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RESUMEN

Las células sanguíneas (glóbulos rojos, glóbulos blancos y plaquetas) se forman en la médula ósea
a partir de células pluripotentes, a través de un proceso finamente regulado.

Una característica distintiva del sistema hematopoyético es que las células maduras poseen una
vida media corta, de modo que la hematopoyesis es, necesariamente, un proceso continuo durante
la vida. En mamíferos, el sistema hematopoyético comprende una jerarquía de células en donde la
célula troncal hematopoyética o “stem cell”, es la base. En un individuo adulto, la célula troncal
hematopoyética (CTH) reside en la médula ósea y es responsable del desarrollo de todos los linajes
de células sanguíneas maduras, reflejando su pluripotencialidad, su capacidad de diferenciación,
de proliferación y de auto-renovación. Estudios destinados a entender cómo la célula troncal
pluripotencial es capaz de auto-renovarse, de desarrollar la capacidad de restricción de linaje y de
adquirir las características de una célula terminalmente diferenciada, han permitido identificar un
gran número de factores y genes los que interactúan en forma controlada y coordinada con la
finalidad de mantener el desarrollo normal de la hematopoyesis. El microambiente en el cual las
CTH y células progenitoras residen, otorga un entorno adecuado para el desarrollo de la
hematopoyesis, proveyendo los factores y moléculas necesarias para la diferenciación, maduración
y eventual emigración de las células a la circulación.

Además de entender la regulación del sistema hematopoyético, el conocimiento de la biología de


las CTH es de crucial importancia médica, debido a su enorme potencial en reemplazos o reparación
de tejidos y eventualmente como vehículo en terapias génicas.

En este capítulo se revisan los aspectos más importantes de la CTH, eritropoyesis, granulopoyesis,
linfopoyesis y megacariopoyesis.

1. INTRODUCCIÓN 2.1. Histología

Las células sanguíneas (glóbulos rojos, glóbulos La médula ósea está for mada por dos
blancos y plaquetas) se originan en la médula importantes compartimientos: vascular y
ósea mediante un complejo proceso de hematopoyético (figura 1-1).
diferenciación y maduración celular. En este
proceso denominado hematopoyesis participan
varios factores de maduración. También es
fundamental la participación de las moléculas
de adhesión celular, presentes en las células
hematopoyéticas, en las células del estroma y
en la matriz extracelular.
Este capítulo describirá los aspectos fisiológicos
fundamentales de la hematopoyesis y de cada
una de las líneas celulares en particular.

2. MÉDULA ÓSEA

La hematopoyesis ocurre en la médula ósea a


partir de la segunda mitad del embarazo y en
el resto de la vida.

La médula ósea se encuentra en la cavidad


medular de los huesos largos (principalmente Figura 1-1. Estructura general de la médula ósea. Se
en las epífisis) y en los espacios existentes entre destaca el compartimiento vascular (arterias, venas y
las trabéculas de los huesos esponjosos. sinusoides) y el compartimiento hematopoyético.

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Los vasos sanguíneos del compartimiento de migración transitorios (<4 µm de diámetro)
vascular forman un esqueleto estructural en la que se forman en las células endoteliales de los
médula ósea. La sangre que ingresa a la médula sinusoides.
ósea lo hace por las arterias nutricias que
perforan la diáfisis a través de los agujeros El compartimiento hematopoyético está
nutricios. Estas arterias entran en la cavidad for mado por los islotes de células
medular y dan origen a la arteria longitudinal hematopoyéticas de las diferentes líneas
central, desde la cual se generan pequeños celulares (serie eritroblástica, serie granulocítica,
vasos que irrigan tanto la médula como el hueso serie monocítica serie linfoide y serie
cortical. Las ramas dirigidas a la médula megacariocítica), en sus distintos estadios
descargan su sangre a capilares, los cuales madurativos. En células se ubican entre los
vacían en una extensa red de sinusoides. Los sinusoides, y entre éstos y la cortical del hueso.
sinusoides (45 a 80 mm de diámetro) están
compuestos por células endoteliales, una Además de las células hematopoyéticas en la
lámina basal y una capa externa de células médula ósea también existen otras células que
reticular es; estas últimas cubren forman parte del denominado estroma medular.
aproximadamente el 50% de la superficie Entre ellas destacan: macrófagos, células
endotelial. Estos sinusoides drenan en una vena reticulares y algunas células adiposas (figura
longitudinal central, que a su vez descarga su 1-2). Estas células participan activamente en la
contenido en venas que salen del hueso por el regulación de la hematopoyesis secretando
conducto nutricio. citoquinas y factores de maduración.
Adicionalmente los macrófagos fagocitan
El pasaje transendotelial de células maduras, núcleos expulsados por los eritroblastos
desde el comportamiento hematopoyético a la ortocromáticos al madurar a reticulocitos,
sangre ocurre directamente a través de poros células alteradas y células muertas.

Figura 1-2. Estructura histológica de la médula ósea. La médula ósea está formada por vasos sanguíneos, sinusoides,
células del estroma y células hematopoyéticas. Los distintos tipos de células se desarrollan en islotes hematopoyéticos
ubicados a diferente distancia de la pared de los sinusoides, según el linaje celular.

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Figura 1-3. Esquema de la Hematopoyesis. La célula madre pluripotencial autoperpetuable, da origen a una célula
pluripotencial, también denominada CFU-ML (Unidad formadora de colonias mieloides y linfoides), de la que se originan: a)
el progenitor mieloide (CFU-GEMM), a partir del cual por procesos de maduración y diferenciación se originan los granulocitos
(neutrófilos, eosinófilos y basófilos), monocitos, eritrocitos y plaquetas; y b) el progenitor linfoide (CFU-L), que después de
un proceso de maduración y diferenciación, da origen a los linfocitos T y linfocitos B. Se muestra los puntos de acción de las
citoquinas (IL-1, IL-3, IL-6 e IL-7) y factores estimuladores de colonias (CSF) específicos, que participan como factores
reguladores de la granulopoyesis y linfopoyesis. EPO, eritropoyetina; TPO, trombopoyetina.

Compartimiento de células madres. Las Entre los mecanismos de control que regulan
células madres o troncales (“stem cells”) las células troncales, destacan: células del
representan menos del 1% de las células de la estr oma medular, matriz extracelular
médula ósea. No son identificables (fibronectina, vitronectina, laminina, colágeno),
morfológicamente, por lo que deben ser moléculas de adhesión (integrinas, superfamilia
identificadas por el inmunofenotipo (CD34+, de las inmunoglobulinas, selectinas), y
CD38-) y adicionalmente (CD90+, CD117+ y citoquinas y factores de crecimiento.
HLA-DR-), o ser estudiadas en cultivos in vitro.
Actualmente existen varias fuentes de «stem
Las CTH (“stem cells”) también denominadas cells»: médula ósea, sangre periférica, sangre
CFU-ML (Unidad for madora de colonias de cordón umbilical, hígado fetal y sistemas in
mieloides y linfoides) dan origen a dos líneas vitro, siendo la sangre periférica y de cordón
celulares principales, mieloide y linfoide (figura umbilical las más utilizadas actualmente en el
1-3). En la línea mieloide, a partir de la CFU- tratamiento con células progenitoras.
GEMM (granulocítica, eritroide, monocítica y
megacariocítica) se producen dos diferentes Compartimiento mitótico. A partir de las CFU
CFU “encomendadas”, CFU-GM (granulocito, de las líneas celulares específicas antes
monocito) y CFU-MegE (megacariocito, mencionadas, se generan las primeras células
eritroide); posteriormente se generan las CFU- reconocibles morfológicamente de cada línea
G, CFU-M, CFU-E, CFU-Meg. celular: mieloblasto en el caso de los

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granulocitos, que posteriormente madurará a las CTH para diferenciarse a células sanguíneas
promielocito y luego a mielocito etapa en la maduras o a sus precursores. En general, los
cual se diferencian las tres líneas específicas de ensayos in vitro miden la actividad de células
los granulocitos (neutrófilos, eosinófilos y más maduras, y los in vivo, generalmente
basófilos). detectan la actividad de células más primitivas,
siendo necesario el trasplante o injerto de las
Comportamiento de maduración - células a un ambiente adecuado para producir
almacenamiento. Las etapas posteriores de la progenie.
maduración de los granulocitos corresponden
a juveniles, baciliformes y segmentados. Por su Ensayos in vitro
parte, la serie monocítica madura en las etapas
de monoblasto y monocito. Los sistemas de cultivo in vitro se pueden
agrupar en dos categorías generales: los
De la CFU-Meg, la línea megacariocítica se independientes de estroma y los dependientes
reconoce las etapas de megacarioblasto, de estroma:
megacariocito y plaquetas. En la serie
eritr oblástica se reconocen las etapas, a) Cultivo in vitro independiente de estroma.
proeritroblasto, eritroblasto basófilo, eritroblasto Entre los cultivos de este tipo está el ensayo de
policomatófilo, eritroblasto ortocromático, unidades de formación de colonias en cultivo
reticulocito y glóbulo rojo. (CFU-C) el cual detecta el crecimiento de células
hacia una población más madura,
En la línea linfoide, a partir de la CFU-L, después comprometida al linaje eritroide o mieloide. Las
de un proceso de diferenciación y maduración colonias emergen luego de 5 a 14 días de cultivo
se originan los linfocitos B y linfocitos T; estos en un medio semi-sólido, en presencia de uno
últimos requieren una etapa posterior de o más factores de crecimiento. Una célula
maduración en el Timo. primitiva que posea potencialidad de multilinaje
y un alto grado proliferativo en cultivo, es
denominada una “célula formadora de colonias
3. CÉLULAS TRONCALES HEMATOPOYÉTICAS de alto potencial pr oliferativo” (“high
proliferative potencial colony-forming cell”:
3.1. Definición de célula troncal HPP-CFC). En este caso, es posible observar
hematopoyética colonias que se caracterizan por alcanzar un
tamaño mayor a 0,5 mm de diámetro y por
Décadas de estudios funcionales realizados en contener varias células de la línea mieloide.
ratones y últimamente en humanos, han
contribuido a la definición conceptual de la Cultivo in vitro dependiente de estroma. Un
célula troncal hematopoyética (CTH) como una ensayo que se correlaciona mejor con la
población celular que reside en la médula ósea actividad de las CTH, es el cultivo dependiente
de un individuo adulto y que es responsable de estroma por largos períodos de tiempo o
del origen de todo el espectro de células “long-term culture initiating cell” (LTC-IC). Las
sanguíneas maduras. células primitivas, cultivadas sobre una capa de
células estr omales generan pr ogenie
Tres propiedades características de la CTH son, aproximadamente a las 12 semanas de cultivo,
su multi-potencialidad, su capacidad de auto- teniendo la precaución de remover células
renovación y de proliferación. Por lo tanto, una semanalmente para evitar su sobrecrecimiento.
célula troncal hematopoyética puede ser Esta alta capacidad de crecimiento es indicativa
definida como células clonogénicas que poseen de la habilidad de auto-renovación continua que
la propiedad de renovarse a sí mismas, de poseen las células primitivas.
proliferar y de diferenciarse hacia todos los tipos
de células sanguíneas. Ensayos in vivo

3.2. Estudio de la célula troncal Uno de los ensayos in vivo ampliamente


hematopoyética utilizado, es el de formación de unidades de
colonias en bazo o “colony-forming unit-spleen
Con el propósito de comprender la biología de assay (CFU-S), desarrollado en 1961 por Till y
las CTH, se han desarrollado diversos ensayos McCulloch, el cual se basa en el trasplante de
tanto in vivo como in vitro. La mayoría de estos células de médula ósea o de bazo en ratones
sistemas permiten estudiar la potencialidad de irradiados letalmente. Luego de 8 ó 12 días,

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Experimentos similares con otras citoquinas linaje celular específico, por lo que a
relacionadas a linajes y sus receptores, arrojan continuación se describirán aquellos que han
resultados equivalentes, apoyando el postulado arrojado resultados de mayor consistencia.
que el compromiso de linaje puede ocurrir en
ausencia de las señales particulares. Sin Familia de genes hox
embargo, al igual que en todos los
experimentos que utilizan animales Las proteínas HOX pertenecen a una gran familia
transgénicos, no es posible descartar la de factores de transcripción que comparten una
existencia y la influencia de señales adicionales secuencia de unión a DNA altamente
compensatorias a las específicas, o algún grado conservada (“homeodomain”). Fueron
de participación de señales específicas en la descubiertos en Drosophila y resultaron ser
decisión de linaje, considerando que las cruciales en la regulación del desarrollo
estrategias experimentales no necesariamente embrionario nor mal, encontrándose
reflejan la situación in vivo en su totalidad. posteriormente que sus análogos en humanos
participan en el desarr ollo de una
Ejemplos de factores y citoquinas necesarias para hematopoyesis normal. En mamíferos, se han
la maduración de ciertos linajes celulares son: descubierto 39 genes que se agrupan en cuatro
· Interleuquina-7, crucial en la diferenciación grupos, A, B, C y D, conteniendo cada uno de
linfoide, ya sea células B o T. ellos entre 8-11 genes.
· Trombopoyetina (TPO), secretada en el
hígado, determina el linaje megacariocítico Aunque la función de las proteínas HOX en
y eritroide. hematopoyesis es en extremo compleja, las
· Eritropoyetina (EPO), producida en los evidencias experimentales indican que los
riñones, aumenta la pr oducción de genes hoxb4 están asociados con la
eritrocitos. diferenciación mieloide y los del grupo hoxc
· Interleuquina-11 y TPO estimulan la con el linaje linfoide.
pr oducción de megacariocitos y su
fragmentación en plaquetas. Evidencias in vitro e in vivo indican que HOXB3,
· Factor estimulante de colonias HOXB4 y HOXB5 actúan sobre progenitores
granulocítica-monocítica (GM-CSF), tempranos, probablemente antes de que ocurra
deter minante del linaje granulocito- la diferenciación de linaje mieloide y eritroide,
monocito. Con la participación del factor y que probablemente HOXB4 es además
estimulador de colonias granulocíticas (G- importante en la auto-renovación celular. Por
CSF), las células se diferencian en otro lado, HOXB6 y HOXB7 parecen tener una
neutrófilos, en tanto que en presencia de función más tar día en la jerarquía
interleuquina-5 se diferencian en hematopoyética, afectando la diferenciación
eosinófilos. granulocito vs monocito.
· Interleuquina-3 participa en la
diferenciación de la mayoría de las células El grupo de genes hoxc participa en eventos
blancas, pero tiene un rol prominente en la relacionados con la diferenciación linfoide
formación de basófilos. temprana y tardía. Hoxc4, por ejemplo, está
· Factor de estimulación macrofágico (M- presente tanto en progenitores como en
CSF), participa en la diferenciación a linfocitos T y B terminalmente diferenciados, en
monocito a partir de células progenitoras tanto que hoxc6 está expresado en células
granulocíticas/macrofágicas. maduras del linaje T per o no en sus
progenitoras.
3.8. Genes involucrados en la decisión de
linaje Familia de genes gata

Estudios en humanos destinados a la Es una familia de factores de transcripción con


determinación de la función específica de dominio de unión al DNA. De ellos, tres
factores de crecimiento en la hematopoyesis miembr os de la familia gata han sido
humana, han empleado técnicas de identificados como reguladores de la expresión
manipulación génica, ya sea sobre-expresando génica en células hematopoyeticas. GATA-1 está
o disminuyendo la expresión de genes. altamente expresado en células eritropoyéticas,
mastocitos y megacariocitos y su expresión es
Un gran número de genes se han descrito como crucial para eritropoyesis primitiva y definitiva.
reguladores de la decisión y maduración de un La pérdida de gata-1 causa anemia embrionaria

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fatal, debido al bloqueo de la maduración presencia de BMP-2 induce un microambiente
eritroide. GATA-2 también se expresa en células hematopoyético que contribuye el crecimiento
eritr oides tempranas, mastocitos y clonogénico de progenitores mieloides y
megacariocitos, pero además, se han observado linfoides. Además de los mencionados, otros
niveles particularmente elevados en células miembros de la familia TGF-β también participan
pluripotentes (CTH) y su expresión disminuye a con funciones específicas en las diferentes
medida que las células maduran. La alteración etapas de la hematopoyesis.
de los genes gata-2 causa letalidad en útero
debido a un defecto en la hematopoyesis El continuo interés por entender la regulación
temprana, implicándolo en la mantención de la de la hematopoyesis normal, ha llevado a los
función de la CTH. La expresión de gata-3 es investigadores a estudiar y descubrir múltiples
importante en la hematopoyesis de hígado fetal genes que actúan regulando los procesos
y se requiere para el desarrollo de linfocitos T. celulares en los diversos niveles de la jerarquía
hematopoyética. Un foco esencial de las
Familia de genes pax investigaciones ha sido la identificación de
genes relacionados con la capacidad de auto-
La familia de genes pax codifica para un grupo renovación de la CTH. Aunque los estudios
de factores de crecimiento que han sido realizados no han arrojado aún resultados
conservados a través de millones de años de concluyentes, se han postulado algunos genes
evolución y tienen un rol en desarr ollo como esenciales para la función de auto-
temprano. Las proteínas PAX participan en la renovación, habilidad particular de las células
regulación de la organogénesis y son un factor troncales. Un ejemplo es el gen foxd3 necesario
clave en la mantención de la pluripotencialidad para la pluripotencialidad celular. Una mutación
de las células troncales durante el desarrollo. en el gen foxd3 produce embriones de corta
Mutaciones en los genes pax causan defectos supervivencia, en los cuales, se forma parte del
importantes en organismos tan diversos como saco embrionario pero la masa interna que
moscas, ratones y humanos. contiene las células que formarán el cuerpo del
embrión no se expande lo suficiente como para
Uno de estos genes, pax-5, ha sido ampliamente generar el embrión. Interesantemente, la adición
estudiado en hematopoyesis, encontrándose que del gen normal de foxd3 restaura el desarrollo
su expresión es crucial para la determinación del embrionario normal. El gen foxd3, en conjunto
linaje linfoide B. La inactivación del gen pax-5 con otros identificados anteriormente, oct4, fgf4
convierte a los linfocitos B comprometidos en y sox2 parecen controlar la pluripotencialidad
progenitores hematopoyéticos tempranos de las células troncales en estadios tempranos
multipotenciales, sugiriendo que su expresión de la embriogénesis. La participación de estos
es necesaria en forma continua para mantener el genes sobre la capacidad de auto-renovación
linaje linfoide B. A nivel molecular, pax-5 cumple de CTH adultas, está aún siendo investigada.
un rol ambivalente, activando la expresión de
genes específicos del linaje linfoide B y 4. EL MICROAMBIENTE DE LA MÉDULA ÓSEA
reprimiendo la transcripción de genes de un linaje
inapropiado. El microambiente de la médula ósea está formado
por un endotelio particular y un tejido conectivo
Proteínas morfogénicas óseas estromal, combinado con citoquinas que regulan
la compartimentalización, proliferación y
Las proteínas morfogénicas óseas o “Bone diferenciación de las CTH. Una forma en que el
morphogenetic proteins” (BMPs) son miembros estroma medular contribuye a la hematopoyesis
de la familia de factor de crecimiento es debido a su alto contenido de matriz
transformante-β (TGF-β). Estas citoquinas extracelular rica en glicosamino-glicanos que une
regulan la proliferación celular, diferenciación, y distribuye factores de crecimientos, tales como
morfogénesis y apoptosis celular. Durante el factor estimulante de colonias granulocítica-
embriogénesis, estas proteínas participan en el mielocítica y diversas citoquinas.
desarrollo de tejidos y órganos, en tanto que
en tejidos maduros, mantienen la homeostasis En humanos, células de la médula encontradas
tisular. en relación al ambiente hematopoyético que no
tienen origen hematopoyético son:
En relación a hematopoyesis, se ha observado
que BMP-4 induce la formación de tejido a) Células vasculares de la médula ósea, que
embrionario hematopoyético, en tanto que la incluye células endoteliales, abluminales de

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