TIFICA. | SIMPOSIUM INTERNACIONAL EN PRODUCCION AGROALIMENTARIA Y XXIV REUNION CIE TECNOLOGICA FORESTAL Y AGROPECUARIA TABASCO'2012, 18 Y 19 DE OCTUBRE CARDENAS, T _ RALSTONIA SOLANACEARUM (E.F. SMITH, 1896) YABUUCHI ET AL., 1993 ASOCIADA A LA MARCHITEZ DEL PINON (JATROPHA CURCAS L.) EN ARRIAGA, CHIAPAS, MEXICO. Sol-Heméndez Gabriela’, Garrido-Ramirez Eduardo R“, Quiroga-Macrigal Ricardo’, Rosales- Esquinca Maria de los Angeles!, Rincon-Espinose Mercedes Patricia’, Salazar-Pinacho Wester Moisés', Holguin-Melendez, Francisco” Universidad Autonoma de Chiapas (NACH), Facultad de Ciencias Agronémicas, Cuerso Académico Recursos Fitogenéticos Tropicales, Carr, Ocozocoautla-villaflores Km. 84, CP 30470, Villafiores, Chiaoas, ‘INIFAP-CECECH, *ECOSUR. Email garride eduardo@inifap.god.mx RESUMEN E! pifién (Jatropha curcas L.) es una planta originaria de Mesoamerica: en Chiapas, México se impulsa la investigacion y desarrollo de esta planta como cultive bioenergético. Estudios realizados fen diversos paises sefalan las posibles limitantes agroecolégicas de esta especie, entre las que destacan las enfermedades. El presente trabajo tuvo como objetivo determinar el agente causal de una nueva enfermedad del pifén reportada en el municipio de Arriaga, Chiapas, México, conocida Por sus sintomas como marchitez y pudricién basal, La metodologia se basd en el recorrido de dos huertos comerciales de pifén, uno de material de semilla procedente de India y el otro de material nativo de Chiapas. Se muestrearon plantas con sintomas presuntivos de marchitez, flaccidez de peciolo foliar, marchitez y secamiento de hojas, pudricién de raices y base dei tallo y formacion de ralces adventicias, Las muestras se analizaron con técnicas convencionales de aisiamiento en medios de cuttivo, pruebas bioquimicas y pruebas de patogenicidad Los resultados obtenidos indican que la marchitez esté asociada con una bacteria Gram negativa, con resultados positivos para YDC, KOH, oxidasa, ureasa, catalasa, aerobiosis y CPG-TTC y resultados negativos para pigmento fluorescente en BK y anaerobiosis en medio Hugh y Leifson. Las pruebas de patogenicidad realizadas en tubérculos de papa e hipersensibiidad de tabaco, determinaron que dos cepas bacterianas aisladas de pifion son fitopatégenas. Los resultados mostraron que dichas ‘cepas coinciden con las caracteristicas reportadas para Ralstonia solanacearum (E. F. Smith 1896) ‘Yabuuchi et a’., 1983, siendo el primer reporte para México de la presencia de este patogeno como agente causal de marchitez en pifién, reportada sélo en India e indonesia, PALABRAS CLAVE: cultivos biocombustibles, diagnostico, marchitez bacteriana INTRODUCCION El pion es una planta oleaginosa de porte arbustivo originaria de Mesoamerica (Heller, 1996). El género Jatropha comprende casi 175 especies, 45 en México (35 endémicas) y 65 especies son Nativas del Viejo Mundo (Dehgan y Webster, 1979). Jatropha curcas L. es una especie con gran distribucién en los tropicos y los subtrOpicos. Resiste notmaimente el calor, aunque también soporta bajas temperaturas y puede resistir hasta una escarcha ligera Se le encuentra mayormente a bajas elevaciones, por debajo de los 1,200 msnm, en tacotales de areas secas o humedas, en pianicies o colinas, con precipitaciones de 300 a 1 800 mm y temperaturas de 18 a 28°C; aunque se planta también en sitios con temperaturas de hasta 34°C y no requiere de un tipo de suelo especial. Su requerimiento de agua es sumamente bajo y puede soportar periodos largos de sequia (de tres a seis meses); se adapta a una gran variedad de yyendo los de bajo contenido de nutrientes. Aunque los prefiere ivianos y bien suelos, it 478| SIMPOSIUM INTERNACIONAL EN PRODUCCION AGROALIMENTARIA Y XXIV REUNION CIENTIFICA~ TECNOLOGICA FORESTALY AGROPECUARIA TABASCO'2012, 18 Y 19 DE OCTUBRE CARDENAS, TAB. drenados, se desarrolla normalmente en suelos aridos y semiaridos. Jatropha curcas L. crece en cualquier parte, incluso en las tierras cascajosas, arenosas y salinas; puede crecer en la tierra Pedregosa mas pobre, inclusive en las hendeduras de las piedras. En suelos pesados la formacin de raices se ve limitada (Torres, 2007) Los campos de produccién extensiva de Jatropha curcas son susceptibles a enfermedades; como se espera en cualquier monocultivo. El diagnéstico de las enfermedades esta basado principalmente en la observacién de sintomas presuntivos y de signos de la presencia de diversos patégenos como son hongos, bacterias, virus y nematodos (Quimbayo, 2010; Heller, 1996; y Jongschaap ef al. 2007), Entre las enfermedades mas importantes de J. curcas se mencionan la pudriciSn de raiz por Ciitocybe tabescens, la roya por Phakopsora jatrophicola, el Mosaico Amarillo, causado por virus y la mancha foliar bacteriana por Xanthomonas sp. La pucrcion de raiz y marchitez del pifdn (bacterial wit of physic nut) es una enfermedad que se ha detectado en muy pocos lugares del mundo, especfficamente en Indonesia e India (Hendroko et al 2008; Hendra, 2009; Hidayah & Yullant, 2008). Esta enfermedad es causada por la bacteria Ralstonia solanacearum (E. F. Smith 1896) Yabuuchi et al, 1993; la cual produce marchitez en hojas, pudricién basal de tao y raices, provocando la muerte de la planta (Ginting & Maryono, 2009), Ralstonia solanacearum (E. F. Smith 1896) Yabuuchi et al, 1993, es una bacteria aerébica Gram negativa, en forma de bacilo, midiendo 0.5-0.7 X 1.5-2.0 um en tamafo. Es muy sensible a la desecacion y es inhibida en cultivo de bacterias con concentraciones bajas (2%) de cloruro de socio (NaC). Para la mayoria de las cepas, la temperatura dptima de crecimiento esta entre 28 y 32 °C; sin embargo, algunas cepas tienen una temperatura éptima de crecimiento mas baja de 27 “C (Champoiseau, 2008) Ralstonia solanacearum es una bacteria fitopatégena cuyos principales hospedantes son la papa el tomate y el plétano (Gémez, 2005). En papa y tomate la enfermedad es conocida como podredumbre parda de la papa y marchitez bacteriana del tomate, respectivamente, los sintomas inducidos por R. solanacearum raza 3 biovar 2-A son muy parecidos, En las primeras etapas de la enfermedad, los primeros sintomas visibles aparecen generaimente ‘en el follaje de las plantas. Estos sintomas consisten en marchitamiento de las hojas mas jovenes cen las partes terminales de las ramas durante la parte mas caliente del dia (Champoiseau, 2008). Esta bacteria es habitante comiin del suelo y normaimente infecta via las raices, moviendose sistémicamente a través de xilema; ademas puede sobrevivir por afios en el agua y en tierras hdmedas. La bacteria ha sido reportada en mas de 30 paises y en casi todos los continentes. Se reportan 5 razas y 5 biovares. De acuerdo al rango de hospedantes principales, Ralstonia solanacearum se ha clasificado en cinco razas y cinco biovares (Champoiseau, 2008). En Arriaga, Chiapas, México, se ha presentado en una parcela de pifién de 100 ha, una pérdida de! 90% debido a una enfermedad con esta sintomatologia (Salazar-Pinacho, 2010), lo cual ha CauSaGO Gran preocupacion 2 productores e instituciones. El objetivo general de este trabajo es aislar, identiicar y determinar mediante pruebas bioquimicas y de patogenicidad de las bacterias asociadas a la marchitez de! pifion (Jatropha curcas L). . . MATERIALES Y METODOS Localizacién del area de estudio El presente trabajo de investigacion se realizb en su fase de campo, en el municipio de Arriaga, Chiapas, México, localizado en la regién IX. Istmo-Costa de Chiapas, Ia cual se ubica entre los 12° 45 y 16° 18° LN y entre los 93° 10 y 94° 10’ LW; limita al Norte con las regiones Centro y Frailesca, 479| SIMPOSIUM INTERNACIONAL EN PRODUCCION AGROALIMENTARIAY XXIV REUNION CIENTIFICA- TECNOLOGICA FORESTAL V AGROPECUARIA TABASCO'2012, 18 19 DE OCTUBRE CARDENAS, TAB. RS al Sur con el Océano Pacifico, al Este con la regién Soconusco y al Oeste con él estado de Oaxaca, Fase de campo La fase de campo consisto en colectar muestras de tejidos vegetales con sintomas presuntivos de enfermedad bacieriana en los dos sitios sefialados, durante el periodo febrero-lunio de 207%. Los sitios de mugstreo fueron dos plantaciones comerciales de pifén: a) Lote particular det Sr ‘Abraham Gutiérrez Rosales, de 90 ha de pifén originario de la India, sembrado de semilla en 2008, ») Lote de fa Universidad Auténoma de Chiapas, de 3 ha de pifion originario de Chiapas, sembrado de semilla en 2010. Fase de laboratorio Las muestras tomadas en campo, se analizaron en el Laboratorio de Fitopatologia de la Facultad de Ciencias Agronémicas de la Universidad Auténoma de Chiapas en Villafiores, Chiapas y en el Laboratorio de Sanidad Vegetal del Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agricolas y Pecuarias (INIFAP), en Ocozocoautla, Chiapas. Para caracterizar al agente causal de la marchitez bacteriana del pion (Jatropha curcas L.) se realzaron las siguientes pruebas bioquimicas: Aislamiento en Papa Dextrose Agar (PDA), Medio 8 de King (BK), Extracto de levadura-dextrosa-carbonato de caicio (YDC), Rea al KOH, Oxidase, Ureasa, Catalasa, Metabolismo oxidetivo y/o fermentative de la glucose (aerobiosis y ‘anserobiosis), Medio de CPG-TTC. Para verificar la patogenicidad de les cepes obtenidas. se ron las pruebas de Pudricién de tubérculos de papa y prueba de hipersensiblidad en tabaco (aimes-Salgado, 1877; Agrios, 2001) RESULTADOS Y DISCUSION Desctipcién de los sintomas de Ia enfermedad Los sintomas observados en las plantas de pifén en Ariaga, Chiapas, decaimiento 0 marchitez, denominsdo un “entristecimiento" de las hi peciolos; al principio, en las hojas de la base del tallo y continua hacia arriba, posteriormente un amarliamiento gradual de ies hojas hasta secarse por completo y causar defoliacién; observéndoss un sncorvamiento en plantas con sintomas avanzados (Figura 1). Al cortar los tallos y surmargiios en-agua se observé un exudado bacteriano en forma de hilo de color bianco saliendo de los haces vascuiares. En la parte basal del tallo y cuello de la ralz se encontro una pudricion con mal olor, color café obscuro, que avanza de Ie periferia hacia el centro y de ig zona del cuelio hacia arriba internamente en el ‘allo, hasta la primera o segunda bifurcacion (10-25 om) y hacia abejo-hasta elcanzar las ralces secundarias y terciarias, ocasionando la pudricion total de la raiz ‘con fg consiguiente pérdida de anciaje de la planta en el suelo y muerte total de la planta. En las ‘faserfirates;previas aia muerte de la planta, se presenta una gran cantidad de raices adventicias (Figura 2), 'El patégeno es extremadamente virulento pues en pocos dias (15-30 dias aproximadamente) la planta puede morir, y es muy agresivo, pues el contagio de planta @ planta curre répidamente en el campo, en el lapso de 1 a 3 meses la tasa de infeccion se increment considerablemente Figura 1. Plantas de Jatropha curcas L., con sintomas de marchitez a) iniciales, b) intermedios yc) tardios. 480