Determinación de punto Resultados y discusión de resultados.
isoeléctrico de proteínas Salting-out
Introducción Todas las macromoléculas de la naturaleza, adquieren una carga al disociarse en agua. En el caso de los péptidos y de las proteínas, la carga total, depende enteramente del pH del medio. Tubo de filtrado positivo en Biuret con NaOH; Tubo Cualquier proteína tendrá una carga de filtrado positivo en Biuret con (NH4)2SO4 positiva si se encuentra disuelta en un medio ácido, esto debido a que los grupos carboxilo (-COO-), se encontrarán en su En el primer experimento, se llevó acabo la forma neutra (COOH), mientras que los precipitación de las proteínas de la clara de grupos amino, estarán protonados (-NH3+). huevo, empleando el método de Salting out, el cual consiste en aumentar la De igual manera, si la proteína se concentración de iones progresivamente, encuentra en un medio básico, esta se haciendo que estos interactúen con las encontrará con una carga negativa como moléculas de agua que rodean la proteína resultado de la presencia de los grupos para que estas se unan entre sí y, de esta carboxilo desprotonados (-COO-) y los manera, dejar a la proteína sin interactuar grupos amino tendrán una carga neutra (- con el disolvente que, en este caso es agua. NH2). Con esta información, se puede saber Para que de esta manera pueda precipitar la que hay un pH específico en el cual, la carga proteína. de las proteínas es igual a cero, este se denomina pI o punto isoeléctrico. Precipitación por efecto de solventes. En este punto, al tener un equilibrio en las cargas tanto positivas como negativas, la proteína deja de interaccionar con el medio en el que se encuentra y, por ende, se encuentra en su máxima posibilidad de ser precipitada. Precipitación por efecto de solventes. Tubo 1 HCl, casi no precipita; Tubo 2 NaOH, se disolvió; Tubo 3 Regulador de acetatos, precipitó mucho. Objetivos ● Se analizó el efecto que produce la modificación de factores fisicoquímicos En el segundo experimento, se precipitaron sobre la solubilidad de las proteínas. las proteínas afectando la solubilidad de la misma por medio del disolvente en el que se ● Se determinó el punto isoeléctrico de encontraba el cual, era agua, al añadir la insulina, basándose en sus propiedades etanol al 96%, de esta manera, se disminuyó de solubilidad a diferentes valores de pH. la polaridad del disolvente y se aumenta la medio en el que se encuentra y de esta miscibilidad con etanol o acetona se manera, precipita. disminuye el grado de hidratación tanto de Conclusión los grupos amino como de los grupos carboxilo de la proteína y, de esta manera, Hay diferentes métodos para poder llevar a precipitan. cabo la precipitación de proteínas debido a las diversas propiedades que tienen estas moléculas, entre las cuales, podemos Precipitación por metales pesados remarcar la constante dieléctrica, sus grupos funcionales, y la manera en que se disocian en agua. Bibliografía Clar 2° 3° 1° 4° No se 5° a de torna precipit precipit precipita solubili precipit huev turbio a pero a a ligeramen za a poco Macarulla, J. & Goñi, F. (2002). o y deja nivel te blanc pasar de no Biomoléculas: lecciones de bioquímica o luz dejar luz estructural. Barcelona: Editorial Reverte. p. 115 Se observó una precipitación en la clara de Teijon, J. M. (2011). Bioquímica estructural: huevo en el momento en el cual se agregó conceptos y test. Madrid: Editorial Tébar. p. la solución que contenía metales pesado. 87 Cuando la proteína se encuentra con Rodríguez, V. (2008). Bases de la valores de pH superiores al punto alimentación humana. España: Editorial isoeléctrico está se disocia en una proteína Gesbiblo. p. 79 negativa la cual se combina con el ion metal positivo para un enlace entre el metal Lehninger, A. L. (1984). Bioquímica: Las pesado que tiene la posibilidad de crear bases moleculares de la estructura y función hasta cuatro enlaces con otros aminoácidos, celular. Barcelona: Ediciones Omega, S.A. p volviendo esta molécula insoluble en agua. 165-166 De igual manera, los iones negativos se combinan con las proteínas en forma positiva para formar sales de proteína. Determinación del punto isoeléctrico de la insulina En la determinación del punto isoeléctrico de la insulina se concluyó que su valor de pH donde muestra su mínimo de solubilidad es igual a 2.7, con a lo que se reporta en literatura, este resultado el punto donde la molécula no posee carga eléctrica. En este punto, la proteína deja de interactuar con el