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Cuestionario.

1) Enumerar la composición química y explicar las instrucciones de preparación del


agar según el fabricante de agar :

a) Mac conkey

Composición química en g/L

Peptona 20.0
Lactosa 10.0 Sales biliares 2.5
Cloruro de sódico 5.0 Rojo neutro 0.05
Cristal violeta 0.001 pH del medio aprox 7.2

Instrucciones de preparación del fabricante

Añadir 52,5 g. de polvo a un litro de agua destilada y Ilevar a


ebullición. Esterilizar al autoclave durante 15 minutos a 121 C.
(vorquimica-SL, 1991)

b) Eosina azul de metileno (EMB)

Composición química en g/L

Lactosa 10.0 Azul de metileno 0.065


Fosfato dipotasico 2.0 Peptona 10.0
Eosina amarilla 0.4

Instrucciones de preparación del fabricante

Añadir 37,5 g. de polvo en un litro de agua destilada. Calentar hasta


ebullicion. Esterilizar 20 minutos a 121 °C. (vorquimica-SL, 1991)
C) Salmonella- Shiguella (SS)

Composición química en g/L

Extracto de carne 5
Peptona 5
Lactosa 10
Sales biliares 8.5
Citrato sódico 10
Tiosulfato sódico 8.5
Citrato férrico 1.0
Verde brillante 0.00033
Rojo neutro 0.025
Agar-agar 15.0

Instrucciones de preparación del fabricante

Anadir 63,1 g. de polvo a 1000 ml de agua destilada y dejar embeber


durante 15 minutos. Llevar a ebullición hasta que los sólidos estén
totalmente disueltos. NO ESTERILIZAR. Enfriar a unos 50° C y
verter en placas. Evítese el recalentamiento. (vorquimica-SL, 1991)

D) Agar TSI (Tres azucares)

Composición química en g/L


Peptona 20.0
Extracto de levadura 1,0
Lactosa 10,0
Sacarosa 10,0
Dextrosa 1,0
Cloruro sódico 5,0
Sulfato ferrico- amónico 0,3
Tiosulfato s6dico 0,42
Rojo fenol 0,025
Agar-agar 12.0

Instrucciones de preparación del fabricante

Disolver 59,7 g. de polvo en un litro de agua destilada y Ilevar a


ebullición. Distribuir en tubos y esterilizar a 121 ° C durante 15
minutos. Dejar solidificar con una corta cufia y fondo abundante.
E) Agar LIA (Lisina Hierro)

Composición química en g/L

Peptona de 5
gelatina
Extracto de 3
levadura
Glucosa 1
Lisina 10
Citrato de hierro y 0.5
amonio
Tiosulfato de sodio 0.04
Púrpura de 0.02
bromocresol
Agar 15.0

Instrucciones de preparación del fabricante

Suspender 35 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Dejar embeber


unos 15 minutos. Calentar cuidadosamente, agitando con frecuencia y hervir durante un
minuto hasta la disolución completa. Distribuir y esterilizar a 121 C durante 15 minutos.
Enfriar en pico de flauta dejando un fondo vertical apto para la punción. (vorquimica-SL,
1991)

F) Agar Citrato Simmons

Composición química en g/L

Citrato de sodio 2.0


Cloruro de sodio 5.0
Fosfato dipotásico 1.0
Fosfato monoamónico 1.0
Sulfato de magnesio 0.2
Azul de bromotimol 0.08
Agar 15.0

Instrucciones de preparación del fabricante

Suspender 24,2 g del medio deshidratado por litro de agua destilada. Dejar reposar 5
minutos y mezclar calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos. Distribuir en tubos y
esterilizar en autoclave a 121 C durante 15 minutos. Enfriar en posición inclinada.
G) Agar nutritivo

Composición química en g/L

Pluripeptona 5.0
Extracto de carne 3.0
Cloruro de sodio 8.0
Agar 15.0

Instrucciones de preparación del fabricante

Suspender 31 g de polvo por litro de agua destilada.


Mezclar y dejarreposar 5 minutos. Calentar suavemente agitando y hervir 1 o 2 minutos
hasta su disolución. Distribuir y esterilizar a 121 C durante 15 minutos. (vorquimica-SL,
1991).
2) Describir el fundamento bioquímico e interpretación de cada Agar en una tabla.

Agar Fundamento bioquímico Interpretación

En el medio de cultivo, las Esto produce un viraje del


Mac conkey peptonas, aportan los nutrientes color del indicador de pH (rojo
necesarios para el desarrollo neutro), la absorción en las
bacteriano, la lactosa es el hidrato colonias, y la precipitación de
de carbono fermentable, y la las sales biliares. Los
mezcla de sales biliares y el cristal microorganismos no
violeta son los agentes selectivos fermentadores de lactosa
que inhiben el desarrollo de gran producen colonias incoloras.
parte de la flora Gram positiva.
La diferenciación entre Muchas cepas de Escherichia
Eosina azul de organismos capaces de utilizar la coli y Citrobacter spp.
metileno (EMB) lactosa y/o sacarosa, y aquellos presentan un característico
que son incapaces de hacerlo, brillo metálico. Las cepas que
está dada por los indicadores utilizan la lactosa poseen
eosina y azul de metileno; éstos centro oscuro con periferia
ejercen un efecto inhibitorio sobre azulada o rosada, mientras
muchas bacterias Gram positivas. que las que no lo hacen son
incoloras.
Es un medio de cultivo selectivo y Los pocos microorganismos
Salmonella- Shiguella diferencial. La selectividad, esta fermentadores de lactosa
(SS) dada por la sales biliares y el capaces de desarrollar,
verde brillante, que inhiben el acidifican el medio haciendo
desarrollo de bacterias Gram virar al rojo el indicador de pH,
positivas, de la mayoría de los obteniéndose colonias rosadas
coliformes y el desarrollo invasor o rojas sobre un fondo
del Proteus spp.
El tiosulfato de sodio es el En el medio de cultivo, el
Agar TSI sustrato necesario para la extracto de carne y la
(Tres azucares) producción de ácido sulfhídrico, el pluripeptona, aportan los
sulfato de hierro y amonio, es la nutrientes adecuados para el
fuente de iones Fe3+ , los cuales desarrollo bacteriano. La
se combinan con el ácido lactosa, sacarosa y glucosa son
sulfhídrico y producen sulfuro de los hidratos de carbono
hierro, de color negro. fermentables.
En el medio de cultivo, la peptona El purpura de bromocresol, es
Agar LIA (Lisina y el extracto de levadura aportan el indicador de pH, el cual es
Hierro) los nutrientes para el desarrollo de color amarillo a pH igual o
bacteriano. La glucosa es el menor a 5.2, y de color violeta
hidrato de carbono fermentable, y a pH igual o mayor a 6.8. Por
la lisina es el sustrato utilizado decarboxilación de la lisina, se
para detectar la presencia de las produce la amina cadaverina,
enzimas decarboxilasa y que alcaliniza el medio y esto
deaminasa. produce el viraje del indicador
al color violeta.
El medio de cultivo es diferencial El desdoblamiento del
Agar Citrato Simmons en base a que los citratoda progresivamente,
microorganismos capaces de oxalacetato y piruvato. Este
utilizar citrato como única fuente último, en presencia de un
de carbono, usan sales de amonio medio alcalino, da origen a
como única fuente de nitrógeno, ácidos orgánicos que, al ser
con la consiguiente producción de utilizados como fuente de
alcalinidad. carbono, producen
carbonatosybicarbonatos
alcalinos. El medio entonces
vira al azul y esto es indicativo
de la producción de citrato
permeasa.
Es un medio usado para el cultivo El agregado de cloruro de
Agar nutritivo de microorganismos poco sodio permite el
exigentes en sus requerimientos enriquecimiento con sangre
nutricionales. No contiene de carnero u otras sustancias
inhibidores del desarrollo para facilitar el cultivo de
bacteriano. microorganismos exigentes.
3) Explicar sobre las técnicas de aislamiento en placas, es estrías, por dilución en medio
sólido, placa vertida, diseminación en placa.

a) La siembra en placas de Petri por rayado o estrías .

esta técnica se basa en la separación de los microorganismos al dispersar-por rayado sobre agar-
una muestra que los contiene, Para llevar a cabo la disgregación, se recoge una porción de la
muestra con un asa bacteriológica y se raya sobre una sección de una placa Petri; luego, se repite
el rayado en tres secciones más de la placa. En cada rayado, se toma la muestra de la sección
anterior por lo que se logra una disminución gradual en la cantidad de microorganismos
(Hernández, 2003).
b) Por dilución en medio sólido.

Primero se atraviesa todo el fondo del agar con el asa recta de inoculación, posteriormente este se
retira con un movimiento en "S" a través del agar que disemina el inoculo. Se utiliza el asa recta.

Esta técnica se aplica cuando se conoce de antemano que el microorganismo de interés se


encuentra en mayor cantidad que los demás. Para llevarla a cabo, se preparan varias diluciones de
la muestra y se incuban en el medio de cultivo adecuado para que crezca este microorganismo;
así, se logra que en alguna de las diluciones solo él aparezca.( Hernández, 2003)
c) Técnica de siembra en Placa vertida.

En esta técnica se hacen crecer los microorganismos en tubos, cada uno con una concentración
diferente, y se evalúa el tubo en el que las colonias crecieron en forma separada.

Como primer paso, se preparan suspensiones de la muestra en diversas diluciones y se coloca cada
una en un tubo con agar fundido, como se muestra en la figura 6, a. Luego, se mezcla
homogéneamente el contenido (el agar y el inóculo) de cada tubo y se vierte (no se siembra por
rayado) en una placa de Petri.

Por último, de esta dilución, se toma una muestra de las colonias y se siembra en una placa de
Petri, por rayado, para confirmar si el cultivo está puro. La conformación de pureza se puede
realizar por observación a simple vista (colonias de igual morfología), por observación
microscópica o mediante pruebas bioquímicas.( Madigan, 2009)
4) ¿cuál es la diferencia entre el agar y la gelatina?

Agar Gelatina
el agar es de origen vegetal la gelatina es de origen animal

está compuesta con algas no cambian de color ,quedan de un color


ámbar
su gelatinificacion es superior su gelanitificacion es baja

(Concepción Casado, 2012)

5)

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