You are on page 1of 1

MICROPROPAGACIÓN DE DOS VARIEDADES DE (Zantedeschia elliottiana y Z.

aethiopica)
A PARTIR DE ÁPICES DEL VÁSTAGO.
(Micropropagation of 2 varieties of (Zantedeschia elliottiana y Z. aethiopica) from shoot apex).
J. Almeida y I. Contreras G.
Universidad de Los Andes. Facultad de Ciencias Forestales y Ambientales.
Departamento de Botánica. Laboratorio de Cultivo Vegetales in vitro. Mérida. Edo Mérida.
Email: jnataalmeida1974@hotmail.com ; idelcg91@gmail.com

RESÚMEN
La Zantedeschia pertenece a la familia Araceae, comúnmente conocida como calalili, es oriunda de África. Una de las especies más conocidas, En relación a las etapas de propagación con BA y TDZ, se encontraron diferencias entre las dosis utilizadas en los explantes de Z. elliothiana,
es la Z. aethiopica de color blanco; flor nacional de Etiopía. Existen otras seis especies de Zantedeschia en Suráfrica con flores de colores ver (Tabla 1). En los tratamientos con BA 1,0; 2,0 y 3,0 mg.L-1, se generaron durante las 4 semanas: 110; 130 y 180 brotes/explante,
variados y son utilizadas como flores de corte. Cultivadas frecuentemente en el trópico de Sur América. En Venezuela, es común verlas respectivamente. Después de la cuarta semana, algunos de los brotes inducidos con estas concentraciones de BA se habían diferenciado y
propagadas en las zonas altas de los Andes, por ejemplo en Bailadores, Mérida. Se propaga mediante divisiones del tallo o el rizoma presentaban hojas pequeñas muy verdes, con tallos robustos y raíces muy cortas de 1 a 2 por plántula. En cambio, con las concentraciones de
produciendo cientos de plantines por métodos convencionales. Se necesitan técnicas de micropropagación para su multiplicación masiva, por BA 4,0 y 5,0 mg.L-1, se obtuvo una regeneración de 223 y 289 brotes/explante. Después de la cuarta semana, la proliferación de los brotes
su importancia comercial y su facilidad para propagarse por cultivos in vitro. Con tal fin se aplicaron tales métodos usando como explantes producidos bajo estas concentraciones no se habían diferenciado. Con la citocinina TDZ 0,2 mg.L-1, se formaron durante las cuatro semanas
ápices del vástago. Éstos fueron cultivados en medio nutritivo completo MS (1962), además (mg.L-1) Myo-inositol 100; Acido Nicotínico 72 brotes/explante y con la máxima concentración de TDZ 0,4 mg.L-1, un total de 92 brotes/explantes. En la cuarta semana, la mayoría de los
0,005; Piridoxina 0,005; Tiamina 0,001; Glicina 0,02; Sacarosa 30000 y Agar Phytagel® 0.18 %, el pH ajustado a 5.8. Fueron añadidos los brotes generados a partír del ápice del vástago se habían diferenciado: tenían hojas grandes color verde-amarillo, con tallos y raíces delgadas
siguientes tratamientos separadamente con (mg.L-1): BA: 0,0; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0 y TDZ 0,0; 0,2; 0,4. Los ápices de vástagos de ambas de 1 a 3 por plántula. Por otro lado, el medio control los explantes de Z. elliothiana después de la tercera semana se observó 1 brote/explante,
variedades de Zantedeschia, esterilizados superficialmente con NaClO al 2%, fueron cultivados en los medios respectivos e incubados en bien desarrollado con hojas grandes verde oscuro, tallo robusto y hasta 6 raíces largas.
oscuridad por 48 horas, transferidos luego a luz contínua de 1800 lux y 26 ± 2°C. A las 4 semanas los resultados obtenidos fueron: En el medio
con BA 5,0 mg.L-1, Z. elliottiana generó 289 brotes/explante y en aquellos con TDZ 0,4 mg.L-1 se produjeron 90 brotes/explante. Por otro TABLA 2. Comparación de los efectos hormonales del CONTROL, con 6-BENZIL-AMINOPURINA (BA) y el 1-PHENYL-3-(1,2,3-
lado, Z. aethiopica en BA 5,0 mg.L-1 produjo 238 brotes/explante y en TDZ 0,4 mg.L-1 se generaron 88 brotes/explante. Estos brotes fueron THIADIAZOL-5-YL)-UREA (TDZ), en la proliferación de brotes/explantes de Z. aethiopica.
subcultivados en MS inicial, libres de hormonas durante 4 semanas más, allí se alargaron, produjeron raíces espontáneas robustas y largas en un
90% en la variedad Z. elliottiana y 95% con Z. aethiopica. En los controles no hubo regeneración en ninguna de las variedades, se alargó el
ápice del vástago y originó, en cada caso una plántula con raíz. Las plántulas enraizadas in vitro se trasvasaron a bandejas comunitarias con BA mg L-1 TDZ mg L-1
fibra de coco molida, perlita y tierra negra, en proporciones 2:1:1; fueron colocadas en una cámara húmeda por 3 semanas, su aclimatización
Brotes en TDZ 0,4 Brotes en BA 5,0 CONTROL
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
final se realizó en el invernadero y después de 6 semanas fueron llevadas al campo donde crecieron y produjeron flores iguales al de las plantas Semanas 0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 0,2 0,4
madres. -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Palabras clave: Calalili, micropropagación, ápices, vástago, BA, TDZ. 1 0 46 51 62 81 88 28 47
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
INTRODUCCIÓN 2 2 57 83 93 112 123 39 51
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
La Zantedeschia pertenece a la familia de las Araceae, comúnmente conocida como calalili, es oriunda de África. Una de las especies mas
3 2 73 100 113 150 162 53 72
conocidas, es la Z. aethiopica de color blanco, flor nacional de Etiopía, frecuentemente cultivada en las regiones tropicales templadas de
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
América por sus vistosas flores blancas y fragantes. Además existen otras seis especies de Zantedeschia en Sur África con flores de colores 4 2 93 125 171 204 238 68 88
variados: rosa, crema, amarillo y marrón; también otras variedades muy populares y una multitud de híbridos disponibles las cuales son
utilizadas como flores de corte. En algunas regiones de América son conocidas con el nombre de cartucho.
En Venezuela son común verlas propagadas en las zonas altas de los Andes, por ejemplo: en Bailadores, en el Estado Mérida y Boconó, en el En las etapas de propagación con BA y TDZ, se encontraron diferencias entre las dosis utilizadas en los explantes cultivados de Z. aethiopica
Estado Trujillo. ver (Tabla 2). En los tratamientos con BA 1,0; 2,0 y 3,0 mg.L-1, se indujo durante los 30 días 93; 125 y 171 brotes/explante,
La propagación del género Zantedeschia se realiza a través de germinación de semillas, mediante divisiones del tallo o rizoma produciendo respectivamente. Después de la cuarta semana, algunos de estos brotes inducidos en estas concentraciones se habían diferenciado y
cientos de plantines por métodos convencionales. Sin embargo, los cultivos con división de tubérculos están sujetos a la pudrición blanda de presentaban hojas pequeñas muy verdes, con tallos robustos y raíces muy cortas de 1 a 3 por plántula. En cambio con las concentraciones de
Erwinia, la cual causa serias perdidas (Chen, Liu. & Ho., 2000). Este género es muy susceptible a esta bacteria, que puede causar perdidas de BA 4,0 y 5,0 mg.L-1, se obtuvo una regeneración de 204 y 238 brotes/explante, respectivamente. Después de la cuarta semana, la proliferación
hasta el 100% en la plantación (Etcheverria., 2002). Se necesitan técnicas de micropropagación para la multiplicación masiva de la especie, de los brotes regenerados a estas concentraciones no se habían diferenciado. Por otro lado, con TDZ 0,2 mg.L-1, se formaron durante las
por su importancia comercial y su facilidad para propagarse por cultivos in vitro, obteniéndose plantas homogéneas y libres de enfermedades. cuatro semanas 68 brotes/explante y con TDZ 0,4 mg.L-1, un total de 88 brotes/explantes. En la cuarta semana, la mayoría de los brotes se
Unas de las dificultades que tienen los floricultores en Venezuela es la multiplicación de los plantines, la cual depende de las importaciones, Brotes en TDZ 0,4 Brotes en BA 5,0 habían diferenciado, tenían hojas grandes color verde, con tallos y raíces delgadas de 2 a 3 por plántula. En el medio nutritivo sin reguladores
tanto de Colombia como de Holanda, la compra de los plantines se hace costosa para los productores de flores. Por tales razones, se han de crecimiento los explantes de Z. aethiopica, después de la segunda semana se observaron 2 brote/explante y a la cuarta semana ya se habían
iniciado varios ensayos con el fin de micropropagar dos variedades de calas: Z. elliottiana y Z. aethiopica. Para el establecimiento de los diferenciados estos brotes con hojas grandes verde oscuro, tallo delgado y hasta 8 raíces largas.
ensayos y usando ápice del vástago como explante se trató de determinar: el protocolo para su esterilización, relaciones entre los agentes Por otro lado, investigadores como (Arth, Simpson, Seelye & Jameson., 2002) utilizando diferentes híbridos comerciales como:
inductores de la multiplicación, el enraizamiento, endurecimiento y su aclimatización en condiciones de invernadero. Butterscotch, Chianti, Sunglow, Treasure y Florex Gold de Zantedeschia, en MS (1962), las mejores concentraciones para las variedades
fueron con BA 13.3 µM (concentración máxima), durante las cuatro semanas, en el cultivo la variedad Chianti fue la que formó 78
brotes/explante y la variedad Butterscotch con BA 5 µM obtuvo una regeneración de 142 brotes/explante y con BA 1.3 µM (concentración
MATERIALES Y MÉTODOS
mínima), en el cultivo después de las cuatro semanas la variedad Florex Gold se formaron 88 brotes/explante. En ninguna de las variedades le
Esterilización de los bulbos:
añadieron al medio nutritivo auxina, el enraizamiento fue espontáneo. Chan, Chakrabarty, Hahn & Paek., 2003 micropropagaron Zantedeschia
Se lavaron con abundante agua del grifo, jabón concentrado y un cepillo para eliminar restos de tierra.
albomaculata usando como explante brotes, en MS con BA 8.87µM y TDZ 4.54 µM, separadamente, obteniendo un coeficiente de
Luego se asperjaron con fungicida Amistar 0,25 g.L-1 los bulbos de las dos variedades y se dejaron secando en la estufa a unos 40°C con el
multiplicación de 3.8 y 3.2 brotes/explante respectivamente. Sin embargo (Sánchez, Daquinta y Capote., 2010) multiplicaron tres variedades
fungicida, por dos días.
de calas estas calas,empleando el Sistema de Inmersión Temporal, en MS más BA 2 mg.L-1 y después de cuatro semanas sulcultivaron los
Se sumergieron los bulbos en solución acuosa con Cefotaxima 1 mg.L-1, por dos días y agitación contínua en el agitador orbicular a 100 rpm.
brotes de cala en diferentes concentraciones de BA. Con la variedad Treasure en BA 4 mg.L-1, el coeficiente de multiplicación fue de 7.93
en oscuridad continua
brotes/explante, en Golden Mair con BA 2 mg.L-1, la multiplicación fue de 10.66 y con la variedad Magister Red en BA 1 mg.L-1, fue de 11.30
Posteriormente se sumergieron en Hipoclorito de Sodio al 2% por 20 min y agitación continua, se lavaron con agua destilada estéril.
brotes/explante.
Luego se asperjaron con alcohol isopropilíco al 70% y aclareos con agua destilada estéril en intervalos de 5, 15 y 20 min, manteniendo los
Otras investigaciones, utilizando como explantes ápice del vástago en regeneración de jengibre Zingiber officinale, en MS (1962)
bulbos inmersos hasta el momento de la disección.
suplementado con vitaminas B5 y concentración de BA 5,0 mg.L-1, obtuvieron en la cuarta semana 92 brotes/explante correspondiente a un
Las porciones de los ápices del vástago se cortaron a 1 cm de longitud y se cultivaron en un medio nutritivo MS.
98% de regeneración, ausencia de callos (Contreras y Almeida., 2002).
Componentes del Medio Nutritivo MS (1962) completo para los bulbos de calalili suplementado con: (mg.L-1) Myo-inositol 100; Acido
En ninguna de las dos variedades de Z. elliottiana y Z. aethiopica, y con las diferentes concentraciones de BA y TDZ utilizadas
Nicotínico 0,005; Piridoxina 0,005; Tiamina 0,001; Glicina 0,02; Sacarosa 30000 y Agar Phytagel® 0.18 %, el pH ajustado a 5.8. Fueron
separadamente, no se observó en ningún momento deformación de los brotes ni vitrificación y no se formaron callos. De las dos variedades la
añadidos los siguientes tratamientos separadamente con (mg.L-1): BA solo: 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0 y TDZ solo: 0,2; 0,4 y un medio control a
razón de 10ml por tubo. Los ápices del vástago fueron cultivados 20 (explantes) por tratamiento en los medios respectivos e incubados en Brotes en TDZ 0,4 Brotes en BA 5,0 respuesta morfogénica fue mejor en Z. elliottiana que en Z. aethiopica, por el número total de brotes/explante regenerados al final de la cuarta
semana. Pero no se observaron diferencias en cuanto al comportamiento del desarrollo y crecimiento de los brotes ya diferenciados. Las dos
oscuridad por 48 horas, transferidos luego a luz contínua de 1800 lux y 26 ± 2°C. Después de 4 semanas estos brotes fueron subcultivados en
variedades que se cultivaron muestran buena repuesta en la fase de multiplicación in vitro obteniéndose buenos resultados en la proliferación
MS inicial, libres de hormonas durante 4 semanas más. Las plántulas enraizadas in vitro se trasvasaron a bandejas comunitarias con fibra de
de brotes utilizando ápice de vástago como órgano donador.
coco molida, perlita y tierra negra, en proporciones 2:1:1; fueron colocadas en una cámara húmeda por 3 semanas, su aclimatización final se
Cuando se subcultivaron en un medio MS (1962) igual al anterior, pero sin la adición de hormonas y al separar los brotes dejándolos por
realizó en el invernadero y después de 6 semanas fueron llevadas al campo donde crecieron y produjeron flores iguales al de las plantas
cuatro semanas más, la diferenciación de los brotes se produjo en un 100% en plantines, comenzaron a desarrollarse hojas y alargarse los
madres.
tallos de estos brotes, formando raíces robustas y largas sin la adición de auxinas. En Z. elliottiana, se expresó en un 90% el enraizamiento y
con Z. aethiopica en un 95% la proliferación de raíces.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN Las plántulas enraizadas in vitro se trasvasaron a ex vitro en bandejas comunitarias con sustratos esterilizados, compuesto de fibra de coco
En la desinfección de los ápices de vástagos de las calalilis cultivadas, la contaminación con bacterias no superó el 12%, por hongos el 4% y molida, perlita y tierra negra, en proporciones 2:1:1; posteriormente se colocaron en una cámara húmeda por 3 semanas, aplicándoseles
por oxidación el 3% de los explantes cultivados. Muchas especies bulbosas presentan en el interior de su bulbo, mucílagos y bacterias que solución nutritiva triple 20-20-20, razón de 2 mg.L-1 una vez por semana, la temperatura promedio fue de 24 ± 2°C en el día y en la noche
dificultan el establecimiento in vitro en condiciones asépticas (Hol & Linde. 1992; Chang. 2003; Sochacki & Orlikowska. 2004. Citado por 20 ± 2°C, y la humedad relativa fue en un 70%, la sobrevivencia en esta tres semanas fue de un 92 % en Z. elliottiana y 94 % en Z.
Vargas. Oropeza. y García., 2006). La marchitez bacteriana causada por Erwinia carotovosa es la principal enfermedad que ataca a las aethiopica, todos los plantines provenientes de los diferenrentes tratamientos de BA y TDZ respondieron bien al trasplante. Su aclimatización
plantas del género Zantedeschia (Kuehny. 2000; Wright & Burge., 2000). La pudrición blanda bacteriana causada por E. carotovosa es la final se realizó en el invernadero, después de 6 semanas fueron llevadas al campo donde crecieron y produjeron flores las plantas mostraron
enfermedad más importante de las calas y es uno de los principales factores que afecta la viabilidad comercial de este cultivo (Funell., 1998. características fenotípicas normales e idénticas a las plantas madres.
Citado por Wright., 2005). La micropropagación es la mejor opción para obtener material sano y vigoroso libre de bacterias, hongos y virus. Sin embargo, las plántulas
obtenidas in vitro deben ser endurecidas y los bulbos desarrollados durante dos periodos consecutivos de siembra en suelo, antes de que el
TABLA 1. Comparación de los efectos hormonales del CONTROL, con 6-BENZIL-AMINOPURINA (BA) y 1-PHENYL-3-(1,2,3- bulbo alcance el tamaño mínimo que pueda proveer tallos comerciales (Gómez., 2009).
THIADIAZOL-5-YL)-UREA (TDZ), en la generación de brotes/explantes de la Z. elliothiana.
GENERACION DE BROTES DE CALALILI A DIFERENTES CONCENTRACIONES (mg.L-1 )
CONTROL BA mg L-1 TDZ mg L-1
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Semanas 0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 0,2 0,4
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
1 0 51 57 72 81 90 32 56
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
2 0 62 66 87 93 182 55 62
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ Plántula de BA 5,0
3 1 83 79 112 175 220 68 73
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
4 1 110 130 180 223 289 72 90
CONTROL TDZ 0,2 TDZ 0,4 BA 1,0 BA 2,0 BA 3,0 BA 4,0 BA 5,0

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
ARTH. S., SIMPSON. S., SEELYE. J. & JAMESON. P., 2002. Bushiness and cytokinin sensitivity in micropropagated Zantedeschia. Plant Cell. Tiss. Org. Cult. 70: 113 -118. 2002. KUEHNY. S., 2000. Calla history and culture. Horttechnology. Vol. 10: 267 – 274.
CHANG. H., CHAKRABARTY. D., HAHN. E. & PAEK. K., 2003. Micropropagaction of Calla Lily (Zantedeschia albomaculata) via in vitro shoot tip proliferation. In vitro Cell. Dev. Biol. – Plant. Vol. 36: 129 -134. MURASHIGE. T. & F. SKOOG., 1962. A revised medium for rapid growth and biossays with tobacoo tissue culture. Physiol. Plant. 15: 473 - 497.
CHEN. J., LIU. M. & HO. Y., 2000. Size on in vitro plantlets affects subsequent tuber production of acclimatized cala lily. HortScience. 35(2): 290 – 292. SÁNCHEZ. J., DAQUINTA. M. y CAPOTE. I., 2010. Multiplicación in vitro de brotes de tres variedades de Callas (Zantedeschia sp) empleando Sistema de Inmersión Temporal. Laboratorio de Células y Cultivo Tejidos, Centro de Bioplantas, Universidad de Ciego de Ávila, Cuba.
CONTRERAS. I. y ALMEIDA. J., 2002. Micropropagación clonal de jengibre (Zingiber officinale Roscoe), a partir de ápices del vástago. LII Convencion Anual ASOVAC 2002, Barquisimeto, Acta Científica Venezolana: 53 (Sup. 1) 64 p. Revista Ciencia y Tecnología 3(1): 1-5.
ETCHEVERRIA. P., 2002. Efecto de la densidad de sombra y del mulch en la producción y calidad de flores y túberos de Zantedeschia híbrida cv. Mango. Tesis Ingeniero Agrónomo, Universidad de la Frontera. Temuco, Araucanía, Chile. 67 p. VARGAS. T., OROPEZA. M. y GARCIA. E., 2006. Micropropagation of Hippeastrum sp. Agronomía Tropical, Vol. 56(4): 622 – 626.
GOMÉZ. S. P., 2009. Absorsión de nutrientes de Z. elliothiana (Cala lily) en diferentes estados fenológicos como punto de partida para la determinación de requerimientos nutricionales del cultivo en condiciones del eje cafetero colombiano. Universidad de Colombia, Sede Palmira, Escuela WRIGTH. J. & BURGE. K., 2000. Irrigation, saw dust mulch, and Enhance® biocide affects soft rot inciden, and flower and tuber production of Cala. New Zealand, Journal of Crop Horticultural Science, Vol. 28: 225 – 231.
de postgrado. Maestría en Ciencias Agropecuarias énfasis: suelo. 24 p. WRIGTH. J., TRIGGS. M. & BURGE. K., 2005. Control of bacterial soft rot of Cala Zantedeschia sp. by pathogen exclusion, elimination and removal. New Zealand, Journal of Crop and Horticultural Science, Vol. 33: 117 – 123.