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II GENERALIDADES
Después de determinar la longitud de onda a la cuál deben de realizarse las medidas, se calibra el
método midiendo una serie de patrones del constituyente en estudio. Generalmente se prepara una
solución diluida de la sustancia que se desea determinar, se pipetean cuidadosamente porciones de
esta solución, de distinto volumen, se añade el reactivo que forma color, y se ajustan las condiciones
para que se desarrolle el color en forma óptima, se diluye cada solución a un volumen
predeterminado en una fiola, y luego se mide la absorbancia de cada solución a la longitud de onda
analítica o de trabajo.
Las medidas de la absorbancia se realizan comúnmente utilizando un blanco, que debe ser idéntico a
la muestra en todo, excepto en que no debe contener el constituyente que se ha de determinar. El
blanco deberá contener los reactivos, aditivos, disolvente, etc., en la misma naturaleza y
concentración que las utilizadas en cada muestra desconocida en la que se desarrolle color. De esta
manera, las lecturas de las muestras están corregidas automáticamente para cualquier absorción
pequeña por acción de los reactivos y del disolvente. Con los datos absorbancia para las diferentes
concentraciones de las series patrón se construye una curva de calibrado. La cantidad de luz
absorbida por cada patrón se encuentra bien definida y se debe ajustar a ciertas leyes físicas
denominadas leyes fotométricas:
1.- “La relación entre la energía radiante transmitida, P, y la incidente, Po, es una constante
expresada como T, y se denomina TRANSMITANCIA”.
T = P / Po
2.- “La energía de radiación transmitida decrece en progresión geométrica cuando la longitud del
camino óptico aumenta en progresión aritmética”. Se expresa matemáticamente de la siguiente
manera:
log T = ab = A = - log T = - ( P/ Po ) = log ( Po/ P )
b) Ley Beer
Expresa la relación entre transmitancia y concentración de material absorbente, es decir, que la
transmitancia disminuye en progresión geométrica cuando la concentración aumenta en progresión
aritmética. Por tanto:
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Laboratorio de Análisis Instrumental en Ingeniería II
Donde:
T = transmitancia
a = absortividad del medio
b = Trayecto óptico
P = poder de radiación transmitida
Po= poder de radiación incidente.
III FUNDAMENTO
La obtención de la curva de calibrado y la demostración de la ley de Beer se determinan
experimentalmente, preparando una serie de soluciones patrones y midiendo la absorbancia de cada
solución a la longitud de onda analítica, máxima o de trabajo. Con los datos de absorbancia frente a
las concentraciones de los patrones se gráfica en un sistema cartesiano y la representación debe ser
una línea recta de pendiente positiva si cumple con la ley Beer.
IV ARREGLO EXPERIMENTAL
V APARATOS
Espectrofotométro : HACH DR 2800
Cubeta : 2.5 cm. De trayecto óptico
Región de trabajo : Espectro visible
Longitud de Onda de trabajo : 525 nm
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Laboratorio de Análisis Instrumental en Ingeniería II
VI MATERIALES
Fiolas de 100 y 250 ml.
Buretas por 25 ml.
VII REACTIVOS
Solución Stock O,100N de permanganato de potasio
Solución diluída de permanganato de potasio de 100 ppm .de manganeso
soluciones patrones.
VIII TECNICA
1.- Preparación de soluciones patrones
Preparar a partir de la solución Stock de KMnO4 0, 1000N una solución estandard diluida de 100 ppm
en manganeso para un volumen de 250 ml y luego por dilución preparar las soluciones patrones
siguientes:
CUADRO DE SOLUCIONES
(b) DIAGNOSTICO
Cada vez que se enciende el instrumento, se ejecuta automáticamente una
serie de pruebas de autodiagnóstico para asegurar el correcto
funcionamiento de los principales componentes del sistema
Este procedimiento, que dura unos dos minutos, autocomprueba el normal
funcionamiento del sistema, pruebas de lámpara, ajustes de filtros, la
calibración de las longitudes de onda y el voltaje. Los distintos tests que
funcionan correctamente se confirman con una marca de verificación.
Una vez completados los diagnósticos de puesta en mercha, aparece el
MENU PRINCIPAL
Si el instrumento detecta alguna desviación relativa a la última calibración,
es recomendable llevar a cabo una verificación del sistema.(pulsar la tecla
INICIO, esta verificación dura aproximadamente 6 minutos).
OPCION
1. MEMORIZAR APAGADO/ENCENDIDO los datos de medición se memorizan
automáticamente)
IX INTERPRETACIÓN DE DATOS
Para copiar la curva de trabajo obtenida en pantalla en función de los valores de absorbancia en el
eje de la ordenada frente a las concentraciones en partes por millón de manganeso en el eje de la
abcisa, presionar la tecla “COPY “.
Para seleccionar las soluciones patrones para la construcción de la curva de calibración es necesario
calcular el error relativo de la concentración o de la absorbancia que surge de un error fotométrico de
1 %, y se efectua a partir de la ecuación siguiente:
dA = dC = 0.434 dT
A C t log t
Donde:
dA = dC = error relativo de la concentración o de la absorbancia
A C
dT = error fotométrico de 1 %
t = transmitancia.
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Laboratorio de Análisis Instrumental en Ingeniería II
Informe de laboratorio No 2
DATOS:
Solución diluida : 100 ppm Mn
Longitud de onda de trabajo: 520 nm
Blanco : agua destilada
TABLA DE RESULTADOS
CUADRO DE MEDICIONES
*Soluciones diluidas
CURVA DE CALIBRACIÓN
CURVA DE CALIBRACION
3
2.5
2
Abs
1.5
1
0.5
0
0 2 4 6 8 10 12
concentracion (ppm)
MEDICIÓN
Para 1% de t
0.434(0.01)
= = 21.70
0.01 log(0.01)
Para 5% de t
0.434(0.01)
= = 6.67
0.05 log(0.05)
Para 10% de t
0.434(0.01)
= = 4.34
0.10 log(0.10)
Para 15% de t
0.434(0.01)
= = 3.51
0.15 log(0.15)
Para 20% de t
0.434(0.01)
= = 3.10
0.20 log(0.20)
Para 30% de t
0.434(0.01)
= = 2.77
0.30 log(0.30)
Para 40% de t
0.434(0.01)
= = 2.73
0.40 log(0.40)
Para 50% de t
0.434(0.01)
= = 2.88
0.50 log(0.50)
Para 60% de t
0.434(0.01)
= = 3.26
0.60 log(0.60)
Para 70% de t
0.434(0.01)
= = 4.00
0.70 log(0.70)
Para 80% de t
0.434(0.01)
= = 5.60
0.80 log(0.80)
Para 90% de t
0.434(0.01)
= = 10.54
0.90 log(0.90)
Para 95% de t
0.434(0.01)
= = 20.51
0.95 log(0.95)
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Laboratorio de Análisis Instrumental en Ingeniería II
TABULACIÓN DE DATOS
t Ac/c
95 20.51
Soluciones
90 10.54
muy diluidas
80 5.60
70 4.00
60 3.26 Soluciones
50 2.88 diluidas
40 2.73
30 2.77
20 3.10
15 3.51 Soluciones
10 4.34 concentradas
5 6.67
1 21.7
20
15
10
5
0
0 20 40 60 80 100
Transmitancia (t)
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Se aprecia que las concentraciones de los estándares deben de estar en un rango de 20 y 40 % de T
para poder desarrollar las practicas.
CONCLUSIONES
CUESTIONARIO
Todas las sustancias pueden absorber energía radiante. La absorción de las radiaciones
ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las moléculas, y es
característica para cada sustancia química. Además, no está de más mencionar el hecho de
que la absorción y trasmitancia de luz depende tanto de la cantidad de la concentración
como de la distancia recorrida. Definidas por las siguientes leyes:
Ley de Beer: La Ley de Beer declara que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo depende
de la concentración en la solución.
Ley de Lambert: En la Ley de Lambert se dice que la cantidad de luz absorbida por un objeto
depende de la distancia recorrida por la luz.
Ley de Bouguer-Beer-Lambert: Una ley muy importante es la ley de Bouguer-Beer-Lambert
(también conocida como ley Lambert Bouguer y Beer) la cual es solo una combinación de las
citadas anteriormente.
2.- Como obtiene y para que se utiliza una curva de calibración o de trabajo
4.- Señalar las razones por las cuáles se dan las limitaciones de la Ley de Beer
Es una ley límite (0.01 M) la distancia promedio entre las especies disminuye hasta el punto
en que cada una afecta la distribución de carga de sus vecinas alterando la capacidad de
absorción a una λ. En soluciones de baja concentración del absorbente pero a
concentraciones elevadas de otras especies (electrolitos), la gran proximidad de iones al
absorbente altera (interacciones electrostáticas) la absortividad molar. Este efecto se reduce
al diluir.
Se dan en la utilización y cuidado de las cubetas, deben de estar correctamente limpias, sin
huellas y sin ralladuras. Deben evitarse los ácidos concentrados que puedan atacarlas, y se
debe comprobar antes y después de la medida que no tengan burbujas ni partículas no
disueltas que pueden producir dispersión de la luz. Otro error puede producirse en el control
de la temperatura y tiempo.
- La temperatura influye dependiendo de qué reacción sea.
- El tiempo se debe de controlar cuando tenemos reacciones que tardan un tiempo en
producirse y al cabo de un tiempo decaen.
- También hay que tener en cuenta el orden de adición de los reactivos, porque puede
influir en la obtención de la absorbancia.
6.- Qué criterios se maneja para seleccionar las soluciones patrones para ser utilizadas en
un método espectrofotométrico
Tienen composición conocida. Deben tener elevada pureza. Debe ser estable a temperatura
ambiente. Debe ser posible su secado en estufa. No debe absorber gases. No debe
reaccionar con los componentes del aire. Debe reaccionar rápida y estequiométricamente
con el titulante. Debe tener un peso equivalente grande.
Δ𝐶 0.434 ∗ Δ𝑇
=
𝐶 𝑇 ∗ 𝑙𝑜𝑔𝑇
Donde
Δ𝑇= error fotométrico
T= transmitancia
Δ𝐶
= Error relativo
𝐶
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Laboratorio de Análisis Instrumental en Ingeniería II
% T Error
relativo Error relativo
1 0 0.07
5 0.06209136 0.06
10 0.0217 0.05
20 0.00833955
0.04
30 0.00489691
40 0.00338627 0.03
50 0.00255449 0.02
60 0.00203395 0.01
70 0.00168013 0
80 0.00142531 0 20 40 60 80 100
90 0.00123378
95 0.00115497
La ley de Bourguer-Lambert-Beer predice, para una longitud de onda constante y paso óptico
fijo, una relación lineal entre Absorbancia y Concentración conpendiente en el intercepto
cero. Sin embargo esta ley sólo se cumple estrictamente o está limitada para soluciones
diluidas, generalmente concentraciones menores o iguales que 10-2 M. La suposición de que
e es independiente de la concentración de una sustancia para una longitud de onda dada,
sólo se cumple en soluciones diluidas ya que no es constante para soluciones concentradas
sino que depende del índice de refracción de la solución
9.- Cuando una curva de calibración no parte del origen señalar las razones que determinan
este tipo de curva
Cuando una curva de calibración no parte del orígenes debido a que no se tomó las medias
correctas de absorbancia en el espectroscopio, también puede ser debido a que no se calibro
el equipo correctamente o el blanco utilizado en la el experimento no era el adecuado para
medir la absorbancia.
PROCEDIMIENTO
Solución stock de
Preparar por dilución a partir de la solución diluida
KMnO4 0.1000 N
de 100 ppm, 100 mililitros de soluciones patrones
Coloque la cubeta
de muestra en el
soporte
portacubetas. Pulse Realizar mediciones de
medición y tome absorbancia de cada
nota del valor de patrón a la longitud de
absorbancia onda de trabajo