INSTITUO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
“DR. GUILLERMO CARVAJAL SANDOVAL”

BIOQUÍMICA GENERAL

EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO SOBRE LA

VELOCIDAD DE LA REACCIÓN
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

AGUIRRE ALVARADO CHARMINA

GARCÍA NIETO JAIME ALAN

MARTINEZ GUTIERREZ JOHAN DANIEL
3FV1
SECCIÓN 3

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INTRODUCCIÓN.

Las enzimas son los catalizadores de las reacciones en los sistemas biológicos, las
proteínas más notables y de mayor especialización.
Las enzimas tienen un gran poder catalítico, a menudo muy superior al de los
catalizadores sintéticos o inorgánicos. Poseen un elevado grado de especificidad
respecto a sus sustratos, aceleran espectacularmente las reacciones químicas
específicas y funcionan en soluciones acuosas en condiciones muy suaves de
temperatura y pH. La mayoría de las enzimas son proteínas con la excepción de
un pequeño grupo de moléculas de RNA catalítico. Las enzimas se clasifican de
acuerdo con el tipo de reacción que catalizan. Todas las enzimas tienen números
y nombres formales del sistema E.C. ya la mayoría también tienen nombres
comunes.
CINÉTICA ENZIMÁTICA.
Determinación de la velocidad de reacción y del modo en que esta cambia en
respuesta a cambios en los parámetros experimentales.
CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO COMO FACTOR QUE AFECTA LA VELOCIDAD
DE LAS REACCIONES CATALIZADAS POR ENZIMAS.
Uno de los factores clave que afectan la velocidad de una reacción catalizada por
una enzima es la concentración de sustrato presente [S]. Sin embargo, el estudio
de los efectos de la concentración de sustrato es complicado debido al hecho de
que [S] cambia durante el transcurso de una reacción in vitro a medida que el
sustrato se convierte en producto.
Una aproximación que sirve para simplificar los experimentos cinéticos consiste
en medir la velocidad inicial.

Figura 1.- Velocidades

iniciales de las
reacciones
catalizadas
enzimáticamente.

El efecto de la variación de [S] sobre la velocidad uncial cuando se mantiene

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constante la concentración de enzima se muestra en la figura 2. A
concentraciones de sustrato relativamente bajas, la velocidad inicial aumenta
casi linealmente con el incremento de [S]. A mayores concentraciones de sustrato
la velocidad inicial aumenta a incremento cada vez menores en respuesta a
incrementos de [S]. Finalmente, se alcanza un punto más allá del cual se dan
incrementos muy pequeños de velocidad inicial a medida que aumenta. [S] Esta
meseta es la velocidad
máxima.

Figura 2.- Efecto de la

concentración de sustrato sobre
la velocidad inicial de una
reacción catalizada por una
enzima.

LA ECUACIÓN DE MICHAELIS
– MENTEN:

Es una dedición de la relación cuantitativa entre la velocidad inicial, la velocidad

máxima y la concentración inicial de sustrato, todos ellos relacionados a través
de la constante de Michaelis (Km). Obsérvese que Km tiene unidades de
concentración.

LA ECUACIÓN DE LINEWEAVER – BURK:

Para las enzimas que obedecen la relación de Michaelis – Menten la grafica de

1/Vo frente a 1/[S] da una línea recta (figura 3). Esta línea tiene una pendiente
igual a Km/Vmax la intersección sobre el eje 1/Vo es 1/Vmax y la intersección

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sobre el eje 1/[S] es igual a -1/Km. La presentación doble recíproca

INHIBICION ENZIMATICA.

Los inhibidores enzimáticos son moléculas que

interfieren en la catálisis, enlenteciéndola o

deteniendo las reacciones enzimáticas. Las
enzimas catalizan, virtualmente, todos los
procesos celulares por lo que es sorprendente que los inhibidores enzimáticos se
encuentren entre los agentes farmacéuticos más importantes.

OBJETIVO.

Identificar el efecto de la concentración del sustrato en la cinética enzimática.

Determinar la constante de Michaelis – Menten de forma gráfica por los métodos
de Michaelis – Menten y Lineweaver – Burk.

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Conocer el la inhibición que produce la anilina sobre la cinética enzimática de la
invertasa.

RESULTADOS.
Sustrato sin inhibidor.
De la ecuación de la gráfica de curva tipo de azúcares reductores despejamos a X.
y=7.49 x 10−3 +0.1104 x ………… Ec. AR.
y−7.49 x 10−3
x=
0.1104
Sustituimos en los valores de y las absorbancias obtenidas, a ese valor de x lo
dividimos entre 10. Estos nuevos valores serán la velocidad de unidades de
invertasa (UI), estas UI serán graficadas en el eje de las ordenadas (y).

Abs UI 1=0.125 UI 2 =0.241UI 3=0.23 5 UI 4 =0.251UI 5=0.418

0.146
0.274 UI 6=0.432
0.268
0.285
0.469
0.485
Para calcular la concentración de sacarosa el procedimiento es el
siguiente:
0.2 mol−1000mL x−0.10 mL
−5 −5
x=2 x 10 mol 2 x 10 mol−2mL
x−1000 mL x=0.01 mol …… [Sacarosa] en
el tubo 1
Bajo este mismo procedimiento se calcula la [Sacarosa] en cada tubo, obteniendo:

Estos resultados serán graficados en el eje de

[Sacarosa]
Tubo 1 0.01 mol las abscisas.
Tubo 2 0.02 mol
5
Tubo 3 0.03 mol
Tubo 4 0.05 mol
Tubo 5 0.08 mol
Tubo 6 0.10 mol
Con inhibidor.

Se hace el mismo procedimiento para calcular las UI, solo que esta vez con
valores de absorbancia de inhibidor:

Abs y−7.49 x 10−3

x=
0.072 0.1104
0.026 UI 1=0.0584 UI 2=0.0167 UI 3 =0.0611UI 4 =0.0484 UI 5 =0.0991
0.075
0.061 UI 6=0.0385
0.117
0.050

ANÁLISIS DE RESULTADOS.

La gráfica de Michaelis – Menten debería de demostrar la afinidad que tiene una

enzima por un sustrato, esto por medio de la constante de Michaelis, en donde si
el valor es bajo significa que la enzima es muy a fin a ese sustrato.
CURVA SIN INHIBIDOR.
Nuestra gráfica no representa exactamente una curva, ya que las UI aumentan su
valor de una manera muy drástica. Otra cosa que podemos interpretar de la
gráfica es la velocidad máxima de formación de producto a la que trabaja la
encima en UI, esta la podemos conseguir interpolando el punto donde la
velocidad parezca permanecer constante, la cual en nuestra grafica es
aproximadamente 0.429 UI, en este punto los sitios activos de la enzima están
saturados con sustrato. Ahora bien, para saber que tan a fin es la enzima al
sustrato es necesario conseguir la constante de Michaelis, esta la obtenemos
dividiendo la Vmax entre 2 e interpolando en el eje de las abscisas, para lo que
nosotros obtenemos una KM ≈ 0.0190 , pos supuesto que este valor no es

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exacto, solo una aproximación, lo que si nos indica es que es pequeño, por lo que
podemos decir que la enzima es muy a fin al sustrato.
CURVA CON INHIBIDOR.
Los resultados esperados al tener un inhibidor es la disminución de la actividad
de la enzima en el sustrato, ya que los inhibidores son moléculas que interfieren
en la catálisis, enlenteciéndola o deteniendo las reacciones enzimáticas. Como
teóricamente esperamos que la anilina demuestre ser un inhibidor no competitivo
es necesario definirlo, estos son inhibidores que solo se unen al complejo ES en
un sitio distinto del sitio activo. Gráficamente se vería una curva por debajo de la
que no tiene inhibidor. Lo que sucede en nuestra curva con inhibidor es que las
puntos obtenidos difieren mucho entre si y nunca se logra observar en la curva
un alcance a una velocidad constante, esto genera un gran problema para
obtener la Vmax´ y la KM´, lo que en teoría debió de haber sucedido. Es que
obtuviéramos una KM´ parecida a KM, esto sugiere que la presencia de nuestro
inhibidor (anilina) es de un tipo no competitivo, ya que cuando la las constantes
son parecidas el inhibidor se define de esa manera, este solo afectaría a la Vmax y
no a KM.

CONCLUSIÓN.

Determinamos la constante de afinidad de la enzima por el sustrato (Constante

de Michaelis).
Se determino el tipo de inhibición de la anilina.
Se diferencio la cinética enzimática en presencia y ausencia de un inhibidor.

BIBLOGRAFIA.

Lehninger, DL Nelson, MM Cox, Principios de Bioquímica (2ª ed), Omega, 1995.

Mathews, C., van Holde, K.E. 2013. Bioquímica. 3ra ed. Pearson Addison Wesley