. 12.)
Si los leucocitos se ven bien, se pueden contar con el objetivo de 10 x.

Figura 12. Cuadrados en los que se cuentan los leucocitos en el WBC.


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Lectura de resultados
Como se cuentan los leucocitos presentes en 4 cuadrados grandes, hay
que dividir por 4 la cifra obtenida en el recuento, para calcular el número
de leucocitos que hay en 1 cuadrado grande.
Como la longitud de cada uno de los lados de los cuadrados grandes es
de 1 mm, y la longitud del espacio comprendido entre éstos y el cubre es
de 0,1 mm; hay que multiplicar por 10 el resultado anterior, para
determinar el número de leucocitos existentes, no en 0,1 mm3, sino en 1
mm3.
Como la sangre previamente al recuento propiamente dicho se diluye,
hay que multiplicar el resultado anterior por 10, si se ha partido de la
sangre entera contenida hasta el enrase de 1, o por 20, si se ha partido
de la sangre entera contenida hasta el enrase de 0,5.
En definitiva, para su cálculo puede emplearse la siguiente fórmula:
L
WBC = ——- x 10 x D
4
WBC = recuento de leucocitos (número de leucocitos por mm3 de
sangre).
L= leucocitos contados en 4 cuadrados grandes.
D = factor de dilución (10 o 20).
Interpretación clínica de los resultados obtenidos
La disminución del WBC se produce en las leucopenias, su aumento se
da en las leucocitosis.
Se considera normal un WBC comprendido entre 5.000 y 11.000/mm3.
4.4 Recuento de plaquetas con hemocitómetro
Para el recuento en cámara de plaquetas, se diluye la sangre problema
en un líquido apropiado y, posteriormente, se deposita en la cámara de
recuento, donde se cuentan las células presentes en alguno de los
cuadrados de uno de los retículos.

Material necesario
• Un tubo de ensayo, preferentemente, de plástico.
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PROCEDIMIENTOS DIAGNÓSTICOS  Recuento celular  • 20

• Una pipeta diluidora de Thoma, para recuento de glóbulos rojos.


• Un tubo de goma con boquilla, adaptable a la pipeta diluidora.
• Gasas.
• Una cámara de recuento, con un retículo tipo Neubauer mejorado.
• Un cubreobjetos, preferentemente, del tipo especialmente diseñado
para su uso en recuentos con cámara.
• Un microscopio, preferentemente, de contraste de fases.
• Papel siliconado, para la limpieza de la cámara y de las lentes.
• Una placa de Petri.
• Papel de filtro.
Reactivos
• Agua destilada o desionizada.
• Líquido de dilución. Hay varias soluciones que pueden emplearse
para el recuento de trombocitos. Sin embargo, en esta práctica se
recomienda el uso del líquido de dilución suministrado por los
Laboratorios Spinreact. Este líquido rompe los hematíes, evita la
agregación de las plaquetas entre sí y su adhesión a otros elementos,
y facilita la visualización de las plaquetas al hacerlas refringentes.
Muestra
• Sangre capilar o sangre venosa extraida recientemente y recogida en
un tubo con EDTA-K3.
Técnica
1º. Verter, en un tubo de ensayo, el volumen necesario de líquido de
dilución para efectuar los ensayos requeridos (aproximadamente, 1
ml para cada determinación).
El volumen de líquido de dilución sobrante no ha de ser
reintegrado al frasco donde estaba envasado, para no contaminar
al resto de líquido de dilución.
2º. Con una pipeta diluidora de Thoma, aspirar la muestra de sangre,
adecuadamente homogeneizada, hasta la señal de 1.
3º. Limpiar, con una gasa, la sangre adherida al exterior de la pipeta.
4º. Aspirar el líquido de dilución hasta la señal de 101 de la pipeta.
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PROCEDIMIENTOS DIAGNÓSTICOS  Recuento celular  • 21

5º. Agitar la pipeta, con movimientos de suave inversión, durante unos


5 minutos.
6º. Desechar las 5 primeras gotas de dilución que salen de la pipeta.
7º. Cargar, correctamente, una cámara de recuento, con la dilución de
sangre que queda en la pipeta.
8º. Colocar la cámara de recuento cargada, en el interior de una
cámara húmeda.
Se puede preparar una cámara húmeda con una placa de Petri
cerrada, en cuyo interior se deposita un papel de filtro embebido en
agua.
9º. Dejar reposar la cámara de recuento cargada, durante 15 minutos.
La cámara húmeda evita el resecamiento de la dilución de sangre
presente en la cámara de recuento y el reposo asegura la
sedimentación completa de todas las plaquetas.
10º. Colocar la cámara de recuento sobre la platina del microscopio.
11º. Enfocar uno de los retículos de la cámara de recuento, con un
objetivo de bajo aumento (10 x).
Con este objetivo se observa la homogeneidad de la distribución
celular, de forma que, si ésta no es satisfactoria, se efectúa una
nueva dilución de la muestra.
12º. Enfocar uno de los cuadrados grandes del retículo (por ejemplo, el
central), con el objetivo de mediano aumento (40 x).
Si se utiliza un microscopio normal, las plaquetas se visualizan
mejor situando el condensador ligeramente bajo.
13º. Contar la totalidad de las plaquetas depositadas en ese cuadrado
grande.
Lectura de resultados
Los trombocitos se observan como corpúsculos redondeados u
ovalados, de tamaño muy pequeño y muy refringentes. Hay que
procurar no confundirlos con leucocitos, restos eritrocitarios y, sobre
todo, con partículas de polvo.
Para calcular el número de plaquetas por mm3 de sangre, se aplica la
siguiente fórmula:
PLT/mm3= P x V x D = P x 1.000
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PROCEDIMIENTOS DIAGNÓSTICOS  Recuento celular  • 22

PLT/mm3 = Número de plaquetas por mm3 de sangre.


P = Número de plaquetas contadas en 1 cuadrado grande.
V = Corrección de volumen (10).
D = Corrección de dilución (100).
Si la cifra de plaquetas obtenida es, sospechosamente, muy reducida,
se efectúa una dilución menor de la muestra y se cuentan los
trombocitos depositados en varios cuadrados grandes.
Por el contrario, si la cifra de plaquetas obtenida es, sospechosamente,
muy elevada, se efectúa una dilución mayor de la muestra.
Email: Preparadores@arrakis.es • Web: http://www.preparadoresdeoposiciones.com

Esto implica un ajuste de los cálculos necesarios para obtener el


PLT/mm3 y tiene por objeto el confirmar los resultados obtenidos.

5. CONCLUSIONES
El recuento celular es una herramienta habitual en el diagnóstico de las
enfermedades, por ello es importante adiestrar a los alumnos en las
diferentes técnicas de recuento, manuales y automáticas, ya que en los
institutos suele haber un contador celular que les aproxime a las
técnicas automatizadas.

6. BIBLIOGRAFÍA:
• Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos.
F. Rubio, B. García y M. Carrasco. Ed. Thomson-Paraninfo.
• Técnicas de laboratorio en hematología. J. Lluis Vives y J. Luis
Aguilar. Ed. Salvat
REV.: 10/09

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