INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL.

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIA BIOLÓGICAS.

DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA BIOQUÍMICA
ACADEMIA DE FERMENTACIONES.

LABORATORIO DE​ INGENIERÍA DE FERMENTACIONES.

“REDUCCIÓN DE ÁCIDOS NUCLÉICOS EN LA PRODUCCIÓN DE

PROTEÍNA UNICELULAR POR TRATAMIENTO
TÉRMICO/ALCALINO”

EQUIPO: ​3​, GRUPO: ​9IM1​:

PROFESORES:
Dra. Cleotilde Juárez Ramírez
Dr. Oswaldo Ramos Monroy
Dra. Angélica María Salmerón Alcocer

INTEGRANTES DEL EQUIPO:

Acosta Del Rey Ana Sofia
Bautista Hernández Rubén
Cosio Chávez Nataly Ivon
Jandete Martínez Erik Emmanuel
López Romero Diana Paola
Olvera Flores Ivan De Jesus
Serrano Pinzón Erika
OBJETIVO GENERAL:

Reducir el contenido de ácidos nucleicos presentes en levadura en barra (​Saccharomyces

cerevisiae)​ ; m
​ ediante tratamiento alcalino térmico.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

● Evaluar el efecto que tiene la concentración del álcali del tratamiento (NaOH) a 60°C
durante 5 minutos; en la concentración de ácidos nucleicos (RNA) y proteínas de ​S​.
cerevisiae​.
● Determinar el contenido de RNA mediante el método del orcinol en muestras tratadas
con diferentes concentraciones de NaOH (0, 2, 4 y 6%) y una muestra control sin
tratamiento térmico.
● Determinar el contenido de proteína mediante el método de Biuret en muestras
tratadas con diferentes concentraciones de NaOH (0, 2, 4 y 6%) y una muestra control
sin tratamiento térmico.
● Encontrar la mejor concentración de NaOH que reduzca lo más posible la
concentración de RNA pero que mantenga la mayor concentración de proteína.

RESULTADOS

Cuadro 1. Concentración celular empleada.

Absorbancia [g/L]
0.44 92.4

Cuadro 2. Porcentaje de proteína después del tratamiento térmico.

Muestra Abs​500nm [mg/mL] % % pérdida
0 0.384 32.268 34.9 13.51
2 0.354 29.747 32.1 20.27
4 0.306 25.714 27.8 31.08
6 0.284 23.865 25.8 36.04
Control 0.444 37.310 40.3 0.00
Albúmina 0.119 5 -

Donde la concentración de proteína se obtuvo mediante la siguiente ecuación

Asx Vc
[P roteína] = Asc x Cc x dil x Vx

mg
Cálculo para la concentración de proteína en mL ​del control

1
 0.444 mg 500 mg
[P roteína] = 0.119 x 5 mL x 250 = 37.310 mL

El % se obtuvo mediante la relación

[P roteína] x 100
%= Concentración celular

mg
En donde la concentración celular tiene un valor de 92.4 mL

Cálculo para la muestra control:

(37.310 mg/mL)(100)
%= 92.4 mg/mL = 40.3%

El % de pérdida se obtiene mediante la siguiente ecuación

[P roteína de la muestra control] − [P roteína de la muestra tratada con N aOH]

% pérdida = [P roteína de la muestra control] x100

Cálculo para la muestra tratada con NaOH al 2%

37.310 mg/mL − 29.747 mg/mL

% pérdida = 37.310 mg/mL x100 = 20.27%

Cuadro 3. Porcentaje de RNA después del tratamiento térmico.

Muestra Abs 600 nm [mg/mL] % % Pérdida
0 1.197 21.375 23.133 -
2 0.577 10.303 11.151 35.674
4 0.503 8.982 9.720 43.924
6 0.213 3.803 4.116 76.254
Control 0.897 16.017 17.335 -
RNA 0.14 0.5 - -

2
Figura 1: Reducción porcentual de proteína y RNA en función de la concentración de NaOH.

DISCUSIÓN
El principal valor de la biomasa microbiana es su aporte de proteína, se denomina proteína
unicelular (PUC) a aquella obtenida de la biomasa microbiana de algas, bacterias, levaduras
y hongos filamentosos, que son cultivados en condiciones fermentativas apropiadas y
controladas, las cuales garantizan una adecuada velocidad de crecimiento, por medio del
aprovechamiento de sustratos compuestos por o enriquecidos con carbono, nitrógeno y
fósforo (Chacón Villalobos, 2004).

Se utiliza para elaborar concentrados para la alimentación animal, específicamente en la

formulación de alimentos balanceados para aves y cerdos. En cuanto a alimentos para
consumo humano, funciona como fuente de proteínas, saborizante, potenciador de sabor y
fuente de aromas y vitaminas (Hernández, 2003).

La composición de la biomasa producida por levaduras varía según la especie, pero

generalmente tiene un alto porcentaje de lisina y baja cantidad de aminoácidos azufrados;
nutricionalmente es importante por el contenido de ácidos grasos insaturados (oleico y

3
linoleico), de esteroles y vitaminas (complejo B); sin embargo, el alto contenido de ácidos
nucleicos (6-10% en levadura) limita su consumo frecuente en la alimentación humana
debido a que incrementa los niveles de ácido úrico en sangre y con esto promueve el
desarrollo de gota y/o su cristalización en el riñón (Leveau, Bovix, 2000; Reyes-Bautista et.
al., 2007).

En esta práctica se trabajó con PUC de levadura ​S.​ ​cerevisiae,​ a la cual se le aplicó el
método de hidrólisis alcalina para la reducción del contenido de ácidos nucleicos. El método
de hidrólisis alcalina no es un método específico, debido a que también afecta estructuras
celulares, entre ellas como desventaja a las proteínas (reduciendo su valor nutricional), sin
embargo, para que esto suceda aparte de la acción del NaOH, una elevación de temperatura
durante el tratamiento es necesario. Aunque en comparación con otros métodos; como la
manipulación fisiológica de la levadura, tratamientos enzimáticos ya sea endógenos o
exógenos, este método aumenta la digestibilidad de la proteína al debilitar el peptidoglicano
propio de las bacterias y pared celular de levaduras. Entonces con este método existe el
beneficio de reducir el RNA pero la desventaja de hidrolizar proteínas, por lo que en esta
práctica se evaluaron diferentes concentraciones de NaOH para ver el efecto que este tiene
sobre lo antes mencionado.

El cuadro 2 muestra la concentración de proteína determinada en las diferentes muestras, se

observa que conforme aumenta la concentración de NaOH disminuye la concentración de
proteína, la muestra control sin NaOH ni tratamiento térmico fue la muestra que mostró
mayor contenido de proteína, lo cual era de esperarse debido a que la proteína no se
hidroliza por acción del NaOH, la muestra sin NaOH pero con tratamiento térmico también
mostró más proteína pero menos que la anterior (control), lo que quiere decir que también el
tratamiento térmico provoca la hidrólisis de las proteínas.

En cuanto al contenido de RNA, se observa en el cuadro 3 que la muestra sin NaOH con
tratamiento térmico es la que presenta mayor contenido de RNA, se esperaba esto debido a
que al no tener NaOH no se está hidrolizando el RNA a comparación de los otros que si se
les agregó NaOH, se observa que al aumentar la concentración del álcali la hidrólisis neta de
RNA aumenta. Al igual que en el caso de las proteínas, el tratamiento térmico también influye
sobre la hidrólisis del RNA debido a que en la muestra control se observó una ligera
disminución en el contenido de este.

Como puede observarse en la gráfica de la figura 1, al aumentar la concentración de NaOH

aumenta la reducción de RNA y disminuye el contenido de proteínas, lo cual era un resultado
esperado ya que al aumentar la concentración de NaOH se hidroliza mayor parte del RNA al
igual que las proteínas. Por lo que PUC tratada con álcali a mayores concentraciones y
temperaturas, puede ser ingerida en mayores cantidades con respecto a la recomendada por
Edozien y col. (1970) que es de 20-30 g de levadura por día.

4
CONCLUSIONES
● Para la reducción óptima del contenido de ARN, el tratamiento con una mayor
concentración de álcali y a mayor temperatura reduce cantidades progresivamente
mayores de ácidos nucleicos, aunque como límite a esto se debe de considerar la
reducción en contenido de proteína.
● Se logró una reducción significativa (35.674 %) del contenido de ARN en la PUC de
Saccharomyces cerevisiae ​con la menor pérdida de proteína (13.51 %).
● Como en cualquier proceso, la producción y el consumo de PUC tienen una serie de
ventajas como alto valor nutritivo, tiempos cortos de duplicación, independencia de las
condiciones ambientales, amplia capacidad de degradación de sustratos y
mejoramiento genético; y desventajas como alto contenido de ácidos nucleicos, costo
de producción y digestión lenta o nula de la pared celular.

BIBLIOGRAFÍA
● Chacón Villalobos, A. (2004). Perspectivas actuales de la proteína unicelular (SCP) en
la agricultura y la industria. A​gronomía Mesoamericana, 15(1): 93-106​.
● Edozien, J.C., U.U. Udo, V.R. Young & N.S. Scrimshaw. 1970. Effects of high levels of
yeast feeding on uric acid metabolism of young men. ​Nature​. 228:180-191.
● Hernández, A. (2003). ​Microbiología Industrial.​ Editorial Universidad Estatal a
Distancia.
● Leveau, J., Bovix, M. (2000). ​Los microorganismos de interés industrial. Acribia.
Zaragoza. España. 608 pp.
● Otero, A. M., A. Cacello. (1980). Single cell protein low in nucleic acids by alkaline
treatment. ​Biotechnol. Letters. 2 ​ 8:379-389.
● Reyes-Bautista, R., Soriano-Santos, J., Guerrero-Legarreta, I., Román-Ramos, R.
(2007). ​Reducción de ARN de Saccharomyces cerevisiae para el aislamiento del
factor de tolerancia a la glucosa.​ México: Universidad Autónoma Metropolitana.