BAB 1

PENDAHULUAN

1. Pengertian

KLT-KT dimaksudkan untuk mendapatkan pemisahan dan hasil

analisis yang lebih baik dibandingkan dengan KLT biasa. KLT-KT dapat
digunakan untuk analisis kuantitatif pada campuran yang mengandung
molekul besar kompleks.
2. Prinsip Teoritis

kromatografi lapis tipis kinerja tinggi (KLTKT) adalah bentuk KLT

yang canggih dan otomatis. KLTKT adalah yang tercepat dari semua
metode kromatografi. KLTKT dapat menganalisa sekitar 100 sampel
dari 5-10 jenis per shift. KLTKT adalah teknik visual dimana
"kromatogram" "terlihat". Ini memberi kami informasi tambahan dan
keyakinan akan hasilnya. Kromatogram tersebut adalah sampel
terpisah setelah kromatografi dapat diperiksa oleh mata hanya jika
terjadi KLTKT. semua sampel dapat diambil untuk analisis segera
setelah diterima oleh laboratorium. KLTKT tidak menyebabkan
kemacetan. Karena semua fraksi dipindai oleh detecror, termasuk yang
teradsorpsi ireversibel, 100% sampel hanya bertanggung jawab di
KLTKT. Contoh pembersihan tidak penting dalam KLTKT sebagai fase
diam yaitu lapisan sekali pakai. Contoh pembersihan adalah langkah
paling lambat, melelahkan, paling mahal dan rawan kesalahan dalam
kromatografi. Satu sistem KLTKT dapat menangani sampel yang
berbeda secara simultan. Perkiraan visual hasil KLT dapat
menimbulkan kontroversi dan karenanya estimasi dengan pemindaian
sangat penting. selain itu kromatogram terlihat pada 254 dan 366 nm
hanya saat pemindai menawarkan kisaran 190-800 nm. Sistem KLTKT
analitik juga berguna untuk pemisahan mikro preparatif, yaitu
pemisahan skala miligram untuk analisis fraksi, biasanya untuk
identifikasi. Setiap kombinasi alat tulis dan fase gerak dapat digunakan.
Fase alat tulis dan mobile baru untuk setiap analisis. KLTKT sangat
intensif data. Identifikasi fraksi positif oleh Rf, spektrum absorbansi dan
derivatisasipost-kromatografi adalah mungkin.
 BAB 2

Tinjauan Pustaka

2.1 Uraian

A. Uraian

a. Klasifikasi Tanaman (Integrated Taxonomic Information System,

2018):
Kingdom : Plantae
Subkingdom : Viridiplantae
Infrakingdom : Streptophyta
Superdivision : Embryophyta
Division : Tracheophyta
Subdivision : Spermathophyta
Class : Gnetopsida
Subclass : Gnetidae
Order : Ephedrales
Family : Gnetaceae
Genus : Gnetum L
Species : Gnetum gnemon L.
b. Morfologi Tanaman
Morfologi tumbuhan melinjo umumnya tumbuhan tingkat
tinggi, pohon melinjo juga dapat dibedakan atas akar, batang,
daun, dan bunga. Melinjo yang tumbuh dari biji bersistem
perakaran tunggang, seperti halnya tumbuhan Dicotyledone.
Batang melinjo berkayu dan bercabang. Tinggi pohon ini antara 5-
22 meter. Bentuk percabangannya sangat khas. Pohon melinjo
berdaun rimbun. Bunga melinjo membentuk kerucut dengan
karangan bunga melingkar (Tim Penulis PS, 1999)
c. Nama Lain
Sunda : ki tangkil, mlinjo, sake, tangkil
 Jawa : bagu, eso mlinjo, trangkil, wit grintul
Aceh : mulieng
Belitung : manenjo, maninjo
Makassar : bagu, poko, sumba
d. Kandungan Kimia (Arief, 2008)
Bahan kimia yang terkandung pada daun melinjo (Gnetum
gnemon L.) tanin, saponin dan flavonoid, sedangkan bijinya
mengandung tanin, saponin dan flavonoid.
e. Khasiat Tanaman (Arief, 2008)
Khasiat dari daun melinjo (Gnetum gnemon L.) yaitu peluruh
air kencing, mengobati luka gigitan anjing, mengobati penyakit
mata, anemia dan busung lapar.

B. Teori Umum

1. kromatografi Lapis Tipis Kinerja Tinggi (KLTKT)

Kromatografi Lapis Tipis Tingkat Tinggi (KLTKT) adalah bentuk
lanjutan Kromatografi Lapis Tipis (klt) yang paling kuat dan terdiri dari
lapisan kromatografi dengan efisiensi pemisahan terbaik dan
penerapan instrumentasi yang canggih untuk semua langkah dalam
prosedur ini mencakup aplikasi sampel yang akurat, standar
pengembangan kromatogram yang dapat direproduksi dan evaluasi
yang dikendalikan perangkat lunak. KLTKT adalah konsep yang
mencakup metodologi yang terstandarisasi berdasarkan fakta ilmiah
dan juga penggunaan metode yang divalidasi untuk analisis kualitatif
dan kuantitatif.KLTKT memenuhi semua persyaratan kualitas untuk
laboratorium analisis hari ini, untuk meningkatkan resolusi dan
memungkinkan pengukuran kuantitatif yang lebih akurat (Sonia K,
Beddi B.S, Dr.K.S.Lakshmi, 2017).
KLTKT adalahmetode analisis kualitatif yang sangat berguna.
menggabungkan seni darikromatografi dengan kecepatan dengan biaya
sedangmaju ke prinsip KLT memperpendek durasi waktu & lebih
baikresolusi. KLTKT memainkan peran penting di hari inidunia analitis,
tidak bersaing dengan HPLC tapi sepertimetode komplementer. Salah
satu yang paling jelasFitur ortogonal dari kedua teknik ini adalah
penggunaan utamafase terbalik pada HPLC versus silika gel yang tidak
dimodifikasi padaKLTKT, menghasilkan kromatografi partisi danmasing
kromatografi adsorpsi. Tidak seperti yang lainnyametode,KLTKT
menghasilkan kompleks kromatogram yang terlihatInformasi tentang
keseluruhan sampel tersedia sekilas.Beberapa sampel terlihat serentak,
jadi rujukan itudan sampel uji dapat dibandingkan untuk
identifikasi.Kesamaan dan perbedaan segera terlihat dandengan
bantuan perbandingan gambar. Beberapakromatogram dapat
dibandingkan secara langsung, bahkan dari yang berbedapiring. Selain
kromatogram yang terlihat, analogData puncak juga tersedia dari
kromatogram. Merekadapat dievaluasi baik oleh perangkat lunak
berbasis gambarVideo dapat atau dengan memindai densitometri
dengan klt Scanner,mengukur penyerapan dan / atau fluoresensizat di
piring klt adalah teknik offline:Langkah selanjutnya relatif independen,
memungkinkanperlakuan paralel beberapa sampel selamakromatografi
(Vikram. K, Priya. K, Akash. M, 2014).
Menggunakan pelat KLTKT yang menampilkan partikel kecil
dengan distribusi ukuran sempit yang menghasilkan lapisan homogen
dengan permukaan halus yang bisa diperoleh. KLTKT menggunakan
piring yang lebih kecil (10 × 10 atau 10 x 20 cm).Pelat memberikan
resolusi yang lebih baik, sensitivitas pendeteksian yang lebih tinggi, dan
peningkatan kuantifikasi situ dan digunakan untuk analisis kuantitatif
densitometrik industri farmasi (Sonia K, Beddi B.S, Dr.K.S.Lakshmi,
2017).
Fitur utama KLTKT (Vikram. K, Priya. K, Akash. M, 2014):
1. Simultan pengolahan sampel dan standar - lebih baikketepatan dan
akurasi analitis kurang dibutuhkan untuk InternalStandar.
2. Beberapa analis bekerja secara simultan.
 3. Turunkan waktu analisis dan sedikit biaya per analisis.
4. Biaya perawatan rendah.
5. Persiapan sampel sederhana - menangani sampel yang
berbedaalam.
6. Tidak ada perlakuan sebelumnya untuk pelarut seperti filtrasi
dandegassing
7. Konsumsi fase mobile rendah per sampel
8. Tidak ada gangguan dari analisis sebelumnya - stasioner segardan
fase bergerak untuk setiap analisis - tidak ada kontaminasi.
9. Deteksi visual mungkin - sistem terbuka
2.2 GambarKLTKT
Man Mohan (Srivastav, 2011)
1. Fase stasioner
KLTKT dapat dianggap sebagai bentuk klt modern yang
paling maju. Menggunakan KLTKT piring yang menampilkan
partikel kecil dengan distribusi ukuran yang sempit. Akibatnya,
homogen Lapisan dengan permukaan halus bisa didapat.
Penggunaan KLTKTlebih kecil pelat (10 10 atau 10 20 cm) dengan
jarak pengembangan menurun secara signifikan (biasanya 6 cm)
dan waktu analisis (7-20 menit). Pelat KLTKTmemberikan
perbaikan resolusi, sensitivitas pendeteksian yang lebih tinggi, dan
peningkatan kuantifikasi situ dan digunakan untuk analisis
kuantitatif densitometrik industri farmasi. Normal fase adsorpsi KLT
pada silika gel dengan fasa gerak yang kurang polar, seperti
kloroform- metanol, telah digunakan untuk lebih dari 90% analisis
obat-obatan yang dilaporkan dan obat-obatan. Lipophilic C-18, C-8,
C-2; silika yang dimodifikasi secara kimiawi fenil fase gel; dan pelat
gel silika yang diresapi hidrokarbon dikembangkan dengan lebih
banyak fasa gerak berair kutub, seperti air metanol atau dioksan-
air, digunakan untuk fase terbalik KLT. Lapisan precoated lainnya
yang digunakan meliputi aluminium oksida, magnesium silikat,
magnesium oksida, poliamida, selulosa, kieselguhr, ion exchanger,
dan lapisan silika gel polar yang dimodifikasi yang mengandung
amino berikat, siano, diol, dan tiol. Pemisahan isomer optik yang
dilakukan pada lapisan kiral dihasilkan dari silika gel modifikasi C-
18 yang diresapi dengan garam Cu (II) dan a turunan hidroksiprolin
murni enantiomer murni secara optik, pada lapisan silika diresapi
dengan selektif kiral seperti brucine, yang tercetak molekular
polimer a-agonis, atau pada selulosa dengan fase gerak yang
memiliki penambahan kiral Selektor seperti siklodekstrin telah
dilaporkan sebagian besar untuk asam amino dan asam amino
 derivatif. Campuran sorbents telah digunakan untuk menyiapkan
lapisan dengan khusus sifat selektivitas. Pelat KLTKT harus
disimpan dalam kondisi yang sesuai. Sebelum digunakan, piring
harus diperiksa di bawah sinar putih dan UV untuk mendeteksi
kerusakan dan kotoran dalam adsorben. Dianjurkan untuk
memulangkan piring untuk memperbaiki reproduktifitas dan
ketangguhan hasil.
2. Lapisan Mencuci
Pelat umumnya ditangani hanya di tepi atas untuk
menghindari kontaminasi. BiasanyaPelat digunakan tanpa
pretreatment kecuali kromatografi menghasilkan kotoranBagian
depan karena kontaminasi pelat. Untuk studi reproduktifitas dan
kuantitatifAnalisis, lapisan sering dicuci dengan metanol 20 ml
(umumnya, metanol adalahdigunakan sebagai pelarut prewashing;
Namun, campuran metanol dan etil asetat ataubahkan fase gerak
dari metode ini juga dapat digunakan) per palung dalam 20 10
cmtwin-palung (TTC). Sampai dua 20 10 cm atau empat 10 10 cm
piring bisadikembangkan back-to-back di setiap palung TTC.
Lepaskan piring dan keringkanselama 20 menit dalam oven
pengeringan bersih pada suhu 120 C. Lengkapi pelat dengan
laboratoriumatmosfer (suhu, kelembaban relatif) dalam wadah yang
sesuaiperlindungan dari debu dan asap.
3. Fase Mobile
Pemilihan fase gerak didasarkan pada bahan adsorben yang
digunakan sebagai alat tulisfasa dan sifat fisik dan kimia analit.
Fase gerak umumSistem yang digunakan berdasarkan sifat
selektivitasnya beragam adalah dietileter, metilen klorida, dan
kloroform yang digabungkan secara terpisah atau bersamaheksana
sebagai pelengkap penyesuaian kekuatan untuk fase normal TLC
dan metanol,asetonitril, dan tetrahidrofuran dicampur dengan air
untuk penyesuaian kekuatanfase terbalik TLC. Pemisahan dengan
 pemasangan ion pada lapisan C-18 dilakukan dengan a Fasa gerak
seperti buffer metanol-0,1 M asetat (pH 3,5) mengandung 25
mMnatrium pentanesulfonat (15.5: 4.5). Pengukuran volumetrik
yang akurat dariKomponen fase gerak harus dilakukan secara
terpisah dan tepat digelas volumetrik yang memadai dan
terguncang untuk memastikan pencampuran konten dengan
benar.Volume lebih kecil dari 1 ml diukur dengan micropipette yang
sesuai. Volume naiksampai 20 ml diukur dengan pipet volumetrik
lulus dengan ukuran yang sesuai. Volumelebih besar dari 20 ml
diukur dengan silinder lulus dengan ukuran yang sesuai.
Untukmeminimalkan kesalahan volume, mengembangkan pelarut
disiapkan dalam volume yangcukup untuk satu hari kerja.
4. Persiapan dan Aplikasi
Sampel Persiapan sampel yang tepat merupakan prasyarat
penting bagi KLTKT yang sukses pemisahan. Jika konsentrasi
analit cukup tinggi, dosis farmasi bentuk seringkali bisa dilarutkan
dalam pelarut yang benar-benar akan melarutkannya analit dan
meninggalkan eksipien atau senyawa asing yang tidak terlarut
untuk menghasilkan tes solusi yang bisa langsung terlihat untuk
analisis KLTKT. Persiapan sampel adalah tidak menuntut seperti
teknik kromatografi lainnya. Namun, beberapa langkah mungkin
diperlukan seperti penggilingan, sonikasi, filtrasi, ekstraksi,
sentrifugasi, dan prosedur konsentrasi jika konsentrasi analit
rendah ada dalam sampel. Karena lapisan tidak digunakan kembali,
seringkali memungkinkan untuk menerapkan sampel yang lebih
lunak. Pelarut untuk melarutkan sampel harus nonpolar dan mudah
menguap (yaitu, metanol, etanol, atau khloroform).
Instrumen otomatis tersedia untuk aplikasi contoh;
khususnya untukKLTKT kuantitatif, gunakan sampel dengan teknik
spray-on dengan AutomaticTLC sampler (ATS) 4 atau Linomat 5.
Dalam hal aplikasi spot dengan kontak, gunakanNanomat atau ATS
 4 dan larutkan sampel dalam pelarut yang paling rendah
sesuaikekuatan pelarut. Contoh aplikasi berupa pita sempit
memberikanresolusi tertinggi dan sensitivitas yang dapat dicapai
dengan pemisahan kromatografi yang diberikanmetode; Namun,
penyebaran sampel band selama aplikasi harus dilakukansekecil
mungkin. Sampel biasanya terkandung dalam semprit,
yaitudikosongkan oleh motor. Kecepatan pengiriman dan volume
dikontrol secara elektronik.Aliran gas inert seperti nitrogen di sekitar
ujung jarum suntik yang tertekansampel dan buat sebuah band
pada pelat KLT / KLTKT jika salah satu semprit atauPelat bergerak
secara linier.
5. Pengembangan Chromatogram
Meskipun pengembangan kromatogram merupakan langkah
yang paling menentukan dalam prosedur KLT,Parameter penting
seringkali tidak diberi perhatian yang patut mereka dapatkan.
Pemisahanyang diperoleh di KLTKT dipengaruhi oleh fase uap,
yang tergantung pada jenisnya,ukuran, dan kondisi saturasi ruang
selama pengembangan. Interaksi dariketiga fase ini serta faktor
lainnya, seperti suhu dan kelembaban relatif,harus dikontrol untuk
mendapatkan pemisahan KLTyang bisa direproduksi. Pelat KLTKT
dikembangkandi kamar datar, bilik kembar, atau pengembangan
horizontalruang. Secara umum, ruang kembar-jenuh yang
dilengkapi dengan penawaran kertas saringreproduktifitas terbaik.
Untuk pengembangan piring di TTC jenuh, awalnyasiapkan volume
fase gerak yang sesuai. Tempatkan sepotong filter dengan ukuran
yang benarkertas di palung belakang TTC dan dengan hati-hati
tuangkan fase pembuatan ke dalam biliksehingga kertas saring
benar-benar dibasahi dan menempel pada dinding belakang TTC.
Miringkan TTCke samping (sekitar 45) sehingga volume pelarut di
kedua palung menyamakan. Setruang di bangku, ganti tutupnya
dan biarkan kamar menyeimbangkan selama 20 menit.
 TandaiJarak pengembangan yang diinginkan (70 mm dari ujung
bawah pelat) dengan pensil padatepi kanan piring Geser tutup ke
samping dan letakkan piring di bagian depanpalung sedemikian
rupa sehingga lapisan dan kertas saring harus saling berhadapan
danBagian belakang piring menempel di dinding depan TTC. Ganti
tutupnya dan kembangkanpiring untuk menandai. Lepaskan piring
dari bilik dan keringkan (vertikal ke arahnyakromatografi) selama 5
menit di aliran udara dingin. Setelah setiap perkembangan,sisa fasa
gerak dan kertas saring dibuang. Sebelum dipersiapkan
untukSelanjutnya, bilik dikeringkan dan, jika perlu, juga dibersihkan.
6. Deteksi
Setelah pemindahan fase gerak dari pelat yang
dikembangkan dengan pemanasan, zona beradaterdeteksi pada
lapisan dengan warna alami, fluoresensi alami, pendinginan
fluoresensi,atau seperti zona berwarna, menyerap UV, atau neon
setelah bereaksi dengan reagen(derivatisasi postchromatographic).
Zona dengan fluoresensi atau pendinginan fluoresensi dilihat di
lemari yang menggabungkan gelombang pendek (254 nm) dan
gelombang panjang (366 nm) Lampu UV Deteksi di bawah sinar UV
adalah pilihan pertama karena nondestruktif. Sebuah Keuntungan
penting dari operasi off-line TLC adalah fleksibilitas yang diberikan
oleh penggunaan beberapa metode untuk deteksi dan identifikasi
zona. Misalnya lapisannya dapat dilihat di bawah sinar UV
gelombang panjang dan pendek, diikuti oleh satu atau lebih
chromogenic, fluorogenic, atau metode deteksi biologis. Banyak
ratusan reagen dan metode deteksi telah dijelaskan dalam
berbagai sumber literatur.
7. Derivatisasi
Derivatisasi sangat diperlukan dalam banyak hal untuk
memvisualisasikan analititas minat. Derivatisasi Bisa dilakukan baik
dengan merendam piring atau dengan menyemprotkan platewith
 reagen yang cocok Untuk reproduktifitas yang lebih baik,
perendaman adalah derivatisasi pilihan teknik. Untuk menginduksi
atau mengoptimalkan reaksi derivatisasi, mungkin perlu dilakukan
panaskan piringnya Selain itu, kondisi dan waktu harus ditentukan
untuk langkah ini.
8. Immersing
Tangki alat perendaman diisi dengan 200 ml reagen.
Letakkan piring di pemegang perangkat perendaman, atur
parameter sesuai metode dan tekan start. Biarkan reagen berlebih
menetes dari piring, bersihkan bagian belakang piring dengan
handuk kertas. Lepaskan piring dari piring dan keringkan dengan
udara dingin (vertikal di arah kromatografi).
9. Penyemprotan
Isi botol semprotan hingga 50 ml reagen. Letakkan piring di
semprotankabinet melawan kertas saring. Semprot piring dengan
gerakan horizontal dan vertikal sampai itutertutup secara homogen
dengan reagen. Pelat dikeringkan dengan udara dingin.
10. Pemanasan
Hidupkan pemanas piring dan atur suhu. Tempatkan piring
pada pemanas piring saatsuhu stabil Setelah waktu yang
ditentukan oleh metode, lepaskan piring panasdari pemanas
11. Hitungan
Analisis kuantitatif KLTKT paling modern dilakukan secara in
situ dengan mengukurzona sampel dan standar menggunakan
spektrofotometer kromatogram biasanyadisebut densitometer atau
pemindai dengan sampel cahaya tetap berupa acelah segi empat.
Umumnya evaluasi kuantitatif dilakukan dengan KLTScanner 3
menggunakan perangkat lunak winCATS. Hal ini dapat memindai
kromatogram dalam reflektansidapat dipilih sampai 100 mm / s.
Pencatatan spektra cepat. Kalibrasi tunggal danBeberapa tingkat
dengan regresi linear atau nonlinear dimungkinkan. Bila nilai
 targetharus diverifikasi, seperti pengujian stabilitas dan profil
disolusi, tingkat tunggalkalibrasi cocok Konsentrasi analit dalam
sampel dihitung denganmengingat sampel awalnya diambil dan
faktor pengenceran.
12. Dokumentasi
Setiap piringan yang dikembangkan didokumentasikan
menggunakan sistem dokumentasi digital di bawah UVringan pada
254 nm, sinar UV pada 366 nm, dan cahaya putih. Jika jenis
cahaya tidak menyalamenghasilkan informasi yang dapat
digunakan, fakta itu harus didokumentasikan. Jika plat
diturunkan,gambar diambil sebelum dan sesudah derivatisasi.
 BAB 3

PENUTUP

3.1 Kesimpulan

KLTKT(Kromatograafi Lapis Tinggi Kinerja Tinggi) merupakan

metode lanjutan dari kromatografi lapis tipis yang mencakup metodologi
yang terstandarisasi berdasarkan fakta ilmiah dan juga penggunaan
metode yang divalidasi untuk analisis kualitatif dan kuantitatif. Pada
prinsip kerja KLTKT, bekerja untuk memisahkan sampel berdasarkan
perbedaan kepolaran antara sampel dan pelarut yang digunakan.
Sistem KLTKT analitik juga berguna untuk pemisahan mikro preparatif,
yaitu pemisahan skala miligram untuk analisis fraksi, biasanya untuk
identifikasi. KLTKT sangat intensif data. Identifikasi fraksi positif oleh Rf,
spektrum absorbansi dan derivatisasipost-kromatografi.
3.2 Saran
Sebaiknya asisten dapat membimbingi kami dalam pembuatan
makalah ini.
 Daftar Pustaka

Sonia K, Beddi B.S, Dr.K.S.Lakshmi.HPTLC Method Development and

Validation: AnOverview. ISSN: 0975-1459. Jurnal Pharmaceutical
Sciences and Reserch. Vol. 9(5), 2017,652-657.
Vikram. K, Priya. K, Akash. M, Review Article High Performance Thin
Layer Chromatography (HPTLC): A Review. ISSN-2231-5012.
International Journal of Analytical and Bioanalytical Chemistry 2014;
4(2): 42-44.
ManMohan Srivastava. 2011.High-Performance Thin-Layer
Chromatography (HPTLC). Springer. London New York