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Agosto/2013
¿Qué son las isoenzimas?
ISOENZIMAS
ISOFORMAS
MACROENZIMAS
www.chem.qmw.ac.uk (1976)
ISOENZIMAS
Difieren en:
1) propiedades enzimáticas:
- Afinidad (kM)
2)propiedades físicas:
- movilidad electroforética
3)propiedades bioquímicas:
- estructural (genética)
- inmunológicas
ISOENZIMAS
~ Variantes alélicas.
ISOENZIMAS
Proteínas independientes.
~ Híbridos de subunidades
distintas:
- CK: MM,MB,BB
ISOENZIMAS
~ Variantes alélicas:
Ej: - G6PDH
ISOFORMAS
M Lis
CPN
M
B B
CK-22 CK-21
B
B
CK-1
ISOFORMAS
Macroenzimas de Tipo I
MACROENZIMAS
Macroenzimas de Tipo II
MACROENZIMAS
Métodos de Identificación
a) Electroforesis
b) Cromatografía
Métodos de Identificación
Interés Clínico
LDH: hematología
CK: cardiopatías
Ami: pancreatopatías
Métodos de Identificación
1-características físico –
químicas
Métodos de Identificación
2- características catalíticas
•Afinidad sustrato: kM
ISOENZIMAS – ISOFORMAS - MACROENZIMAS
Métodos de Identificación
3-características antigénicas
Distribución Tisular
LD5 LD4 LD3 LD2 LD1
Hígado
Aporte a circulación:
Riñón
LD1 y LD2:corazón, GR, riñón
M.Esquel.
Hematíes
High activities in heart, liver, muscle, kidney,
and RBC
Pulmón
Lesser amounts: Lung, smooth muscle and
brain
Bazo
ISOENZIMAS
de la LACTICODEHIDOGENASA (LDH-E.C.1.1.1.27)
LDH-6
LDHc – LDHx
En suero de pacientes
Tercer locus LDH con Aterosclerosis CV.
Tetrámero: c ó x Su presencia es de mal
Testículo humano pronóstico.
postpuberal Se la asocia a la Injuria
Semen hepática secundaria a la
insuficiencia cardíaca.
Fertilidad masculina
ISOENZIMAS
de la LACTICODEHIDOGENASA (LDH-E.C.1.1.1.27)
LDH-1: 30 %
LDH-2: 40 %
LDH-3: 20 %
LDH-4: 4 %
LDH-5: 6 %
ISOENZIMAS
de la LACTICODEHIDOGENASA (LDH-E.C.1.1.1.27)
Significancia Clínica
Separación electrofóretica:
-Soporte: Acetato de Celulosa
βNAD
-Sustrato: Lactato/β (-) (+)
-Revelado:
-Fluorescencia
LDH – 5 4 3 2 1
-Colorimétrico: NBT/PMS
ISOENZIMAS
de la LACTICODEHIDOGENASA (LDH-E.C.1.1.1.27)
ISOENZIMAS
de la CREATINFOSFOKINASA (CK-EC 2.7.3.2)
Distribución Tisular
Adulto
CK-MM: 95 %
CK-MB: 5 % En suero en condiciones de
normalidad, CK total se corresponde
aprox. a un 94% de CK-MM .
Neonato
CK-MM CK-MB > 6% de la actividad de CK
total es fuerte indicación de IAM.
CK-MB
CK-BB
ISOENZIMAS
de la CREATINFOSFOKINASA (CK-EC 2.7.3.2)
Significancia Clínica
ISOENZIMAS
de la CREATINFOSFOKINASA (CK-EC 2.7.3.2)
Macrokinasas
(+) (-)
1
Separación electrofóretica
Soporte: Acetato de Celulosa 2
βNADP/Activadores
Sustrato: CrP/β 3
Revelado: UV 4
5
6
7
CK 1(BB) 2(MB) 3(MM)
8
ISOENZIMAS
de la CREATINFOSFOKINASA (CK-EC 2.7.3.2)
−)
(− (+) Tipo I
macro-CK
macro-CK CK-32 tipo 1 CK-21 albúmina Tipo II
tipo 2
CK-31
ISOENZIMAS
de la CREATINFOSFOKINASA (CK-EC 2.7.3.2)
Determinación de CK-MB:
CK-MB masa:
Determinación de CK-MB:
Método de Inmunoinhibición - Actividad
ISOENZIMAS
de la CREATINFOSFOKINASA (CK-EC 2.7.3.2)
ISOENZIMAS
de la CREATINFOSFOKINASA (CK-EC 2.7.3.2)
Determinación de CK-MB:
CK-1 (BB)
MK-1 (BB-Ig)
CK-3 (MM) ⇑
MK-2 (MiMi) ⇑
ISOENZIMAS
de la CREATINFOSFOKINASA (CK-EC 2.7.3.2)
Importancia clínica
Clasificación
Isoenzimas: Isoformas:
- Tejido inespecífico - Hepática
- Placentaria - Osea
- Intestinal - Renal
- Oncofetal (CG) - Glóbulo Blanco
Macroenzimas:
- Inmunocomplejos
- Biliar
ISOENZIMAS
Métodos de Estudio
Inhibición química
EF Convencional
Isoelectroenfoque
ISOENZIMAS
B HO P I
ISOENZIMAS
Inhibidores
Lectinas L-H-Arginina
Temperatura
Normal
¿Cual es su interpretación final?
Alt. Hepatobiliar
Embarazada
FAL B HOP
ISOENZIMAS
Separación en PAGE
ISOENZIMAS
Adultos:
5A y 3
Niños:
5B y vestigios 5A
ISOENZIMAS
Variación Alélica
Macroamilasa
(con IgA,IgG,gProt y/o pSac)
Formas Múltiples
Macroenzimas
ISOENZIMAS
Macroamilasemia-Características
Macroamilasemia-Características
Presencia en:
- Condición normal (Hallazgo de laboratorio)
Métodos de estudio
Electroforesis convencional
Métodos de estudio
• Degradación de MEC
• PM: 20 y 30 kDa
Perjudicial
Ela2-Neutrofílica
ISOENZIMAS
de la ADENOSINA DEAMINASA (ADA-E.C. 3.5.4.4)
ADA
- dAMP dIMP + NH3+