INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL Ingeniería de

fermentaciones

Unidad Profesional Interdisciplinaria de Ingeniería

campus Guanajuato

“Producción de penicilina a partir de Penicillium chrysogenum

utilizando un biorreactor Air-lift.”

Escalera Martínez Erika Karina1, López Rangel Carlos Christian1, Martínez Lizama Oscar
Adrian1, Naveda Moreno Adan1, Ramírez Urtiz Juan Emmanuel1

1
UPIIG, Instituto Politécnico Nacional, Av. Mineral de Valenciana No. 200, Fracc. Industrial Puerto
Interior, Silao de la Victoria, Guanajuato.

Maestra: Diana Ramírez Sáenz

Fecha de entrega: 3 de Marzo de 2014

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Objetivos:

- Conocer la función y manejo de un biorreactor Air-lift.

- Producir penicilina, un antibiótico obtenido a partir del hongo Penicillium chrysogenum,
utilizando un medio óptimo para su crecimiento, así como un biorreactor air-lift para
mantener las condiciones adecuados para su desarrollo.

Introducción.

Alexander Fleming descubrió la penicilina en 1928 a partir de Penicillium notatum, con este
descubrimiento los antibióticos β-lactamicos han beneficiado de manera significativa la calidad de
vida. En los últimos 70 años, la mejora de cepas dieron un incremento considerable de producción
β-lactamicos 0.5-1g/l en la década de 1950, con las cepas modernas se producen hasta 40g/L
(Elander, R. P).

Los antibióticos son sustancias químicas con una actividad específica, estos son producidos por
algunos organismos que presentan la capacidad de inhibir procesos metabólicos de otros
organismos. Los antibióticos se emplean para diversos fines: tratamiento para infecciones
respiratorias, gastrointestinales, tópicas. (Korolkoyas, 1983)

La producción de antibióticos es una característica que poseen muchos de los microorganismos que
habitan en el suelo, en esta flora predominan los hongos, por lo que gran parte de los antibióticos se
originan en el metabolismo secundario de los hongos. Los hongos imperfectos son los que van a
producir la mayoría de los antibióticos de origen fúngico. (Juárez, 1997)

La inhibición de procesos metabólicos primarios está dada por la actividad antibiótica que poseen
los metabolitos secundarios. En algunas ocasiones la bioactividad que posee el antibiótico está dada
por su semejanza funcional con un metabolito, esto se da por que se une al blanco (enzima,
orgánulo celular, etc.), y este va a interferir con un proceso metabólico.

La penicilina es producida por varias especies del género Penicillium y Aspergillus. La producción
de penicilina a nivel industrial está basada principalmente en la cepa P. chrysogenum. (Nielsen)

Las penicilinas son antibióticos β-lactámicos, estos se caracterizan por poseer tres estructuras que
son fundamentales para su actividad, las cuales son: una estructura de β-lactama, un grupo carboxilo
libre y uno o más grupos amino que presenta la cadena lateral. (Korolkoyas, 1983)

Las penicilinas son derivados de un acido llamado: ácido 6-aminopenicilanico, los distintos tipos de
penicilinas solo van a variar en la cadena lateral que está unida al grupo amino. La molécula clave
para la actividad de la penicilina es el anillo β-lactámico. La penicilina inhibe la enzima que actúa
en la reacción de transpeptidacion, esta enzima bloqueara la síntesis de un peptidoglicano con todos
sus enlaces, esta inhibición conducirá al peptidoglicano a la lisis osmótica. Las penicilinas van a
actuar sobre las bacterias que se encuentran en crecimiento, ya que están sintetizando
peptidoglicano nuevo. Las penicilinas se van a ligar a varias proteínas fijadoras de penicilina, estas

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proteínas van a destruir bacterias, ya que estas van a activar sus propias enzimas autolíticas. Las
penicilinas estimulan proteínas que se encuentran en las bacterias, llamadas perforinas, las cuales
forman agujeros o lesiones en la membrana de las bacterias. (Prescott)

La mayoría de los filamentos de P. chrysogenum poseen un marcador biosintetico capaz de crecer

en medios simples definidos. La mayoría de la especies de este género utilizan un amplio rango de
compuestos como el carbono, el nitrógeno y fuentes de energía, de esta manera utilizan diferentes
azucares como algunos polisacáridos, diferentes ácidos orgánicos, ciertos aminoácidos y algunos
lípidos. (Nielsen)

- Biosíntesis

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La producción de penicilina está afectada al producirse el aminoácido lisina, este aminoácido va a

inhibir la producción de la homocitrato sintasa, esta enzima está implicada en la síntesis de L-α-
aminoadipato, el cual es la base de la producción de la penicilina. (Microbiología general, 2008).

Para la producción de la penicilina comercialmente hablando se tiene que tomar en cuenta una serie
de pasos:

1. Preparación del inoculo

2. Preparación y esterilización del medio
3. Inoculación del medio en el fermentador
4. Aireación forzada con aire estéril durante la fermentación
5. Eliminación del micelio del medio de cultivo después de la fermentación
6. Purificación de la penicilina.

Para llevar a cabo y de manera adecuada la producción de la penicilina, es necesaria la utilización

de un biorreactor, el cual debe contener el medio de cultivo con los requerimientos necesarios para
el crecimiento de P. chrysogenum. Las condiciones optimas para el crecimiento del hongo son:
temperatura entre 23-25 °C, vvm en un rango de 0.5-1 y pH de 6.5. (Najafpour)

Se requieren realizar estudios sobre la cinética de crecimiento, esto para entender el

comportamiento de nuestro microorganismo, esta cinética consiste en la medición o estimación de
las velocidades de síntesis celulares, de formación de productos y los efectos del medio en los que
se encuentra el inoculo. Una vez concluido el proceso de fermentación es necesario separar la masa
(medio de cultivo, otros productos celulares, etc.) de una manera selectiva para posteriormente
llevar a cabo la purificación del producto deseado. (Quintero Ramírez, 1981)

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Materiales y reactivos

Materiales Equipo Reactivos

32- tubos eppendorft Biorreactor Air-lift Glucosa
32-Tubos Falcón Espectrofotómetro (NH4)2SO4
70-Puntas micro pipeta Centrifuga MgSO4X7H2O
1-micropipeta 10-100µL Parrilla Eléctrica FeSO4X7H2O
1-Micropipeta 100-1000µL Autoclave Alcohol 70%
1-Embudo de vidrio Estufa DNS
1-Vaso de precipitados
100mL
1-Vaso de precipitados
500mL
1-Vaso de precipitados de 1L
7-Celdas espectrofotómetro
Algodón
Espátula
Matraz de 500mL
1-Probeta de 100mL

Metodología

Preparación del medio

1. pesar: 26g de glucosa,0.2g de 2. pasar los reactivos a un 3. Calentar agitando , hasta el

sulfato de Mg 7*H2O, 0.004g de
sulfato de fierro 7*H2O, 0.4g
matrza con 400mL de agua punto de ebullicion durante 1
sulfato de amonio destilada minuto.

5. Enfriar 4. Esterilizar en autoclave a 121

°C durante 15 mintos

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Montado de biorreactor Airlift

3) Armar el biorreactor
1) Desmontar el biorreactor
2) Esterilizar el biorreactor. adecuadamente, cuidando no
airlift y lavarlo.
afectar los empaques.

5) Establecer las condiciones

de incubación adecuadas para 4) Conectar a una fuente de
6) agregar medio e inocular. Penicilium chrysogenum. Como alimentación y encender el
ph de 6 a 7, temperatura de 25 biorreactor.
°C-27 °C, 0.5 a 1 vvm.

- Inoculación del medio

Vaciar el P. chrysogenum
Medio de cultivo con P.
en el medio de cultivo
chrysogenum
(contenido en el reactor)

Realizar la técnica de
Mantener en reactor por inoculado cuidando
7 días a 25°C posibles
contaminaciones

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Cuantificación de la glucosa

- Cuantificación de sustrato: DNS (ácido dinitrosalicilico)

1. Agregar 0.03602g de
2. Realizar diluciones 3. Poner los tubos en
glucosa en 5ml de agua
seriadas, y agregar baño maria a 100°C
destilada. para obtener
300µL de DNS durante 5 minutos
una solucion 40mM

5. Medir absorbancia a
4. enfriar los tubos (el
540 nm en un tiempo
tiempo de enfriamiento
menor a 20 minutos
para todos los tubos
despues de haber
tiene que ser el mismo)
agregado el DNS

- Curva de calibración para penicilina.

Extraer una muestra Hacer diluciones 1:10, Preparar un blanco Vaciar las diluciones y
de penicilina 1:100, 1:1000 y 1:10000 agregando solo agua. el blanco en celdas
comercial con la penicilina comercial. espectrofotométricas

Anotar resultados, y Una vez calibrado, hacer las Ajustar el

hacer la curva lecturas de cada dilución espectrofotómetro a 320nm
correspondiente. preparada en el paso 2. y calibrar con el blanco.

Nota: La longitud de onda para la penicilina

se hace a 220nm, pero el
espectrofotómetro no hacía lecturas a esta
longitud de onda y se ajustó a 320nm.

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Cuantificación del producto en cada muestra

Extraer 1mL de cada Rescatar el sobrenadante

Tomar una muestra del
muestra tomada, por día y y colocarlo en una celda
biorreactor, una por día.
centrifugar. para el espectro.

Calcular la concentración Preparar el blanco (pura

Tomar la lectura de la
del producto con la curva agua), ajustar el espectro
muestra y anotar los
de calibración preparada a 320nm y calibrar con el
resultados.
para la penicilina. blanco

Cuantificación de la biomasa (peso seco).

Colocar 14 tubos Una vez pasado el tiempo, Poner 0.6mL de cada Pesar los tubos que se
eppendorft en la estufa a colocar los tubos 2 horas muestra extraída por quedaron solos y
60 °C por 6 horas. en el desecador. día, una en cada tubo. registrar pesos.

Anotar los resultados Una vez que se sequen, Poner los tubos con
de biomasa pesar y restar el peso de muestra en la estufa a
obtenidos. los tubos solos (paso 4). 70°C hasta que se sequen.

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Discusión y Resultados

Figura 1. Medio de cultivo Czapek (Cz) inoculado con P. chrysogenum.

Se preparó el medio de cultivo Czapek (Cz) el cual contiene los siguientes componentes Sacarosa,
NaNO3,K2HPO4,MgSO4 x 7 H2O,FeSO4 x 7 H2O,agua destilada; de los cuales se cambió la sacarosa
debido a que no es azúcar reductor y fue sustituido por glucosa, así también se cambió el
NaNO3por (NH4)2SO4 . La glucosa es la única fuente de carbono en este medio, mientras que el
sulfato de amonio provee al medio de nitrógeno. Este medio es recomendado para el desarrollo y
aislamiento de hongos saprófitos como P. chrysogenum. El crecimiento de P. chrysogenum en
este medio es excelente por lo que fue una opción adecuada, además de que los componentes no
intervienen para cuantificación de azúcares reductores. (F. García, 2009)

Se obtuvo desarrollo del hongo en el medio Czapek (Cz) al transcurrir aproximadamente 48 horas
debido a que los componentes del medio le proporcionaron al hongo los nutrientes requeridos, el
tiempo de desarrollo del hongo comúnmente es de 40 horas (Tortora, 2007). Está diferencia de
tiempos en el desarrollo del hongo puede ser causa de la falta de glucosa ya que se observó
esporulación, pues el hongo consume bastante glucosa, además la cepa que se utilizó para inocular
era vieja y este factor interviene en la cinética de crecimiento, pues cepas de mayor edad tardan
mayor tiempo en pasar de la fase lag, es decir, tardan más tiempo en adaptarse a las nuevas
condiciones. (H. Montoya, 2008).

El medio de cultivo con el hongo desarrollado se pasó un biorreactorairlift para mantener el

crecimiento y desarrollo de P. chrysogenum adecuado y obtener penicilina como producto; este
equipo permite el desarrollo de P. chrysogenum debido a que en él se establecen las condiciones
de crecimiento adecuadas para el hongo; temperatura de 25 °C- 27 °C, pH de 6-7 y 0.5-1 vvm
(Atkinson, 1986); además estas condiciones son monitoreadas durante todo el proceso lo que

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permite identificar si existiera algún inconveniente en el proceso. Este tipo de biorreactor utiliza
como fuente de agitación gas rociado (SERV-PRENDO, 2011), es por ello que se utiliza un
compresor durante todo el proceso, el aire que es introducido es esterilizado mediante el uso de
filtros que evitan el paso de bacterias y por ende contaminación dentro del sistema. (Remington,
2000)

El sistema fue enchaquetado para obtener una temperatura constante en el mismo, el sistema cuenta
con un bafle o tubo interno que permite distribuir el gas uniformemente para obtener una agitación
delicada y uniforme del medio de cultivo inoculado. (SERV-PRENDO, 2011)

Parámetros cinéticos

La fermentación de la penicilina es un proceso aeróbico con una velocidad de absorción

volumétrica de oxígeno, de 0.4 a 0.8 mM/L. La velocidad de aeración requerida está entre 0.5 a 1
volúmenes de aire/ volúmenes de líquido*hora, estos rangos dependen de la cepa, en nuestro caso
tomamos estas condiciones de la referencia para la producción de la penicilina (Atkinson, 1986).

El rango de temperatura óptima para el crecimiento de P. chrysogenum, en la producción de

penicilina es de 25-27°C, con un rango de pH que va de 6 a 7.

La fase de crecimiento de P. chrysogenum es de unas 40h con un tiempo de duplicación de 6h,

durante la cual se forma la mayor parte de la masa celular, el suministro de oxígeno puede ser
crítico si la masa celular aumenta demasiado, ya que el aumento de viscosidad dificulta la
transferencia de oxígeno. Una vez que el hongo pasa la fase de crecimiento comienza l producción
de penicilina (Tortora, 2007).

Los procesos de alimentación de glucosa tiene gran éxito en la producción de penicilina, si se usa
como fuente de carbono puede alcanzar unos niveles de rendimiento de 65% de la cantidad de
sustrato es usado para el mantenimiento energético, el 25% para el crecimiento. Es decir, el
aumento de la biomasa y 10% para la producción de la penicilina, el producto de interés (Atkinson,
1986).

Los componentes que se adicionan principalmente son una fuente de carbono, azufre, iones
esenciales que el hongo requiere para su metabolismo, iones como el Mg, Fe. Estos iones actúan en
el metabolismo del hongo, por ejemplo el Mg es estabilizador de organelos y es cofactor (Tortora,
2007).

En 1976 se demostró la importancia de suministro continuo de amonio (que se introduce con el

reactivo (NH4)2SO4), de aquí se pueden considerar las fuentes de azufre y de nitrógeno el azufre es
importante ya que impulsa a formar ADN, ADR, aminoácidos azufrados, esto es muy importante
sobre todo en la fase lag, donde comienza a formarse el contenido celular y las células crecen de
tamaño mas no de número (Tortora, 2007).

En base a los parámetros cinéticos obtenidos de la literatura fue como se ajustaron en el biorreactor
Air-lift, para que el P. chrysogenum, pudiera crecer de la mejor manera posible, para obtener más
producción de penicilina.

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Cuantificación de sustrato

Para la cuantificación de sustrato se utilizó la técnica DNS, ya que los componentes del medio de
cultivo eran propicios para llevar a cabo este procedimiento pues estos eran agentes reductores,
permitiendo así contabilizar de manera más especifica la disminución de glucosa en el cultivo(T. A.
Milne et al 1990). Una vez iniciado el proceso de fermentación se tomo la primera muestra
iniciando el día miércoles 19 de febrero y se determinó la absorbancia para cada muestra durante
los siguientes 7 días hábiles.

En primera instancia se elaboró una curva patrón, para esta se preparó 5mL de una solución de
glucosa con concentración 0.04mM a partir de la cual realizamos diluciones, para obtener las
concentraciones necesarias (2, 4, 6, 8, 10).

De cada tubo se tomaron 0.1mL y se adicionaron 0.3 mL de DNS, a continuación se sometieron a

ebullición durante cinco minutos, después de alcanzar la ebullición se vaciaron los tubos en un baño
de hielo, al alcanzar la temperatura ambiente se adicionaron 0.6mL de agua y se leyeron en el
espectro a 540nm.

Se utilizó la siguiente fórmula para determinar la concentración de la solución stock.

= =0.05 mL de solución stock

Mediante la fórmula anterior se calcularon las concentraciones faltantes.

En la siguiente tabla se muestran las concentraciones de la solución stock así como los volúmenes
adicionados de agua y DNS, además de las absorbancias medidas en el espectro.

Tabla1. Preparación de curva patrón usando DNS y absorbancias.

No. Muestra Concentración Vol. Sol. Vol. Agua Vol. DNS absorbancias
(mM) stock (mL) (mL) (mL)
0 0 0 1 0.3 blanco
1 2 0.05 0.95 0.3 0.159
2 4 0.1 0.9 0.3 0.321
3 6 0.15 0.85 0.3 0.568
4 8 0.2 0.8 0.3 0.647
5 10 0.25 0.75 0.3 0.784

A continuación se muestra la gráfica de la curva patrón de DNS

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Curva patron de DNS

1
y = 0.0788x + 0.023
Absorbancia (nm) 0.8 R² = 0.9736

0.6
Curva patron de DNS
0.4
Lineal (Curva patron
0.2
de DNS)
0
0 5 10 15
Concentracion (mM)

Grafica 1. Curva patrón de DNS para cuantificación de sustrato.

Enseguida se muestran las absorbancias obtenidas cada 24 horas después de haberse inoculado.

Tabla 2. Absorbancia obtenida a diferentes tiempos

Muestra Absorbancia
T1 0.347
T2 0.232
T3 0.193
T4 0.157
T5 0.098
T6 0.063

Mediante las lecturas del espectro se obtendrán las concentraciones de sustrato a cada tiempo
sustituyendo las absorbancias en la ecuación de la gráfica 1 como se muestra a continuación.

La siguiente tabla muestra las concentraciones de cada lectura

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Tabla 3. Cálculos de la glucosa contenida en el medio de cultivo a diferentes tiempos

Muestra Conc. Conc. real conc.(g/L)

(mM) (M)
T0 4.1167 0.370050762 66.60913711
T1 2.6522 0.238705583 42.96700501
T2 2.1573 0.194162437 34.94923864
T3 1.7005 0.153045685 27.54822328
T4 0.9517 0.085659899 15.41878173
T5 0.5076 0.045685279 8.223350202

Cinética del sustrato

4.5
4 y = -0.0281x + 3.6977
Concentración (mM/mL)

3.5 R² = 0.9541
3
2.5 Cinética del sustrato
2
1.5
Lineal (Cinética del
1 sustrato)
0.5
0
0 50 100 150
Tiempo (hrs)

Grafica 2. Cinética del Sustrato de P. chrysogenum

En la gráfica 2 se observa el comportamiento del sustrato durante los 7 días de la fermentación, en

la cual se observa como el sustrato disminuye gradualmente cada día, se observa que después de las
24 horas de realizado el inoculo se presenta la disminución más considerable de biomasa, lo cual
puede deberse a que el hongo se encuentra en pleno desarrollo y comienza a aprovechar al máximo
el sustrato.

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Resultados cuantificación de penicilina (producto).

Al igual que en la cuantificación de sustrato, para la cuantificación de penicilina se realizo una

curva patrón a partir de la cual se obtuvieron las concentraciones de las muestras tomadas durante
cada día a lo largo del proceso de fermentación de la penicilina.

Por lo tanto se realizaron diluciones seriadas de 1:10,1:100,1:1000,1:10000 y 1:100000 arrojando

los siguientes valores en el espectrofotómetro en la tabla No. 4.

Tabla 4. Absorbancias registradas para la creación de la curva patrón de la penicilina

Dilución Concentración Absorbancia

(mg/mL)
1:10000 0.060 0.016
1:1000 0.548 0.087
1:100 4.93 0.425
1:10 44.44 0.582
1 400 0.689

Con los datos anteriores se realizo la curva patrón de penicilina que se muestra a continuación.

Curva de penicilina y = 0.0837ln(x) + 0.2265

0.8 R² = 0.9556

0.7

0.6

0.5
Absorbancia

0.4 Curva de penicilina

0.3
Logarítmica (Curva de
0.2 penicilina )

0.1

0
0 100 200 300 400 500
-0.1
Concentración

Grafica 3. Curva patrón de penicilina

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Posteriormente se muestran los valores de absorbancias obtenidos para cada toma de muestra, las
cuales se realizaban cada 24 horas durante 7 días.

Tabla 5. Absorbancias registradas para cada toma de muestra

muestra Absorbancia
T0 0.003
T1 0.022
T2 0.039
T3 0.05
T4 0.107
T5 0.04
T6 0.144

A partir de estos valores de absorbancia y con la ecuación obtenida de la curva patrón de penicilina
se calculo la concentración de penicilina presenta en cada toma de muestra.

+0.912

Donde

x= la concentración de penicilina presente en la toma

y= la absorbancia

Tabla 6. Valores de concentración provenientes de la ecuación de la curva patrón de penicilina.

muestra Tiempo (Hrs) Concentración

(mg/mL)
T0 0 0.01
T1 24 0.022
T2 48 0.030
T3 72 0.037
T4 96 0.108
T5 120 0.035
T6 144 0.215

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Producción de penicilina
0.25
Concentración (mg/mL)
0.2

0.15

0.1 Producción de
penicilina
0.05

0
0 50 100 150 200
Tiempo (Hrs)

Grafica 4: Producción de Penicilina

En la gráfica se muestra el comportamiento de producción de penicilina, se observa como la

producción de penicilina va aumentando conforme pasa el tiempo, la concentración después de 144
Hr se eliminó de la gráfica. Ya que es un valor atípico, que no se relaciona con los demás obtenidos,
se descartó para apreciar mejor la tendencia y comportamiento de la producción de penicilina.

Cuantificación de Biomasa

Para cuantificar la biomasa se utilizó, el método de peso seco se llevó a cabo en tubos eppendorf, se
pusieron en la estufa por 6 horas, después 2 horas en el desecador, se pesaron y se agregó 1mL de la
muestra y se dejaron secar (Tabla 7).

Tabla 7: Datos obtenidos de biomasa.

Muestra Tiempo (Hr) Tubo peso solo(g) Tubo con muestra(g) biomasa (g/mL)
t0 0 0.9957 1.0463 0.0506
t1 24 0.9888 1.062 0.0732
t2 48 0.9968 1.074 0.0772
t3 72 1.0027 1.076 0.0733
t4 96 0.996 1.084 0.088
t5 120 1.0027 1.0616 0.0589
t6 144 1.0302 1.07 0.0398

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Creciemiento (Biomasa)
0.1
0.09
0.08
Biomasa (g/mL)
0.07
0.06
0.05
0.04 Creciemiento
0.03 (Biomasa)
0.02
0.01
0
0 50 100 150 200
Tiempo (Hr)

Grafica 5: Comportamiento de crecimiento del Penicillium Chrysogenum.

En la gráfica se aprecia que no hay una fase como tal de latencia, hay un crecimiento continuo y un
tiempo corto de crecimiento lo, también se aprecia que la muerte celular es rápida en comparación
con las otras etapas, tampoco se puede apreciar una fase de estacionaria.

Cinética de crecimiento y Rendimiento observados

Los datos obtenidos de consumo de sustrato, crecimiento de biomasa y producción de producto se

muestran en la siguiente tabla:

Tabla 8: Datos obtenidos de cinética de crecimiento.

P
t (h) X(g/mL) Sr(g/L) (mg/mL) Sr(g/mL) Sc (g/mL) Yxs (gx/gs) 1/Yxs (gs/gx) X/Xo ln(x/x0) Ypx (gp/gx)
0 0.0506 66.6 0.01 0.0666 0 0 0 1 0 0
24 0.0732 42.96 0.022 0.04296 0.02364 0.526070764 1.900884956 1.4466 0.3692438 0.011952076
48 0.0772 34.94 0.03 0.03494 0.03166 0.761305094 1.313533835 1.5257 0.4224479 0.020406068
72 0.0733 27.54 0.037 0.02754 0.03906 0.824255628 1.213215859 1.4486 0.370609 0.018866108
96 0.088 15.41 0.108 0.01541 0.05119 2.426995457 0.412032086 1.7391 0.5533852 0.093027401
120 0.0589 8.22 0.035 0.00822 0.05838 1.00973236 0.990361446 1.164 0.1518895 0.008466265

Rendimientos observados

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( )( )

( )( )

Vel. Especifica de crecimeinto

0.6
y = -0.0013x + 0.4646
R² = 0.11
0.5

0.4
ln(x/x0)

0.3 Vel. Especifica de

crecimeinto

0.2 Lineal (Vel. Especifica

de crecimeinto )

0.1

0
0 50 100 150
Tiempo (Horas)

Grafica 6: Velocidad especifica de crecimiento.

µ (Velocidad especifica de crecimiento) = 0.0013 1/h

Tiempo de duplicación (td) =ln2/µ

Td=533 horas

La velocidad de duplicación es mucha, la razón puede ser porque se pudo incluir un dato
inconsistente o varios datos no dieron de la manera esperada, por lo cual modifico la velocidad
especifica de crecimiento y por ende el tiempo de duplicación es muy elevado.

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Velocidad consumo de sustrato

2 y = -0.0113x + 1.9828
R² = 0.6371
1.8
1.6
1.4
1.2
1/Yxs

1 Velocidad consumo
de sutrato
0.8
Lineal (Velocidad
0.6 consumo de sutrato )
0.4
0.2
0
0 50 100 150
Tiempo (Horas)

Grafica 7: Velocidad consumo de sustrato, se grafica el tiempo vs el inverso del rendimiento entre
la biomasa y el sustrato.

qs (velocidad de consumo de sustrato) = 0.0113 gs/gxh

Vel. Especifica generación de

producto y = 0.0003x + 0.0108
0.1 R² = 0.0866

0.08
Vel. Especifica
0.06
generación de
Ypx

0.04 producto
Lineal (Vel. Especifica
0.02
generación de
0 producto)
0 50 100 150
Tiempo (Horas)

Grafica 8: Velocidad especifica de generación de producto, se grafica el tiempo vs el rendimiento

entre el producto y la biomasa.

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qp (velocidad especifica de generación de producto)=0.0003gp/gxh

Conclusión

Se aprendió a utilizar el biorreactor airlift y la importancia de cada uno de los componentes de este
sistema, ya que es importante cuidar la esterilidad del proceso en todo momento para evitar
contaminación y por lo tanto una alteración en la obtención del producto final. Para obtener un
mejor desarrollo del hongo es conveniente el uso de una cantidad mayor de glucosa a la que se
utilizó debido a que el hongo utiliza la glucosa como única fuente de carbono y la consume bastante
rápido, así se evitara la esporulación y se desarrollara de forma adecuada el hongo. Se identificó la
importancia de los parámetros cinéticos para el desarrollo del hongo, además de que se aprendió a
elegir el medio más adecuado que no interviniera en cuantificación de azucares reductores. Se
realizó una cuantificación de producto mediante espectrofotometría por lo que se reafirmó el uso de
este equipo, además de que esto nos permitió comparar la cantidad de penicilina producida por el
hongo contra la cantidad de penicilina en una muestra comercial. También se calcularon los
parámetros cinéticos, para saber las velocidades de generación de producto, de consumo de sustrato
así como de crecimiento, esto sirve, por si en otro momento se quiere producir penicilina
nuevamente, en base a estos datos obtenidos se pueden modificar pasos, como cambiar la cantidad
de sustrato suministrada, que cantidad de biomasa inicial introducir, para hacer una producción más
eficiente con mejores resultados de generación de producto.

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