Universidad Indoamérica

Facultad de Ciencias y Medio Ambiente

Ingeniería en Biodiversidad y Recursos genéticos

Nombre: Kevin Valencia.

Carrera: V Biodiversidad y Recursos genéticos.
Fecha de entrega: 30 de octubre de 2018.

Tema: Prácticas de laboratorio

Contestar las siguientes preguntas:

Práctica # 1

1. ¿Por qué es importante preparar (homogeneizar) bien las muestras de tejidos al

inicio del proceso de extracción?

Es necesario fraccionar bien la muestra para que nuestros reactivos puedan

trabajar de una manera adecuada.

2. ¿Cuál es la función del isopropanol (alcohol isopropílico) en el proceso de

extracción?

Sirve para precipitar nuestro ADN (después se debe lavar el isopropanol con
etanol al 70%).

3. ¿Cuál es el objetivo de utilizar Proteinasa K y RNAsa, qué hace cada enzima?

Se utilizan para la digestión de proteínas en preparaciones de ADN.

 La Proteinasa K rompe los enlaces peptídicos en los lados carboxílicos de

los aminoácidos alifáticos, aromáticos o hidrófobos.
 La RNAsa se utiliza para inhibir las funciones de defensa que tiene el
ADN.

Práctica # 2

1. ¿Para qué sirve el Cloruro de magnesio (MgCl2)?

La polimerasa necesita de iones de magnesio para funcionar adecuadamente (es

decir aumentar la especificidad), asimismo mucho magnesio inhibe a la
polimerasa, y poco puede generar productos inespecíficos. 3

2. ¿De qué depende la temperatura del anillamiento?

La temperatura de fusión de una molécula dada depende principalmente de su

contenido de G+C, de sí se trata de DNA o RNA, híbridos RNA: RNA (que tienen
las temperaturas más altas), de las condiciones físico químicas de la solución en la
que se trabaja, así como de la longitud de las secuencias implicadas en el proceso
(a menor longitud, menor temperatura de fusión). 1

3. ¿Cuándo se utilizan controles negativos y positivos en una reacción de PCR?

Es muy frecuente que los PCRs se contaminen, por eso se suele trabajar con un
control negativo: un tubo extra al que se le agreguen todos los reactivos utilizados
en el PCR, excepto ADN. Si en esta muestra hay amplificación significa que en
algún reactivo hay restos de ADN o de producto de PCR que está contaminando el
experimento. También se utiliza un control positivo: tubo que contiene ADN de
una muestra que haya amplificado adecuadamente y cuyo patrón de bandas es
conocido. De esta manera, puede esperarse que si la reacción se llevó a cabo
correctamente, esta muestra siempre salga. 2

Práctica # 3

1. ¿Para qué se utiliza el tinte SybrSafe?

El SybrSafe es un colorante de cianina, que se utiliza como un tinte de

identificación de ADN.

2. ¿Qué sucede si aumentamos solamente la concentración de la agarosa en el

gel?

Nuestra solución se volvería demasiado espesa y por ende no permitiría la

apropiada migración de nuestras moléculas en el paso posterior que es la
electroforesis.

3. ¿Qué paso debe realizarse con más cuidado para evitar contaminación? ¿Qué
sucede si ocurre contaminación en el gel?

En general se debe tener cuidado en cada uno de los pasos, pero el pipeteado , la
mezcla de los reactivos y el traslado de la solución de ADN tinturada a las bandas
de la cámara de electroforésis son los que más peligro de contaminación pueden
presentar.

Si ocurre una contaminación en el gel, al momento del revelado se presentaran

errores de lecturas debido a que pueden aparecer franjas que no se deseaba
amplificar o segmentos que no deberían estar presentes.
Literatura citada

 1
Schrader, C., Schielke, A., Ellerbroek, L., & Johne, R. (2012). PCR
inhibitors–occurrence, properties and removal. Journal of applied
microbiology, 113(5), 1014-1026.
 2
Asuar, L. E. (2007). Guía práctica sobre la técnica de PCR. Ecología
molecular. Instituto Nacional de Ecología, 574p.
 3
Dieffenbach, C. W., & Dveksler, G. S. (2003). PCR primer: a laboratory
manual (No. Ed. 2). Cold Spring Harbor Laboratory Press.