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FISIOLOGÍA VEGETAL I.

3º GRADO EN BIOLOGÍA

PRÁCTICA 6. CONTENIDO PIGMENTARIO Y CURVAS ETR-LUZ EN PLANTAS DE SOL Y


DE SOMBRA.

Introducción
Las plantas pueden adaptarse a un rango amplio de irradiancia. Las que se adaptan a
vivir a baja irradiancia se denominan “plantas de sombra”, mientras que las que se
adaptan a altas irradiancias se denominan “plantas de sol”. Incluso plantas de la misma
especie pueden crecer y aclimatarse a un ambiente sombrío o crecer a alta irradiancia,
adquiriendo las características de las plantas de sombra o de sol mediante cambios en
el aparato fotosintético a nivel estructural y bioquímico, así como mediante cambios
en la anatomía de la hoja. Estos cambios se reflejan en las curvas fotosíntesis-luz,
donde se observan diferencias en el punto de compensación para la luz (PCL) y TFmax
(menores en plantas de sombra) y en la intensidad de luz a la que se alcanza la TFmax,
la llamada intensidad de luz saturante, que es mayor en plantas de sol. Los cambios
en el aparato fotosintético también se ven reflejados en la composición pigmentaria,
sobre todo en el índice Cla/Clb. Igualmente se detectan cambios en distintos
coeficientes relacionados con la fluorescencia.
El objetivo de esta práctica es analizar las diferencias en algunos parámetros
fotosintéticos, que pueden ser medidos por fluorimetría de pulsos de amplitud
modulada (PAM), así como en la composición pigmentaria en hojas de sol y de sombra
procedentes de la misma especie.

Material y Métodos
1. Obtención de curvas de tasa de transporte de electrones (ETR)-luz y medida del
rendimiento cuántico efectivo del fotosistema II (YII) mediante un fluorímetro de pulsos
de amplitud modulada (PAM)
El fluorímetro (Junior PAM) puede aplicar distintos protocolos y realizar medidas de
numerosas variables relacionadas con la fluorescencia, pero en este caso se procederá
únicamente a la medida del rendimiento cuántico efectivo del fotosistema II (YII) y a
la obtención de curvas ETR-luz. Para ello se mantendrán previamente las hojas en
oscuridad entre 20-30 minutos y se procederá a la realización de una “curva rápida de
luz” (RLC). Estas curvas se obtienen exponiendo la muestra a intensidades crecientes
de luz y midiendo la tasa de transporte de electrones a cada intensidad. No obstante,
la exposición a la luz es tan corta que no permite que se equilibren las reacciones
fotosintéticas. Es decir, estas curvas no se deben confundir con las clásicas curvas
fotosíntesis-luz. Sin embargo representando la tasa de transporte de electrones (ETR)
frente a la intensidad de luz (PAR), las RLC proporcionan los siguientes parámetros:
-  (µmol electrones/µmol fotones): es la pendiente inicial de la RLC que está
relacionada con la eficiencia cuántica de la fotosíntesis
- ETRm (µmol electrones m-2 s-1): tasa máxima de transporte de electrones
- Ek (µmol fotones m-2 s-1): intensidad de luz saturante
Se deben realizar tres curvas ETR-luz por cada hoja de sol y de sombra. Una vez
realizadas la medidas, el aparato proporciona un ajuste de los datos a una curva de
saturación, proporcionando los valores de los parámetros indicados más arriba.
Al mismo tiempo que se obtienen estas curvas, el aparato puede registrar
simultáneamente el valor de YII a cada intensidad de luz. El valor que nos interesa
comparar es el que se obtiene a intensidad de luz 0.
FISIOLOGÍA VEGETAL I. 3º GRADO EN BIOLOGÍA

2. Extracción y cuantificación de pigmentos


Se pesan aproximadamente 0.2-0.3 g de hoja, se cortan en trozos pequeños y se ponen
en un mortero de cristal. Se añaden 10 mL de acetona neutralizada con MgCO3 y se
macera el tejido. Una vez homogeneizado el tejido se filtra el extracto a través de un
papel de filtro previamente humedecido con acetona neutralizada. El filtrado se
recoge en una probeta. El volumen final de extracto debe llevarse a 15 mL y se
almacena en un tubo de pigmentos, con tapón de rosca, para evitar que la acetona se
evapore. Este procedimiento debe realizarse una vez para la hoja de sol y otra para la
de sombra.
Para cuantificar los pigmentos se mide, en un espectrofotómetro, la absorbancia del
extracto a 645 y 663 nm, que se usarán para el cálculo de la concentración de las
clorofilas a y b y 750 nm para medir la turbidez de la muestra. Si esta alcanzara un
valor superior a 0.01 unidades de absorbancia (A) sería necesario diluir el extracto. Las
concentraciones de pigmento se calculan según las fórmulas de Hipkins y Baker (1986)
y posteriormente se expresan en µg/g peso fresco.
Cla (µg mL-1)= 12.7 A(663) – 2.69 A(645)
Clb (µg mL-1)= 22.9 A(645) – 4.86 A(663)

Resultados
1.-Representar en una misma gráfica las curvas ETR-luz para los dos tipos de hoja.
Indicar en una tabla los valores medios de los coeficientes obtenidos para cada tipo de
planta (, ETRm, Ek, YII).
2.-Indicar en una tabla los valores medios (datos de todos los subgrupos) de
concentración de pigmentos (Cla, Clb) expresados en µg/g peso fresco y del índice
Cla/Clb para las hojas de sol y de sombra.

Discusión
Comentar todos los resultados obtenidos en función de las diferencias esperadas entre
plantas de sol y de sombra.

Bibliografía
Hipkins MF, Baker NR (1986). Photosynthesis energy transduction. A practical
approach. IRL Press Limite
Lambers, Champin II y Pons (1998). Plant Physiological Ecology.

TAREA (0,35 puntos): Cada grupo debe subir a la página de la asignatura en Campus
Virtual un único archivo (máximo 2 páginas) en formato pdf en el que se indique el
nombre y apellidos de los miembros del grupo y se muestren los resultados obtenidos
según se indica en el apartado de resultados y discusión.
El plazo para entregar esta tarea es de 1 semana.

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