Hematologia

Objetivo de la hematologia
La hematología es la rama de la medicina interna, que se encarga del estudio de
las células de la sangre y sus precursores, así como de los trastornos
estructurales y bioquímicos de estos elementos, que puedan conducir a una
enfermedad.
La hematología es una ciencia que comprende el estudio de
la etiología, diagnóstico, tratamiento, pronóstico y prevención de las enfermedades
de la sangre y órganos hemolinfoproductores. Los especialistas en este dominio
son llamados hematólogos. Es la única especialidad médica que trata
enfermedades malignas (cáncer) y no malignas.
Fundamento
Todas las células que forman la sangre derivan de una célula madre pluripotencial
localizada en la médula ósea que mediante un proceso de diferenciación que se
llama hematopoyesis, da lugar a diferentes tipos de células. Cada una de ellas
posee unas característica y funciones específicas. Las principales células que
forman la sangre son hematíes, leucocitos, eritrocitos,
(neutrófilos, eosinofilos, basófilos, monocitos, linfocitos) y plaquetas.
Pruebas de hematogia
La hematología comprende el estudio de las células sanguíneas, algunas de las
pruebas de laboratorio más usuales son las siguientes:

 Recuento de eritrocitos y hematocrito.

 Recuento de leucocitos.
 Determinación de hemoglobina.
 Fórmula leucocitaria (recuento diferencial de leucocitos).
Hemoglobina

OBJETIVO
Aprender a utilizar el espectofotómetro y a interpretar sus resultados, midiendo la
concentración de hemoglobina en sangre.

FUNDAMENTO
Se basa en la transformación de la hemoglobina en cianmetahemoglobina, al
añadir a la muestra de sangre ciertos componentes. En primer lugar, el Fe2+ se
oxida a Fe3+, dando lugar a metahemoglobina.

Luego, en presencia de cianuro potásico, pasa a cianmetahemoglobina, de color

rojo y con un pico de absorción máximo a 540 nm y cuya concentración puede ser
determinada por métodos colorimétricos, empleando un patrón de concentración
conocida.

MATERIAL NECESARIO
 7 tubos de ensayo
 Pipeta de 5ml
 Prepipeta
 Micropipeta
 Puntas de micropipeta
 Vaso de precipitado
 Parafilm
 Espectrofotómetro
 Matraz aforado
REACTIVOS
 Reactivo de Drabkin:
1. Ferricianuro potásico 0,6 mmol/l
2. Cianuro potásico 77 mmol/l
3. Dihidrógeno fosfato de potasio 2mmol/l
Preparación:
1. Como somos muchos en clase, preparamos 250 ml para que todos puedan
utilizarlo.

2. Cogemos un matraz aforado y vertemos en él 1 frasco de 5 ml del reactivo y

enrasamos con agua destilada.
3. Tapamos con papel parafilm y mezclamos bien.

4. Trasvasamos la disolución a frascos de cristal oscuro, para su conservación y

etiquetamos.
  Patrón.
Realizamos diluciones seriadas con solución patrón.

1. Partimos de 15 g/dl de solución patrón.

2. Hacemos la primera dilución 1/2: 7,5 g/dl de patrón : 0,5 ml de solución patrón +
0,5 ml de agua destilada.
3. Hacemos la segunda dilución 1/4: 3,75 g/dl de patrón : 0,5 ml de la disolución 1/2
+ 0,5 ml de agua destilada.
MUESTRA
Sangre venosa anticoagulada, de dos individuos diferentes.
DETERMINACIÓN DE HEMATOCRITO
OBJETIVO
 Aprender a realizar la prueba del hematocrito utilizando el macro y micrométodo,
conocer su importancia en el diagnóstico de enfermedades y la forma adecuada de
su procedimiento.
FUNDAMENTO
El hematocrito es un examen de sangre que mide el porcentaje del volumen de
toda la sangre que está compuesta de glóbulos rojos. Esta medición depende
del número de glóbulos rojos y de su tamaño. El resultado se expresa en
porcentaje.
El hematocrito casi siempre se ordena como parte de un conteo sanguíneo
completo (hemograma).
Para la realización de esta prueba, con el macrométodo, la sangre se extrae
típicamente de una vena, por lo general de la parte interior del codo o del dorso de
la mano.
Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un
dolor moderado, mientras que otras sólo sienten un pinchazo o sensación de
picadura. Posteriormente, puede haber algo de sensación pulsátil.
Un volumen de sangre se deposita en un tubo de Wintrobe, por medio de una
pipeta, hasta la marca del 10 y se debe de centrifugar. Al terminar la prueba,
deben de quedar separados el plasma de la sangre y las células, depositándose
en el fondo y presentando un color rojo intenso.
Para la realización del micrométodo, se utilizan unos tubos de un calibre muy
delgado, llamados capilares, y pueden ser llenados con la misma sangre venosa o
de capilar. Este último es el más usado, por ser más rápido y menos riesgoso al
usar sangre capilar. Para su lectura se usa una escala estandarizada.
MATERIAL
 Tubo de Wintrobe graduado de 0-100 mm
 Pipetas Pasteur
 Equipo para venopuncion (Tubo lila)
 Tubos capilares azules o rojos
 Plastilina
 Encendedor o cerillos
 Centrifuga
 Microcentrifuga
SUSTANCIAS:
 Alcohol al 70%
 Sangre venosa

PROCEDIMIENTO
Para macrohematocrito:
1. Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica
punción venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA
2. Llenar el tubo de Wintrobe con la sangre extraída con anticoagulante ayudándose
de una pipeta Pasteur, comenzando desde el fondo hasta la marca superior de
100 mm, teniendo cuidado de no provocar espuma ni dejar burbujas en el tubo.

3. Se recomienda como medida de precaución tapar el tubo con un tapón de goma

para evitar la evaporación
4. Centrifugar a 3000 rpm durante 30 minutos

5. Leer directamente de la graduación la columna de glóbulos rojos y anotar

resultados
Para Microhematocrito:
1. Tomar la muestra en capilares rojos heparinizados directamente del dedo, o
utilizar capilares azules sin heparina para sangre venosa con anticoagulante
EDTA. Debe llenarse aproximadamente 70-80% del capilar, sin dejar burbujas de
aire.
2. Ocluir (tapar) el extremo del capilar que no estuvo en contacto con la sangre, con
plastilina o sellando con fuego
3. Colocar el capilar sobre la plataforma del cabezal de la microcentrifuga, con el
extremo ocluido adherido al reborde externo de la plataforma

4. Centrifugar por 5 minutos entre 10 000 y 12 000 rpm

5. Para leer el resultado, se lleva a cabo una regla de tres, midiendo el volumen
total de plasma y eritrocitos o por medio de la regleta.
6. Para la regleta, se sostiene el tubo frente a la escala de manera que el fondo de
la columna de eritrocitos, quede exactamente al mismo nivel de la línea hroizontal
correspondiente al cero
7. Desplazar el tubo a través de la escala hasta que la línea marcada con el 1.0
quede al nivel del tope del plasma. El tubo debe de encontrarse completamente
en posición vertical.

8. La línea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicara la fracción
del volumen de estos.
OBSERVACIONES

Tras una centrifugación de la sangre total se pueden apreciar dos niveles, uno con el
depósito de los glóbulos rojos, principalmente y en color rojo oscuro, otra capa
blanca, de leucocitos y una delgada de color gris, que son plaquetas y finalmente
otro nivel del plasma total, de un leve color amarillento.
RESULTADOS
 En el tubo de Wintrobe se mide directamente el nivel de la columna de glóbulos
rojos, comparando el número de la lectura con los siguientes porcentajes:

Hombres: 47.0 5.0%

Mujeres: 42.0 5.0%
Niños (5 años) 38%-44%
Lactantes (3 meses): 37-42%
Recién nacidos: 50-58%

CUENTA DE LEUCOCITOS
OBJETIVO
Aprender a realizar y aplicar la metodología para un recuento de Leucocitos por
milímetro cúbico de sangre e interpretar el resultado.
FUNDAMENTO
Para el conteo de leucocitos, se usan métodos sistemáticos que son más rápidos
y precisos, y los métodos manuales.
Todo método manual de recuento celular incluye 3 fases:
 Dilución de la sangre
 Muestreo de la sangre diluida en un volumen
 Recuento de células en ese volumen
Para el recuento de leucos se cuentan los 4 cuadrados de las esquinas, que
corresponden a los campos 1, 3,7 y 9.
Para su dilución, se hace lo mismo que para los hematíes pero empleando la
pipeta de blancos, de modo que la solución que obtenemos es de 1/20. Se utiliza
como diluyente el líquido de Turk. El líquido de Turk es hipotónico de modo que se
destruyen los hematíes y así no entorpecen en el recuento.
El líquido de Turk consta de ácido acético glaciar 2ml, violeta de genciana
disolución de 1% 1ml y agua destilada en cantidad suficiente para 1000ml. Deberá
filtrarse a menudo para evitar levaduras y hongos.
En un principio es un poco difícil distinguir los leucocitos de los restos de
membranas de los hematíes hemolizados. Se debe tener en cuenta que los
leucocitos son más refringentes (más brillantes) al moverlo con el microscopio que
los restos de hematíes. Se debe observar la presencia de la membrana
citoplasmática y de la membrana nuclear (a veces más) como líneas finas y
brillantes. Esto se observa fácilmente moviendo el microscopio hacia delante y
hacia atrás
MATERIAL
 Pipeta de Thoma para glóbulos blancos (perla blanca)
 Equipo para venopuncion (Tubo lila)
 Boquilla blanca
 Tubo de goma
 Tubos de ensayo
 Papel parafilm
 Cámara de Neubauer
 Cubrehematimetro
 Microscopio
 Gasas
SUSTANCIAS
 Alcohol al 70%
 Sangre venosa
 Liquido de Turk

PROCEDIMIENTO
1. Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica
punción venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA
2. Colocar el tubo de plástico y la boquilla para aspirar en la pipeta

3. Llenar la pipeta de glóbulos blancos con sangre hasta la marca 0.5 para realizar
una dilución de 1/20. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente. Si la sangre
se pasa de la marca, se puede absorber con gasa el excedente

4. Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente (liquido de

Turk) y absorber hasta la marca 11, no deben quedar burbujas.

5. Se tapan ambos extremos de la pipeta con papel parafilm y se coloca en un

rotador automático o se hace rotar manualmente de 2-3 minutos
6. Montar la laminilla de vidrio en la cámara para recuento. Debe estar limpia y seca.
7. Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota
pequeña cerca de un extremo de la cámara para que por capilaridad se llene
exactamente.

8. Dejar 3 minutos que los leucocitos se sedimenten

9. Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. y contar en

los 4 cuadrados angulares.
10. En el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o por fuera
las líneas limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeño de recuento y no se
consideran los que estén en los límites inferior y derecho.
OBSERVACIONES
 Cámara de Neubauer, 40x
Enfocando uno de los cuadros laterales, se aprecian claramente los 16 cuadros
pequeños donde se tienen que contar los leucocitos que hay en ellos. Se debe de
tener cuidado de no confundir los restos de eritrocitos hemolizados con los
leucocitos, que deben de aparecer como puntos purpuras o negros, como los que
están a las 9

RESULTADOS
Los recuentos de leucocitos, al igual que los eritrocitos, se expresan como
concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de
volumen de sangre, que es 1mm3
Después de contar los glóbulos blancos de los 4 cuadrados angulares, se suman
el total de ellos y con dicha cantidad de hace el siguiente cálculo:
N° de leucocitos x mm3 = altura x dilución x área
N° de leucocitos x mm3 = 1/10 x 1/20 x 4 = 1/10 000
N° de leucocitos x mm3 = 4/200 = 1/50
N° de leucocitos x mm3 = N° de leucocitos contados x 50

En el análisis hecho, los resultados de la cuenta de células quedaron así por

casilla:
FORMULA LEOCOCITARIA
OBJETIVO
Aprender a hacer recuentos de los distintos tipos de leucocitos, con respecto a su
representación total por mm3 de sangre.

FUNDAMENTO
Los leucocitos, también conocidos como glóbulos blancos, son un componente
importante de la sangre y una pieza clave en el sistema inmunológico del cuerpo.
Hay cinco tipos diferentes de leucocitos, cada uno con funciones específicas. Se
pueden dividir en dos tipos principales: los granulocitos y agranulocitos.
Granulocitos
Los granulocitos tienen pequeños gránulos de material dentro de sus membranas
celulares, que desempeñan un papel importante en su función, ya que las células
pueden liberar los gránulos para matar las bacterias, hongos y otros invasores.
Hay tres tipos de granulocitos:
  Eosinófilos: Están diseñados para atacar a los parásitos, y también desempeñan un
papel en las reacciones alérgicas.

 Neutrófilos: Son los más abundantes y son el primer tipo de célula inmune que
responde y llega al sitio de la infección.

 Basófilos: Representan menos del uno por ciento. Desempeñan un papel en la

respuesta inmune.

Agranulocitos
Carecen de gránulos en sus membranas celulares. Los agranulocitos pueden ser
dividido en:

 Linfocitos: Constituyen alrededor del 20-40% del recuento total de leucocitos, e

incluyen:
1. Linfocito B:
2. Linfocito T:

Los linfocitos pueden defender el cuerpo contra las infecciones, ya que distinguen
las células del propio cuerpo de las extranjeras.

 Monocitos: Conforman del 2 al 9% de la cantidad de glóbulos blancos, y están

diseñados para presentar antígenos a los linfocitos para estimular la respuesta
inmune. Estas células eventualmente maduran a macrófagos leucocitos
especializados que tragan material extraño para neutralizarlo.

Al microscopio óptico podemos encontrarlos con pequeñas variaciones en su

morfología, según estén más o menos activos:
La fórmula leucocitaria consiste en la determinación del porcentaje que representa
cada uno de los tipos de leucocitos vistos, con respecto al total de ellos. Una
máquina especialmente diseñada o el especialista, cuenta el número de cada tipo
de célula. El examen muestra si el número de células está en la proporción
apropiada entre sí y si hay más o menos cantidad de un tipo de célula.

MATERIAL NECESARIO
 Microscopio

 Papel y lápiz o registrador automático de células.

  Lanceta

 Capilar anticoagulado

 Dos portaobjetos

REACTIVOS
 Podemos utilizar cualquier tinción que ponga de manifiesto los cuerpos formes de la
sangre. Nosotras hemos utilizado la tinción de panóptico rápido.
  Aceite de inmersión

MUESTRA
 Sangre fresca

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
 Preparamos el material necesario y extraemos la muestra de sangre.

 Hacemos una extensión con la muestra de sangre extraída y dejamos secar a

temperatura ambiente.
 Teñimos con panóptico rápido.

 Enjuagamos y dejamos secar la muestra teñida.

OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO
 Preparamos el microscopio para que tenga el condensador alto y el diafragma
abierto.
 Enfocamos la preparación con el objetivo de 10x.

 Añadimos una gota de aceite de inmersión y observamos con el objetivo 100x.

Eosinófilo
Monocito
Neutrófilo en cayado
Neutrófilo segmentado
Basófilo
 Linfocito

RESULTADO
Barremos la muestra en busca de leucocitos y vamos anotando cada tipo que nos
encontremos, hasta contar un máximo de 200 unidades. Nosotras contamos 100.
Velocidad de sedimentación globular
Objetivo:
Realizar la práctica de VSG correctamente y observar la velocidad de
sedimentación de la sangre del paciente.
Planteamiento problema:
Investigar en cuanto tiempo se sedimenta los eritrocitos en la muestra de sangre.
Hipótesis:

1°: Entre los factores físicos que afectan la VSG se destacan la morfología
eritrocitaria y el volumen corpuscular medio, observándose que a mayor tamaño
de los glóbulos rojos, mayor velocidad de sedimentación.
2°: Entre los factores no dependientes de la muestra y que afectan el resultado se
encuentran la temperatura, la hemólisis, el tiempo transcurrido desde la
extracción, o la limpieza de material. Esto pone de manifiesto la importancia de la
perfecta estandarización del método.
3°: Uno de los efectos sistémicos que tiene el proceso inflamatorio es un aumento
de la VSG.

Material:
-pipeta de sedimentación (tubo de westergreen o wintrobe).
-soporte con capacidad variable que inmovilice la pipeta en posición vertical.
-pipetas Pasteur con punta larga o cualquier otro sistema de succión.

Metodologia:
1: mezclar el tubo de sangre perfectamente con agitación mecánica.
2: llenar el tubo de wintrobe hasta que la sangre alcance la marca de 0 mm.
3: colocar el tubo de wintrobe verticalmente en el soporte.
4: cuidar que la temperatura se encuentre entre 10 y 25° c
5: dejar reposar durante 1 hora exactamente.
6: transcurrido el tiempo, se lee la distancia existente entre la superficie del
meñisco correspondiente a la columna eritrocitaria y la parte superior de la
columna de sangre, situada a nivel de la marca o de la escala graduada. El valor
de (esta distancia se expresa en mm/hr).
Marco teorico:
La sedimentación globular se produce debido a que la densidad de los eritrocitos
es mayor que la del plasma. La caida de los eritrocitos ocasiona un
desplazamiento hacia arriba del plasma, produciendo así una corriente
ascendente y una fuerza de retardo, por lo tanto la velocidad de sedimentación
globular (VSG) depende de la interacción entre fuerzas físicas opuestas.

En sangre de personas normales estas fuerzas opuestas tienden a igualarse y

consecuentemente la VSG es mínima.
Los valores de referencia son:
Niños y adolescentes: 1-13 mm/hr
Hombres: 0-5 mm/hr
Mujeres: 0-13 mm/hr

Resultados:
Análisis de resultados:
La velocidad de sedimentación globular de la muestra estuvo dentro de lo normal
saliendo como resultado: 7 mm/hr.

Conclusión:
La práctica de sedimentación de glóbulos en la sangre es muy importante ya que alerta
sobre procesos infecciosos e inflamatorios en el paciente y puede causar la muerte.
Grupo sanguineo

II. OBJETIVO:
#l nali*ar la práctica el alumno debe saber qu& es el grupo sanguíneo! susaplicaciones en
el campo de la medicina y el grupo sanguíneo al que pertenece.
Fundamento
El tipo de sangre es determinado! en parte! por los antígenos de los grupos
sanguíneos #! $! %presentes en los gl bulos rojos y blancos! inclusive. -n grupo
sanguíneo es una clasi caci n de
la sangre de acuerdo con las características presentes o no en la super cie de
los gl bulos rojosy e n e l s u e r o d e l a s a n g r e . " a s d o s c l a s i c a c i o n e s
m á s i m p o r t a n t e s p a r a d e s c r i b i r g r u p o s sanguíneos en humanos son
los antígenos el sistema #$%/ y el factor R0.
MATERIALYMETODOS: