6.

CLADOCERANS, NEMATODES AND TROCHOPHORA

LARVAE
Daan Delbare and Philippe Dhert
Laboratory of Aquaculture & Artemia Reference Center
University of Gent, Belgium
6.1. Daphnia and Moina
6.1.1. Biology and life cycle of Daphnia
Daphnia is a frequently used food source in the freshwater larviculture (i.e. for different
carp species) and in the ornamental fish industry (i.e. guppies, sword tails, black mollies and
plattys etc.)
Daphnia belongs to the suborder Cladocera, which are small crustaceans that are
almost exclusively living in freshwater. The carapace encloses the whole trunk, except the head
and the apical spine (when present). The head projects ventrally and somewhat posteriorly in a
beak-like snout. The trunk appendages (five or six pairs) are flattened, leaf-like structures
that serve for suspension feeding (filter feeders) and for locomotion. The anterior part of the
trunk, the postabdomen is turned ventrally and forward and bears special claws and spines
to clean the carapace (Fig. 6.1.). Species of the genus Daphnia are found from the tropics to
the arctic, in habitats varying in size from small ponds to large freshwater lakes. At present
50 species of Daphnia are reported worldwide, of which only six of them normally occur in
tropical lowlands.
The adult size is subjected to large variations; when food is abundant, growth continues
throughout life and large adults may have a carapace length twice that of newly-mature
individuals. Apart from differences in size, the relative size of the head may change
progressively from a round to helmet-like shape between spring and midsummer. From
midsummer to fall the head changes back to the normal round shape. These different forms
are called cyclomorphs and may be induced, like in rotifers, by internal factors, or may be the
result from an interaction between genetic and environmental conditions.
Normally there are 4 to 6 Instar stages; Daphnia growing from nauplius to maturation
through a series of 4-5 molts, with the period depending primarily on temperature (11 days at
10°C to 2 days at 25°C) and the availability of food. Daphnia species reproduce either by
cyclical or obligate parthenogenesis and populations are almost exclusively female. Eggs are
produced in clutches of two to several hundred, and one female may produce several clutches,
linked with the molting process. Parthenogenetic eggs are produced ameiotically and result in
females, but in some cases males can appear. In this way the reproductive pattern is similar
to rotifers, where normally parthenogenetic diploid eggs are produced. The parthenogenetic
eggs (their number can vary from 1 to 300 and depends largely upon the size of the female and
the food intake) are laid in the brood chamber shortly after ecdysis and hatch just before the
next ecdysis. Embryonic development in cladocerans occurs in the broodpouch and the larvae
are miniature versions of the adults. In some cases the embryonic period does not correspond
with the brood period, and this means that the larvae are held in the brood chamber even after
the embryonic period is completed, due to postponed ecdysis (environmental factors). For
different species the maturation period is remarkably uniform at given temperatures, ranging
from 11 days at 10°C to only 2 days at 25°C.
Factors, such as change in water temperature or food depreviation as a result of
population increase, may induce the production of males. These males have one or two
gonopores, which open near the anus and may be modified into a copulatory organ. The male
clasps the female with the first antennae and inserts the copulatory processes into the single,
median female gonopore. The fertilized eggs are large, and only two are produced in a single
clutch (one from each ovary), and are thick-shelled: these resting or dormant eggs being
enclosed by several protective membranes, the ephippium. In this form, they are resistant to
dessication, freezing and digestive enzymes, and as such play an important role in colonizing
new habitats or in the re-establishment of an extinguished population after unfavourable
seasonal conditions.
6.1.2. Nutritional value of Daphnia
The nutritional value of Daphnia depends strongly on the chemical composition of their
food source. However, since Daphnia is a freshwater species, it is not a suitable prey organism
for marine organisms, because of its low content of essential fatty acids, and in particular (n-3)
HUFA. Furthermore, Daphnia contains a broad spectrum of digestive enzymes such, as
proteinases, peptidases, amylases, lipases and even cellulase, that can serve as exoenzymes
in the gut of the fish larvae.
6.1.3. Feeding and nutrition of Daphnia
The filtering apparatus of Daphnia is constructed of specialized thoracic appendages for
the collection of food particles. Five thoracic limbs are acting as a suction and pressure pump.
The third and fourth pair of appendages carry large filter-like screens which filter the particles
from the water. The efficiency of the filter allows even the uptake of bacteria (approx. 1μm). In a
study on the food quality of freshwater phytoplankton for the production of cladocerans, it was
found that from the spectrum blue-greens, flagellates and green algae, Daphnia performed best
on a diet of the cryptomonads, Rhodomonas minuta and Cryptomonas sp., containing high
levels of HUFA (more than 50% of the fatty acids in these two algae consisted of EPA and DHA,
while the green algae were characterized by more 18:3n-3). This implies that the long-chained
polyunsaturated fatty acids are important for a normal growth and reproduction of Daphnia.
Heterotrophic microflagellates and ciliates up to the size of Paramecium can also be used as
food for Daphnia. Even detritus and benthic food can be an important food source, especially
when the food concentration falls below a certain threshold. In this case, the water current
produced by the animals swimming on the bottom whirls up the material which is eventually
ingested. Since daphnids seem to be non-selective filter feeders (i.e., they do not discriminate
between individual food particles by taste) high concentrations of suspended material can
interfere with the uptake of food particles.
6.1.4. Mass culture of Daphnia
6.1.4.1. General procedure for tank culture
Daphnia is very sensitive to contaminants, including leaching components from holding
facilities. When plastic or other polymer containers are used, a certain leaching period will be
necessary to eliminate toxic compounds.
The optimal ionic composition of the culture medium for Daphnia is unknown, but the
use of hard water, containing about 250 mg.l-1 of CO32-, is recommended. Potassium and
magnesium levels should be kept under 390 mg.l-1 and 30-240 μg. l-1, respectively. Maintenance
of pH between 7 to 8 appears to be important to successful Daphnia culture. To maintain the
water hardness and high pH levels, lime is normally added to the tanks. The optimal culture
temperature is about 25°C and the tank should be gently aerated to keep oxygen levels above
3.5 mg.l-1 (dissolved oxygen levels below 1.0 mg.l-1 are lethal to Daphnia). Ammonia levels
must be kept below 0.2 mg.l-1. Inoculation is carried out using adult Daphnia or resting eggs.
The initial density is generally
Normally, optimal algal densities for Daphnia culture are about 105 to 106 cells. ml-1
(larger species of Daphnia can support 107 to 109 cells.ml-1). There are two techniques to obtain
the required algal densities: the detrital system and the autotrophic system:
6.1.4.2. Detrital system
The “stable tea” rearing system is a culture medium made up of a mixture of soil,
manure and water. The manure acts as a fertilizer to promote algal blooms on which the
daphnids feed. One can make use of fresh horse manure (200 g) that is mixed with sandy loam
or garden soil (1 kg) in 10 l pond water to a stable stock solution; this solution diluted two to four
times can then be used as culture medium. Other fertilizers commonly used are: poultry manure
(4 g.l-1) or cow-dung substrates. This system has the advantage to be selfmaintaining and the
Daphnia are not quickly subjected to deficiencies, due to the broad spectrum of blooming algae.
However, the culture parameters in a detrital system are not reliable enough to culture Daphnia
under standard conditions, i.e. overfertilization may occur, resulting in anoxic conditions and
consequently in high mortalities and/or ephippial production.
6.1.4.3. Autotrophic system
Autotrophic systems on the other hand use the addition of cultured algae. Green water
cultures (105 to 106 cells.ml-1) obtained from fish pond effluents are frequently used but these
systems show much variation in production rate mainly because of the variable composition
of algal species from one effluent to another. Best control over the culture medium is obtained
when using pure algal cultures. These can be monocultures of e.g. algae such as Chlorella,
Chlamydomonas or Scenedesmus, or mixtures of two algal cultures. The problem with these
selected media is that they are not able to sustain many Daphnia generations without the
addition of extra vitamins to the Daphnia cultures. A typical vitamin mix is represented in Table
6.1.in the order of 20 to 100 animals per litre.
To calculate the daily algal requirements and to estimate the harvesting time, regular
sampling of the population density must be routinely undertaken. Harvesting techniques can
be non-selective irrespective of size or age group, or selective (only the medium sized daphnids
are harvested, leaving the neonates and matured individuals in the culture tank).
Mass cultivation of Daphnia magna can also be achieved on cheap agro-industrial
residues, like cotton seed meal (17 g.l-1), wheat bran (6.7 g.l-1), etc. Rice bran has many
advantages in comparison to other live foods (such as microalgae): it is always available in
large quantities, it can be purchased easily at low prices, it can be used directly after simple
treatment (micronisation, defatting), it can be stored for long periods, it is easy to dose, and it
has none of the problems involved in maintenance of algal stocks and cultures.
In addition to these advantages, there is also the fact that rice bran has a high nutritional
value; rice bran (defatted) containing 24% (18.3%) crude protein, 22.8% (1.8%) crude fat, 9.2%
(10.8%) crude fibre, and being a rich source of vitamins and minerals. Daphnia can be grown on
this food item for an unlimited number of generations without noticeable deficiencies.
Defatted rice bran is preferred above raw rice bran because it prevents hydrolysis of the
fatty acids present and, consequently, rancidity of the product. Micronisation of the bran into
particles of less than 60 μm is generally carried out by treating an aqueous suspension (50
g.l-1) with a handmixer and filtering it through a 60 μm sieve, or by preparing it industrially by a
dry mill process. The suspension is administered in small amounts throughout a 24 h period: 1 g
of defatted rice bran per 500 individuals for two days (density: 100 animals.l-1). The food
conversion ratio has an average of 1.7, which implies that with less than 2 kg of dry rice bran
approximately 1 kg wet daphnid material can be produced (with a 25% water renewal per week;
De Pauw et al., 1981).
6.1.4.4. General procedure for pond culture
Daphnia can also be produced in ponds of at least 60 cm in height. To produce 1 ton of
Daphnia biomass per week, a 2500 m3 culture pond is required. The pond is filled with 5 cm of
sun-dried (for 3 days) soil to which lime powder is added at a rate of 0.2 kg lime powder per ton
soil. After this the pond is then filled with water up to 15 cm. Poultry manure is added to the
ponds on the 4th day at a rate of 0.4 kg.m-3 to promote phytoplankton blooms. Fertilization of the
pond with organic manure instead of mineral fertilizers is preferred because cladocerans can
utilize much of the manure directly in the form of detritus. On day 12 the water level is raised to
50 cm and the pond is fertilized a second time with poultry manure (1 kg.m-3). Thereafter,
weekly fertilization rates are maintained at 4 kg poultry manure per m-3. In addition, fresh cow
dung may also be used: in this instance a suspension is prepared containing 10 g.l-1, which is
then filtered through a 100 μm sieve. During the first week a 10 l extract is used per day per ton
of water; the fertilization increasing during the subsequent weeks from 20 l.m-3.day-1 in the
second week to 30 l.m- 3.day-1 in the following weeks.
The inoculation of the ponds is carried out on the 15th day at a rate of 10 daphnids per
litre. One month after the inoculation, blooms of more than 100 g.m-3 can be expected. To
maintain water quality in these ponds, fresh hard water can be added at a maximum rate of 25%
per day. Harvesting is carried out by concentrating the daphnids onto a 500 μm sieve. The
harvested biomass is concentrated in an aerated container (< 200 daphnids.l-1). In order to
separate the daphnids from unfed substrates, exuviae and faecal material, the content of the
container is brought onto a sieve, which is provided with a continuous circular water flow. The
unfed particles, exuviae and faeces will collect in the centre on the bottom of the sieve, while the
daphnids remain in the water column. The unwanted material can then be removed by using a
pipette or sucking pump. Harvesting can be complete or partial; for partial harvesting a
maximum of 30% of the standing crop may be harvested daily.
6.1.4.5. Contamination
Daphnia cultures are often accidentally contaminated with rotifers. In particular
Brachionus, Conochilus and some bdelloids may be harmful, (i.e. B. rubens lives on daphnids
and hinders swimming and food collection activities). Brachionus is simply removed from the
culture by flushing the water and using a sieve of appropriate mesh size as Daphnia is much
bigger than Brachionus. Conochilus, on the other hand, can be eliminated by adding cow dung
to the culture (lowering the oxygen levels). Bdelloids are more difficult to remove from the
culture since they are resistant to a wide range of environmental conditions and even drought.
However, elimination is possible by creating strong water movements, which bring the bdelloids
(which are bottom dwellers) in the water column, and then removing them by using sieves.
6.1.5. Production and use of resting eggs
Resting eggs are interesting material for storage, shipment and starting of new Daphnia
cultures. The production of resting eggs can be initiated by exposing a part of the Daphnia
culture to a combination of stressful conditions, such as low food availability, crowding of the
animals, lower temperatures and short photoperiods. These conditions are generally obtained
with aging populations at the end of the season. Collection of the ephippia from the wild can be
carried out by taking sediment samples, rinsing them through a 200 μm sieve and isolating the
ephippia under a binocular microscope. Normally, these embryos remain in dormancy and
require a diapause inhibition to terminate this status, so that they can hatch when conditions are
optimal. Possible diapause termination techniques are exposing the ephippia to low
temperatures, darkness, oxygen and high carbon dioxide concentrations for a minimal period of
several weeks (Davison, 1969).
There is still no standard hatching procedure for Daphnia. Generally the hatching
process is stimulated by exposing the ephippia to higher temperatures (17-24°C), bright white
light (70 W.m-2), longer photoperiods and high levels of dissolved oxygen. It is important,
however, that these shocks are given while the resting eggs are still in the ephippium. After
the shock the eggs may be removed from the ephippium. The hatching will then take place
after 1-14 days.
6.1.6. Use of Moina
Moina also belongs to the Cladocera and many of the biological and cultural
characteristics that have been discussed for Daphnia can be applied to Moina.
Moina thrives in ponds and reservoirs but primarily inhabits temporary ponds or ditches.
The period to reach reproductive maturity takes four to five days at 26°C. At maturity clear
sexual dimorphic characteristics can be observed in the size of the animals and the antennule
morphology. Males (0.6-0.9 mm) are smaller than females (1.0-1.5 mm) and have long graspers
which are used for holding the female during copulation. Sexually mature females carry only two
eggs enclosed in an ephippium which is part of the dorsal exoskeleton.
 Moina is of a smaller size than Daphnia, with a higher protein content, and of
comparable economic value. Produced biomass is successfully used in the larviculture of
rainbow trout, salmon, striped bass and by tropical fish hobbyists who also use it in a frozen
form to feed over sixty fresh and salt water fish varieties. The partial replacement of Artemia by
Moina micrura was also reported to have a positive effect during the larviculture of the
freshwater prawn Macrobrachium rosenbergii (Alam, 1992).
Enrichment of Moina can be carried out using the direct method, by culturing them on
baker's yeast and emulsified fish or cuttlefish liver oils. Experiments have shown that Moina
takes up (n-3) HUFA in the same way, although slower, than rotifers and Artemia nauplii,
reaching a maximum concentration of around 40% after a 24 h-feeding period.
6.2. Nematodes
The use of the free living nematode, Panagrellus redivivus as larval food has been
demonstrated successfully for several species, including Crangon crangon, juvenile king
shrimp (Penaeus blebejus), common carp (Cyprinus carpio) and silver carp
(Hypophthalmichthys molitrix).
P. redivivus is a suitable larval live food since it is small (50 μm in diameter). Moreover, it
has an amino acid profile that matches that of Artemia (Table 6.2.), while its EPA and DHA
content is respectively nearly a third and almost the same or a little higher of that of Artemia,
(Table 6.3.). P. redivivus can be cultured very simply in trays filled with 70 g of flour (10.8%
protein) per 100 cm2 , the latter kept humid by spraying with water. The culture medium is
supplemented weekly with 0.5 g baker’s yeast per 100 cm2, which should inhibit the growth of
nematophage fungi. The containers should be stored in a well ventilated room at a temperature
of 20-23°C. Contamination by insects can be prevented by covering the containers with cloth.
The nematodes are harvested daily for about 53 days using the same culture medium by
removal from the substrate with a spatula (Fig. 6.2.). A maximum daily production of 75-100 mg
per 100 cm2 is reached at week 3. For smaller cultures the nematodes can be harvested by
adding a small quantity of distilled water to the trays and decanting the suspended nematodes.
The nematodes have a short generation time ranging from 5-7 days and a high fecundity.
The nutritional quality of nematodes can be enhanced by the use of the bio-
encapsulation technique. Enrichment is simply carried out by adding the product to the culture
medium (direct enrichment) or by bringing the nematodes in an emulsion of the product (indirect
enrichment). Rouse et al. (1992) used for the direct enrichment a culture medium which was
fortified with a 10% fish oil emulsion, obtaining nematodes that had a significantly higher total
lipid content and elevated levels of (n-3) HUFA (i.e. 11.2% and 4.8% respectively; Table 6.3.).
The bioencapsulation technique can also be used to fortify the nematodes with
therapeutics (bio-medication). For example, nematodes can be placed in 1 l beakers with 500
ml of fresh artificial seawater and 5 g of Romet-30 premix (Hoffman - La Roche, Switzerland)
containing 25 % sulfadimethoxine, 5 % ormetoprim and 70 % rice bran carrier. After a 4 h boost
period, during which the nematodes have accumulated 0.25 μg of the drug per individual (0.1
μg.ind.-1 for Artemia nauplii), the nematodes are separated from the antibiotic carrier by
resuspension in seawater and centrifugation at 1500 rpm for 10 min. After a 10-20 min period
the animals have migrated to the top of the tube, where they can be collected with the use of
a pipet onto a 100 μm mesh screen. After rinsing with seawater, the nematodes can then be
fed to the larval predators.
6.3.1. Introduction
For some marine fish species (i.e. siganids, groupers, snappers) very small zoo-
plankton, such as trochophora larvae (Fig. 6.3.) need to be used as a starter feed, since the
commonly used rotifers are too big. Trochophora larvae of the Pacific oyster Crassostrea gigas
are 50 μm in size and free-swimming (slow circular swimming pattern) ciliated organisms which
have a high nutritional value for marine fish larvae. For example, trochophora larvae may
contain up to 15% (of total fatty acid) of both EPA and DHA.
6.3.2. Production of trochophora larvae
6.3.2.1. Mussel larvae
Unripe mussels are brought in acclimation tanks with flowing seawater, after the removal
of excess epifauna. The temperature is kept at 10-12°C for a minimum period of two weeks.
During the acclimation period the mussels are fed on algal suspensions of Dunaliella tertiolecta
and/or Chlamydomonas coccoides. The spawning of the animals is induced by bringing the
conditioned mussels in a plastic bucket and shaking them violently for 2 to 3 min. After returning
the stimulated mussels to the spawning tanks (lightly aerated static seawater at 14-15°C)
spawning takes place within 12 h. The trochophora larvae can be harvested after 24-48 h by
concentrating them on a 25 μm sieve. After 10 weeks the broodstock should be replaced, since
the gametes are reabsorbed as a result of temperature stress and inadequate food supply.
6.3.2.2. Pacific oyster and Manila clam larvae
Broodstock acclimation systems consist of 150-200 l fibre glass tanks, each stocked with
50 broodstock animals of 20-25 g each. The broodstock tanks are continuously provided with
preheated unfiltered natural seawater at a minimum rate of 1 l.min-1. Algae (Tetraselmis
sueccica, Skeletonema costatum and Thalassiosira pseudonana) are continuously added to the
seawater by means of a peristaltic pump. In the case of clams a substrate of sand and/or gravel
can be used, but this is not essential. Under controlled temperature conditions gametogenesis
and gamete maturation can be induced year round by submitting the bivalves to a sudden
temperature shock (increasing the temperature 2 to 4°C). Spawning will take place within 15
min. and the gametes are released into the tank. During this period the water flow must be
stopped in order to allow fertilization. A gentle aeration can be used to keep the gametes in
suspension.
Monitoring during the development is necessary to estimate the time of harvesting of the
trochophora larvae, which generally takes place after a few hours. The trochophores are
harvested from the incubation suspension by pouring the content of the incubation tank on a
submerged 35 μm sieve. After washing with pure preheated seawater the trochophora larvae
can be fed to the fish or shrimp larval tanks.
6.3.3. Quality control of the produced trochophora larvae
Obtaining good quality trochophores with good swimming behaviour and a high
nutritional value is important. Firstly, the broodstock must be fed with algae with a high
nutritional value. Secondly, spawning must be synchronized, as there is rapid loss in sperm
fertility. Thus, when males start spawning before the females, the males must be removed from
the container and left out of the water, so as to stop the male spawning; the males are put back
in the water when a sufficient number of females start to spawn. At no time should sperm older
than 30 minutes be used.
To have a better control over the quality of the trochophores, one can divide the
broodstock animals after the spawning shock over individual containers. After spawning is
completed the females should be taken out so as to let the eggs settle on the bottom. Clumps of
eggs must be separated to obtain good fertilization and this is achieved by pouring the content
of the dishes or beakers through a 60 μm mesh screen and collecting the individual eggs on a
15 μm mesh sieve. The eggs are then washed with clear seawater, screened on their quality
(eggs must hydrate within 10 min. in seawater and must have a uniformly dense, granular
appearance), and pooled. Sperm from various males is pooled to ensure a good genetic mix in
offspring. Fertilization is carried out by gently mixing 2 ml of a dense sperm suspension to 1 l of
egg suspension, after which the suspension is allowed to stand for several hours. Within this
period the fertilized eggs start to divide. However, densities of developing embryos should not
exceed 80,000.l-1.
6.3.4. Cryopreservation
Bivalve larvae can be cryopreserved at -196°C and used as live feed for later use.
Cryopreservation has been successfully achieved with trochophora larvae of Crassostrea
gigas and Tapes philippinarum. The larvae are equilibrated in a seawater solution of 2 M
dimethylsulfoxide (DMSO) with 0.06 M trehalose (cryo-protectans) for 10 minutes at 25°C
and are then sealed into polyethylene straws at a density of 15 and 50 million trochophores
each. The straws are then rapidly cooled from room temperature to 0°C and then from 0°C to
-12°C at a freezing rate of -1°C.min-1. The straws are then held at -12°C for 5 to 15 minutes
allowing equilibration of the temperature of the biomass. Finally, the trochophores are slowly
cooled at -2°C.min-1 to -35°C, after which they are allowed to equilibrate for 10 to 20 minutes
before being submerged in liquid nitrogen (-196°C) (Chao et al., 1995). Before use the content
of the straws is rapidly defrozen in a seawater bath at 28°C and after 1 h the actively swimming
trochophores can be administered to the fish larvae. Cryopreserved trochophores are also
commercially available as Trochofeed (Cryofeeds Ltd., Canada). They are produced from
certified disease-free broodstock oysters of selected genetic strains.

TERJEMAHANNYA
Daphnia adalah sumber makanan yang sering digunakan dalam budidaya air tawar (yaitu untuk
spesies ikan mas yang berbeda) dan industri ikan hias (yaitu guppies, ekor pedang, mollies hitam dan
platty dll)

Daphnia termasuk dalam subordo Cladocera, yaitu krustasea kecil yang hampir secara eksklusif
tinggal di air tawar. Karapas menutupi seluruh batang tubuh, kecuali kepala dan tulang belakang apikal
(bila ada). Kepala proyek ventrally dan agak posterior dalam moncong seperti paruh. Pelengkap trunk
(lima atau enam pasang) diratakan, struktur mirip daun yang berfungsi untuk pemberian makan
suspensi (pengumpan filter) dan untuk penggerak. Bagian anterior dari trunk, postabdomen dimatikan
secara ventrally dan maju dan memiliki cakar dan duri khusus untuk membersihkan karapas (Gambar
6.1). Spesies genus Daphnia ditemukan dari daerah tropis sampai ke Arktik, di habitat yang bervariasi
dari kolam kecil sampai danau air tawar yang besar. Saat ini 50 spesies Daphnia dilaporkan di seluruh
dunia, dimana hanya enam di antaranya yang biasanya terjadi di dataran rendah tropis.

Ukuran dewasa dikenai variasi besar; Ketika makanan berlimpah, pertumbuhan berlanjut
sepanjang hidup dan orang dewasa besar mungkin memiliki panjang karapas dua kali lipat dari orang
dewasa yang baru dewasa. Terlepas dari perbedaan ukuran, ukuran kepala relatif dapat berubah secara
progresif dari putaran ke bentuk seperti helm antara musim semi dan pertengahan musim panas. Dari
pertengahan musim panas hingga turun kepala berubah kembali ke bentuk bulat normal. Bentuk yang
berbeda ini disebut siklomorf dan dapat diinduksi, seperti pada rotifera, oleh faktor internal, atau
mungkin merupakan hasil dari interaksi antara kondisi genetik dan lingkungan.

Biasanya ada 4 sampai 6 tahap instar; Daphnia tumbuh dari nauplius sampai pematangan
melalui serangkaian 4-5 mol, dengan periode terutama bergantung pada suhu (11 hari pada suhu 10 ° C
sampai 2 hari pada suhu 25 ° C) dan ketersediaan makanan. Spesies Daphnia berkembang biak baik
dengan parthenogenesis siklis maupun obligat dan populasi hampir seluruhnya betina. Telur diproduksi
dalam cengkeraman dua sampai beberapa ratus, dan satu betina bisa menghasilkan beberapa
cengkeraman, terkait dengan proses molting. Telur partenogenetik diproduksi secara ameiotically dan
menghasilkan betina, namun pada beberapa kasus, jantan dapat muncul. Dengan cara ini pola
reproduksi mirip dengan rotifera, dimana telur diploid parthenogenetik biasanya diproduksi. Telur
partenogenetik (jumlah mereka dapat bervariasi dari 1 sampai 300 dan sangat tergantung pada ukuran
asupan makanan dan wanita) diletakkan di ruang induk sesaat setelah ecdysis dan menetas sesaat
sebelum eklisis berikutnya. Perkembangan embrio pada cladocerans terjadi pada broodpouch dan larva
adalah versi miniatur orang dewasa. Dalam beberapa kasus, periode embrio tidak sesuai dengan periode
induk, dan ini berarti larva tersebut dipelihara di ruang induk bahkan setelah periode embrio selesai,
karena ecdysis yang tertunda (faktor lingkungan). Untuk spesies yang berbeda, periode pematangan
sangat seragam pada suhu yang diberikan, mulai dari 11 hari pada suhu 10 ° C sampai 2 hari pada suhu
25 ° C.

Faktor-faktor, seperti perubahan suhu air atau penurunan makanan akibat kenaikan populasi,
dapat menyebabkan produksi jantan. Laki-laki ini memiliki satu atau dua gonopori, yang terbuka di dekat
anus dan dapat dimodifikasi menjadi organ kopulasi. Laki-laki menjepit wanita dengan antena pertama
dan memasukkan proses kopulasi ke dalam gonopori wanita median tunggal. Telur yang telah dibuahi
berukuran besar, dan hanya dua yang diproduksi dalam satu kopling (satu dari masing-masing indung
telur), dan dikupas dengan tebal: telur peristirahatan atau dorman ini ditutup oleh beberapa membran
pelindung, ephippium. Dalam bentuk ini, mereka tahan terhadap pencemaran, pembekuan dan enzim
pencernaan, dan memainkan peran penting dalam mengkolonisasi habitat baru atau dalam
pembentukan kembali populasi yang padam setelah kondisi musiman yang tidak menguntungkan.

6.1.2. Nilai gizi Daphnia

Nilai gizi Daphnia sangat bergantung pada komposisi kimia sumber makanan mereka. Namun,
karena Daphnia adalah spesies air tawar, ini bukan organisme mangsa yang cocok untuk organisme laut,
karena kandungan asam lemak esensial yang rendah, dan khususnya (n-3) HUFA. Selanjutnya, Daphnia
mengandung spektrum yang luas dari enzim pencernaan seperti proteinase, peptidase, amilase, lipase
dan bahkan selulase, yang dapat berfungsi sebagai exoenzym dalam usus larva ikan.

6.1.3. Pemberian makanan dan gizi Daphnia

Aparatus pemfilteran Daphnia dibangun dari pelengkap toraks khusus untuk pengumpulan
partikel makanan. Lima tungkai toraks bertindak sebagai pompa hisap dan tekanan.
Pasangan ketiga dan keempat dari pelengkap membawa layar seperti filter besar yang menyaring
partikel dari air Efisiensi saringan memungkinkan bahkan serapan bakteri (sekitar 1μm). Dalam sebuah
penelitian tentang kualitas makanan fitoplankton air tawar untuk produksi cladocerans, ditemukan
bahwa dari spektrum biru-hijau, flagel dan ganggang hijau, Daphnia paling baik melakukan diet
kriptomonad, Rhodomonas minuta dan Cryptomonas sp., Yang mengandung HUFA tingkat tinggi (lebih
dari 50% asam lemak dalam dua alga ini terdiri dari EPA dan DHA, sementara ganggang hijau ditandai
oleh lebih banyak 18: 3n-3). Ini menyiratkan bahwa asam lemak tak jenuh ganda berantai panjang
penting untuk pertumbuhan dan reproduksi Daphnia yang normal. Microflagellat heterogen dan ciliates
sampai ukuran Paramecium juga dapat digunakan sebagai makanan untuk Daphnia. Bahkan makanan
detritus dan bentik bisa menjadi sumber makanan yang penting, terutama saat konsentrasi makanan
turun di bawah ambang batas tertentu. Dalam hal ini, arus air yang dihasilkan oleh binatang berenang di
bagian bawah mendayung bahan yang akhirnya tertelan. Karena daphnids tampaknya bukan
pengumpan filter non-selektif (yaitu, mereka tidak membedakan antara partikel makanan individual
dengan rasa) konsentrasi tinggi dari bahan tersuspensi dapat mengganggu pengambilan partikel
makanan.

6.1.4. Budaya massa Daphnia

6.1.4.1. Prosedur umum untuk kultur tangki

Daphnia sangat sensitif terhadap kontaminan, termasuk komponen pelindian dari fasilitas
penahanan. Bila wadah plastik atau wadah polimer lainnya digunakan, periode pelindian tertentu
diperlukan untuk menghilangkan senyawa beracun.

Komposisi ionik yang optimal dari media kultur untuk Daphnia tidak diketahui, namun
penggunaan air keras, yang mengandung sekitar 250 mg.l-1 CO32-, direkomendasikan. Tingkat potasium
dan magnesium harus disimpan di bawah 390 mg.l-1 dan 30-240 μg. l-1, masing-masing. Pemeliharaan
pH antara 7 sampai 8 nampaknya penting untuk keberhasilan kultur Daphnia. Untuk menjaga tingkat
kekerasan air dan pH tinggi, kapur biasanya ditambahkan ke dalam tangki. Suhu kultur optimal sekitar
25 ° C dan tangki harus diangin dengan hati-hati agar kadar oksigen di atas 3,5 mg.l-1 (kadar oksigen
terlarut di bawah 1,0 mg.l-1 mematikan Daphnia). Tingkat amonia harus dijaga di bawah 0,2 mg.l-1. .
Inokulasi dilakukan dengan menggunakan Daphnia dewasa atau telur istirahat. Kepadatan awal
umumnya

Biasanya, kepadatan alga optimal untuk kultur Daphnia sekitar 105 sampai 106 sel. ml-1 (spesies
Daphnia yang lebih besar dapat mendukung 107 sampai 109 sels.ml-1). Ada dua teknik untuk
mendapatkan kerapatan alga yang dibutuhkan: sistem detrital dan sistem autotropik:

6.1.4.2. Sistem detrital

Sistem pemeliharaan "teh stabil" adalah media kultur yang terdiri dari campuran tanah, pupuk
dan air. Pupuk tersebut berfungsi sebagai pupuk untuk mempromosikan ganggang yang menjadi sumber
pakan daphnal. Seseorang dapat memanfaatkan kotoran kuda segar (200 g) yang dicampur dengan
tanah liat berpasir atau tanah kebun (1 kg) di perairan air 10 l ke larutan stok yang stabil; Larutan ini
yang diencerkan dua sampai empat kali kemudian bisa digunakan sebagai media kultur. Pupuk lain yang
umum digunakan adalah: kandang unggas (4 g.l-1) atau substrat sapi. Sistem ini memiliki keuntungan
untuk menjadi selfmaintaining dan Daphnia tidak cepat mengalami kekurangan, karena spektrum yang
luas dari ganggang mekar. Namun, parameter kultur dalam sistem detrital tidak cukup dapat diandalkan
untuk mengkultur Daphnia dalam kondisi standar, yaitu overfertilization dapat terjadi, mengakibatkan
kondisi anoksik dan akibatnya pada mortalitas tinggi dan / atau produksi ephippial.

6.1.4.3. Sistem autotrofik

 Sistem autotrofik di sisi lain menggunakan penambahan ganggang berbudaya. Kultur air hijau
(105 sampai 106 sels.ml-1) yang diperoleh dari limbah kolam ikan sering digunakan namun sistem ini
menunjukkan variasi dalam tingkat produksi terutama karena komposisi variabel spesies alga dari satu
limbah ke limbah lainnya. Kontrol terbaik atas medium kultur diperoleh bila menggunakan kultur alga
murni. Ini bisa jadi monokultur mis. ganggang seperti Chlorella, Chlamydomonas atau Scenedesmus,
atau campuran dua kultur alga. Masalah dengan media yang dipilih ini adalah bahwa mereka tidak dapat
mempertahankan banyak generasi Daphnia tanpa penambahan vitamin tambahan pada budaya
Daphnia. Campuran vitamin yang khas diwakili dalam Tabel 6.1. Pada urutan 20 sampai 100 hewan per
liter.

Untuk menghitung kebutuhan alga harian dan untuk memperkirakan waktu panen, reguler
Sampel dari kepadatan penduduk harus dilakukan secara rutin. Teknik pemanenan bisa jadi tidak selektif
terlepas dari ukuran atau kelompok umur, atau selektif (hanya daphnid berukuran medium yang
dipanen, meninggalkan neonatus dan individu matang di tangki kultur).

Budidaya massal tanaman Daphnia magna juga dapat dicapai pada residu agroindustri yang
murah, seperti makanan biji kapas (17 gl-1), dedak gandum (6,7 gl-1), dan lain-lain. Dedak padi memiliki
banyak keunggulan dibandingkan dengan makanan hidup lainnya ( seperti mikroalga): selalu tersedia
dalam jumlah banyak, bisa dibeli dengan mudah dengan harga murah, bisa digunakan langsung setelah
perawatan sederhana (micronisation, defatting), bisa disimpan dalam waktu lama, mudah dosisnya, dan
tidak ada masalah dalam pemeliharaan stok alga dan budaya.

Selain kelebihan ini, ada juga fakta bahwa dedak padi memiliki nilai gizi tinggi; dedak padi
(defatted) mengandung 24% (18,3%) protein kasar, 22,8% (1,8%) lemak kasar, 9,2% (10,8%) serat kasar,
dan menjadi sumber vitamin dan mineral yang kaya. Daphnia dapat ditanam pada makanan ini untuk
jumlah generasi yang tidak terbatas tanpa kekurangan yang nyata.

Susu dedak dedak lebih disukai daripada dedak padi mentah karena mencegah hidrolisis asam
lemak yang ada dan, akibatnya, ketengikan produk. Mikronisasi bekatul menjadi partikel kurang dari 60
μm umumnya dilakukan dengan memperlakukan suspensi berair (50 g.l-1) dengan handmixer dan
menyaringnya melalui saringan 60 μm, atau dengan membuatnya secara industri melalui proses
penggilingan kering. Suspensi diberikan dalam jumlah kecil selama periode 24 jam: 1 g dedak dedak
dedak per 500 individu selama dua hari (kepadatan: 100 hewan.l-1). Rasio konversi makanan rata-rata
1,7, yang menyiratkan bahwa dengan kurang dari 2 kg dedak padi kering sekitar 1 kg bahan dafnid basah
dapat diproduksi (dengan perpanjangan air 25% per minggu; De Pauw et al., 1981).

6.1.4.4. Prosedur umum untuk budidaya tambak

Daphnia juga bisa diproduksi di kolam setinggi 60 cm. Untuk menghasilkan 1 ton biomassa
Daphnia per minggu diperlukan kolam budidaya seluas 2.500 m3. Kolam diisi dengan 5 cm tanah kering
matahari (selama 3 hari) dimana bubuk kapur ditambahkan pada kecepatan bubuk kapur 0,2 kg per ton
tanah. Setelah itu kolam ini kemudian diisi dengan air hingga 15 cm. Pupuk unggas ditambahkan ke
kolam pada hari ke 4 pada tingkat 0,4 kg.m-3 untuk mempromosikan mekar fitoplankton. Pemupukan
kolam dengan pupuk organik bukan pupuk mineral lebih diutamakan karena cladocerans dapat
memanfaatkan sebagian pupuk secara langsung dalam bentuk detritus. Pada hari ke 12 tingkat air
dinaikkan sampai 50 cm dan kolam dibuahi kedua kalinya dengan pupuk unggas (1 kg.m-3). Setelah itu,
tingkat pemupukan mingguan dipelihara pada 4 kg kotoran unggas per m-3. Selain itu, kotoran sapi
segar juga dapat digunakan: dalam hal ini suspensi disiapkan mengandung 10 g.l-1, yang kemudian
disaring melalui saringan 100 μm. Selama minggu pertama ekstrak 10 l digunakan per hari per ton air;
pembuahan meningkat selama minggu-minggu berikutnya dari pukul 20.00 - 3.30-1 di minggu kedua
sampai 30 l.m- 3.day-1 dalam minggu-minggu berikutnya.

Inokulasi tambak dilakukan pada hari ke 15 dengan kecepatan 10 dafnid per liter. Satu bulan
setelah inokulasi, mekar lebih dari 100 g.m-3 bisa diharapkan. Untuk menjaga kualitas air di kolam ini,
air tawar segar bisa ditambahkan maksimal 25% per hari. Pemanenan dilakukan dengan memusatkan
daphnida ke saringan 500 μm. Biomassa dipanen terkonsentrasi dalam wadah aerasi (<200 daphnids.l-
1). Untuk memisahkan daphnida dari substrat yang tidak dilapisi, bahan exuviae dan feses, isi wadah
dibawa ke saringan, yang dilengkapi dengan aliran air melingkar yang kontinyu. Partikel yang tidak
dilapisi, exuviae dan kotoran akan dikumpulkan di bagian tengah saringan, sedangkan daphnida tetap
berada di kolom air. Bahan yang tidak diinginkan kemudian bisa dilepas dengan menggunakan pipet
atau pompa hisap. Pemanenan bisa lengkap atau parsial; untuk pemanenan parsial maksimal 30%
tanaman tegakan dapat dipanen setiap hari.

6.1.4.5. Kontaminasi

Kultur Daphnia sering kali tidak terkontaminasi dengan rotifera. Khususnya Brachionus,
Conochilus dan beberapa bdelloids mungkin berbahaya, (yaitu B. rubens tinggal di daphnids dan
menghalangi aktivitas renang dan pengumpulan makanan). Brachionus dilepaskan dari kultur dengan
cara menyiram air dan menggunakan saringan dengan ukuran mesh yang sesuai karena Daphnia jauh
lebih besar daripada Brachionus. Conochilus, di sisi lain, dapat dihilangkan dengan menambahkan
kotoran sapi ke dalam kultur (menurunkan kadar oksigen). Bdelloids lebih sulit dikeluarkan dari budaya
karena tahan terhadap berbagai kondisi lingkungan dan bahkan kekeringan. Namun, eliminasi
dimungkinkan dengan menciptakan gerakan air yang kuat, yang membawa bdelloids (yang merupakan
penghuni bawah) di kolom air.

6.1.5. Produksi dan penggunaan telur peristirahatan

Istirahat telur adalah bahan yang menarik untuk penyimpanan, pengiriman dan memulai budaya
Daphnia baru. Produksi telur peristirahatan dapat dimulai dengan mengekspos sebagian dari budaya
Daphnia ke kombinasi kondisi stres, seperti ketersediaan makanan rendah, kepadatan hewan, suhu
rendah dan photoperiods pendek. Kondisi ini umumnya diperoleh dengan populasi penuaan pada akhir
musim. Koleksi ephippia dari alam liar dapat dilakukan dengan mengambil sampel sedimen,
membilasnya melalui saringan 200 μm dan mengisolasi ephippia di bawah mikroskop teropong.
Biasanya, embrio ini tetap dalam dormansi dan memerlukan penghambatan diapause untuk
menghentikan status ini, sehingga bisa menetas saat kondisinya optimal. Kemungkinan teknik
penghentian diapakan mengekspos ephippia ke suhu rendah, kegelapan, oksigen dan konsentrasi
karbon dioksida tinggi untuk periode minimal beberapa minggu (Davison, 1969).
 Masih belum ada prosedur penetasan standar untuk Daphnia. Umumnya proses penetasan
distimulasi dengan mengekspos ephippia ke suhu yang lebih tinggi (17-24 ° C), cahaya putih terang (70
W.m-2), photoperiods lebih lama dan tingkat oksigen terlarut yang tinggi. Penting, bagaimanapun,
bahwa guncangan ini diberikan saat telur peristirahatan masih di ephippium. Setelah syok, telur bisa
dikeluarkan dari ephippium. Penetasan kemudian akan berlangsung setelah 1-14 hari.

6.1.6. Penggunaan Moina

Moina juga termasuk dalam Cladocera dan banyak karakteristik biologis dan budaya yang telah dibahas
untuk Daphnia dapat diterapkan ke Moina.

Moina tumbuh subur di kolam dan waduk tapi terutama menghuni kolam sementara atau parit.
Periode untuk mencapai kematangan reproduksi membutuhkan empat sampai lima hari pada suhu 26 °
C. Pada saat jatuh tempo karakteristik dimorfik seksual yang jelas dapat diamati dalam ukuran hewan
dan antennule morfologi. Laki-laki (0,6-0,9 mm) lebih kecil dari betina (1,0-1,5 mm) dan memiliki
penggorengan panjang yang digunakan untuk menahan wanita selama persetubuhan. Wanita dewasa
yang seksi hanya memiliki dua telur yang dilapisi dengan ephippium yang merupakan bagian dari
exoskeleton dorsal.

Moina berukuran lebih kecil dari Daphnia, dengan kandungan protein lebih tinggi, dan nilai
ekonomi yang sebanding. Biomassa yang dihasilkan berhasil digunakan dalam larviculture of rainbow
trout, salmon, bass bergaris dan oleh penggemar ikan tropis yang juga menggunakannya dalam bentuk
beku untuk memberi makan lebih dari enam puluh varietas ikan air tawar dan garam. Penggantian
sebagian Artemia oleh Moina micrura juga dilaporkan memiliki efek positif selama larviculture udang air
tawar Macrobrachium rosenbergii (Alam, 1992).

Pengayaan Moina dapat dilakukan dengan menggunakan metode langsung, dengan

membudidayakannya pada ragi roti dan minyak ikan olahan atau minyak ikan sotong. Percobaan telah
menunjukkan bahwa Moina mengambil (n-3) HUFA dengan cara yang sama, meskipun lebih lambat,
daripada rotifera dan Artemia nauplii, mencapai konsentrasi maksimum sekitar 40% setelah periode
pemberian makan 24 jam.

6.2. Nematoda

Penggunaan nematoda hidup gratis, Panagrellus redivivus sebagai makanan larva telah
dilakukan terbukti berhasil untuk beberapa spesies, termasuk crangon Crangon, udang raja muda
(Penaeus blebejus), ikan mas (Cyprinus carpio) dan ikan mas (Hypophthalmichthys molitrix).

P. redivivus adalah makanan larva hidup yang sesuai karena kecil (diameter 50 μm). Selain itu, ia
memiliki profil asam amino yang sesuai dengan Artemia (Tabel 6.2.), Sementara kandungan EPA dan
DHA masing-masing hampir sepertiga dan hampir sama atau sedikit lebih tinggi dari Artemia, (Tabel 6.3).
P. redivivus dapat dikultur dengan sangat sederhana dalam baki yang diisi dengan 70 g tepung (10,8%
protein) per 100 cm2, yang terakhir tetap lembab dengan cara menyemprotkan air. Media kultur
ditambahkan setiap minggu dengan ragi roti 0,5 g per 100 cm2, yang harus menghambat pertumbuhan
jamur nematofagus. Wadah harus disimpan di ruangan yang berventilasi baik pada suhu 20-23 ° C.
Kontaminasi oleh serangga bisa dicegah dengan menutup wadah dengan kain. Nematoda dipanen setiap
hari selama sekitar 53 hari dengan menggunakan media kultur yang sama dengan pengangkatan dari
substrat dengan spatula (Gambar 6.2.). Produksi harian maksimum 75-100 mg per 100 cm2 tercapai
pada minggu ke 3. Untuk kultur yang lebih kecil, nematoda dapat dipanen dengan menambahkan sedikit
air suling ke nampan dan menentukan nematoda yang ditangguhkan. Nematoda memiliki waktu singkat
mulai dari 5-7 hari dan fekunditas tinggi.

Kualitas gizi nematoda dapat ditingkatkan dengan menggunakan teknik bio-enkapsulasi.

Pengayaan hanya dilakukan dengan menambahkan produk ke media kultur (pengayaan langsung) atau
dengan membawa nematoda dalam emulsi produk (pengayaan tidak langsung). Rouse dkk. (1992)
digunakan untuk pengayaan langsung media kultur yang diperkaya dengan emulsi minyak ikan 10%,
mendapatkan nematoda yang memiliki kandungan lipid total secara signifikan lebih tinggi dan tingkat
hibrosa (n-3) HUFA (masing-masing 11,2% dan 4,8% masing-masing ; Tabel 6.3.).

Teknik bioencapsulation juga bisa digunakan untuk menguatkan nematoda dengan terapi (bio-
medicine). Sebagai contoh, nematoda dapat ditempatkan dalam 1 gelas beaker dengan 500 ml air laut
buatan segar dan 5 g Romet-30 premix (Hoffman - La Roche, Swiss) yang mengandung 25%
sulfadimethoxine, 5% ormetoprim dan 70% pengikat dedak padi. Setelah periode dorongan 4 jam,
selama nematoda telah mengumpulkan 0,25 μg obat per individu (0,1 μg.ind.-1 untuk Artemia nauplii),
nematoda dipisahkan dari pembawa antibiotik dengan resuspensi pada air laut dan sentrifugasi pada
1500 rpm. selama 10 menit Setelah periode 10-20 menit hewan telah bermigrasi ke bagian atas tabung,
di mana mereka dapat dikumpulkan dengan menggunakan pipet ke layar mesh 100 μm. Setelah dibilas
dengan air laut, nematoda kemudian bisa diumpankan ke predator larva.

6.3.1. pengantar

Untuk beberapa spesies ikan laut (yaitu siganids, groupers, snappers) kebun binatang yang
sangat kecil, seperti larva trochophora (Gambar 6.3) perlu digunakan sebagai pakan starter, karena
rotifera yang biasa digunakan terlalu besar. Larva trochophora dari tiram tiram Crassostrea gigas
berukuran 50 μm dan berenang bebas (slow circular swimming pattern) organisme bersilia yang
memiliki nilai gizi tinggi untuk larva ikan laut. Misalnya, larva trochophora mengandung 15% (total asam
lemak) dari EPA dan DHA.

6.3.2. Produksi larva trochophora

6.3.2.1. Larva mussel

Kerang mentah dibawa dalam tangki aklimatisasi dengan air laut yang mengalir, setelah
pengangkatan epifauna berlebih. Suhu disimpan pada suhu 10-12 ° C untuk jangka waktu minimum dua
minggu. Selama periode aklimasi, kerang diberi suspensi alga dari Dunaliella tertiolecta dan / atau
Chlamydomonas coccoides. Pemijahan hewan diinduksi dengan membawa kerang yang terkondisi dalam
ember plastik dan menggoyangnya dengan keras selama 2 sampai 3 menit. Setelah mengembalikan
kerang yang dirangsang ke tangki pemijahan (air laut statis dengan aerasi ringan pada 14-15 ° C)
pemijahan berlangsung dalam waktu 12 jam. Larva trochophora dapat dipanen setelah 24-48 jam
dengan memusatkan mereka pada ayakan 25 μm. Setelah 10 minggu induk harus diganti, karena gamet
diserap kembali sebagai akibat tekanan suhu dan persediaan makanan yang tidak adekuat.

6.3.2.2. Tiram Pasifik dan larva jambul Manila

Sistem aklimatisasi induk terdiri dari 150 mm tangki serat gelas, masing-masing ditebar dengan
50 induk induk masing-masing 20-25 g. Tangki induk terus disediakan dengan air laut alami yang tidak
difilter dengan suhu minimal 1 l.min-1. Alga (Tetraselmis sueccica, Skeletonema costatum dan
Thalassiosira pseudonana) terus ditambahkan ke air laut dengan menggunakan pompa peristaltik.
Dalam kasus kerang, substrat pasir dan / atau kerikil bisa digunakan, tapi ini tidak penting. Pada kondisi
suhu terkendali gametogenesis dan pematangan gamet dapat diinduksi sepanjang tahun dengan
mengirimkan bivalvia ke kejutan suhu mendadak (meningkatkan suhu 2 sampai 4 ° C). Pemijahan akan
berlangsung dalam waktu 15 menit. dan gamet dilepaskan ke dalam tangki. Selama periode ini aliran air
harus dihentikan agar memungkinkan pembuahan. Sebuah aerasi lembut dapat digunakan untuk
menjaga gamet dalam suspensi.

Pemantauan selama pengembangan diperlukan untuk memperkirakan waktu pemanenan larva

trochophora, yang umumnya terjadi setelah beberapa jam. Trochophores dipanen dari suspensi inkubasi
dengan menuangkan isi tangki inkubasi pada saringan 35 μm terendam. Setelah dicuci dengan air laut
murni yang telah diawetkan, larva trochophora dapat diumpankan ke tangki larva ikan atau udang.

6.3.3. Kontrol kualitas larva trochophora yang dihasilkan

Mendapatkan trochophores berkualitas baik dengan perilaku renang yang baik dan nilai gizi
yang tinggi sangat penting. Pertama, induk harus diberi makan alga dengan nilai gizi tinggi. Kedua,
pemijahan harus disinkronisasi, karena ada kesuburan cepat dalam kesuburan sperma. Jadi, ketika laki-
laki mulai bertelur sebelum betina, jantan harus dikeluarkan dari wadah dan ditinggalkan keluar dari air,
sehingga menghentikan pemijahan laki-laki; Laki-laki dimasukkan kembali ke dalam air saat sejumlah
betina cukup mulai bertelur. Tidak lama sperma harus lebih tua dari 30 menit.

Untuk memiliki kontrol yang lebih baik terhadap kualitas trochophores, seseorang dapat
membagi induk hewan setelah terjadi kejutan pemijahan atas wadah individu. Setelah pemijahan
selesai, betina harus dibawa keluar agar telur bisa tenang di bagian bawah. Gumpalan telur harus
dipisahkan untuk mendapatkan pemupukan yang baik dan ini dicapai dengan menuangkan isi piring atau
gelas melalui layar mesh 60 μm dan mengumpulkan telur masing-masing pada saringan mesh 15 μm.
Telur kemudian dicuci bersih dengan air laut jernih, disaring dengan kualitasnya (telur harus dihidrasi
dalam waktu 10 menit di air laut dan harus memiliki tampilan padat dan padat, dan disatukan. Sperma
dari berbagai jantan dikumpulkan untuk memastikan adanya campuran genetik yang baik pada
keturunannya. Pemupukan dilakukan dengan mencampur 2 ml suspensi sperma padat secara perlahan
sampai 1 l suspensi telur, setelah itu suspensi dibiarkan selama beberapa jam. Dalam periode ini, telur
yang telah dibuahi mulai membelah. Namun, kepadatan pengembangan embrio tidak boleh melebihi
80.000 l-1.
6.3.4. Kriopreservasi

Bivalve larva dapat diawetkan pada suhu -196 ° C dan digunakan sebagai pakan hidup untuk
penggunaan selanjutnya. Kriopreservasi telah berhasil diraih dengan larva trochophora Crassostrea gigas
dan Tapes philippinarum. Larva diseimbangkan dalam larutan air laut 2 M dimetilsulfoksida (DMSO)
dengan 0,06 M trehalosa (pelindung krio) selama 10 menit pada 25 ° C dan kemudian disegel menjadi
jerami polietilena pada kepadatan masing-masing 15 dan 50 juta trochophora. Sedotan kemudian
didinginkan dengan cepat dari suhu kamar sampai 0 ° C dan kemudian dari 0 ° C sampai -12 ° C pada laju
pembekuan -1 ° Cmin-1. Sedotan kemudian ditahan pada suhu -12 ° C selama 5 sampai 15 menit yang
memungkinkan ekuilibrasi suhu biomassa. Akhirnya, trochophores secara perlahan didinginkan pada
suhu -2 ° Cmin-1 sampai -35 ° C, setelah itu mereka diizinkan untuk menyeimbangkan selama 10 sampai
20 menit sebelum diendapkan dalam nitrogen cair (-196 ° C) (Chao et al ., 1995). Sebelum menggunakan
isi sedotan dengan cepat dicairkan di bak air laut pada suhu 28 ° C dan setelah 1 jam trofophores aktif
berenang dapat diberikan pada larva ikan. Cryopreserved trochophores juga tersedia secara komersial
sebagai Trochofeed (Cryofeeds Ltd, Kanada). Mereka diproduksi dari tiram induk bebas penyakit
bersertifikat dari strain genetik tertentu.