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METODOS NO CONCENCIONALES

DE IDENTIFICACION Y
DIAGNOSTICO MICROBIANO
MICROBIOLOGIA GENERAL

MSC: YENIS IBEBH PASTRANA PUCHE

ELVIS ROSA VERGARA RAMOS


MARIA ANGELICA SUAREZ OROZCO

UNIVERSIDAD DE CORDOBA
SEDE BERASTEGUI
CONTENIDO

1.Introduccion

2.Metodos convencionales de Identificación y diagnostico microbiano.

2.1. Métodos convencionales de identificación microbiano.

2.1.1. Clasificación de Métodos convencionales de identificación microbiano.

2.2. Métodos Convencionales de diagnóstico microbiano.

2.2.1. Clasificación de Métodos Convencionales de diagnóstico microbiano.

2.3. Automatización de métodos convencionales de identificación y diagnostico microbiano.

2.4. Ventajas y Desventajas.

3.Metodos no convencionales de identificación y diagnostico microbiano.

3.1. Métodos no convencionales de identificación microbiano.

3.1.1. Métodos de identificación según el tiempo empleado.

3.1.1.1. Métodos muy rápidos.

3.1.1.2. Métodos Rápidos

3.1.1.2.1. Sistemas miniaturizados.

3.1.1.2.2. Sistemas automatizados.

3.2. Métodos no convencionales de diagnóstico microbiano.

3.3. Ventajas y Desventajas.

4.Inovacion.

5.Vocabulario.

6.Webgrafia-Bibliografia.

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1.INTRODUCCION

One of the fundamental tasks of the microbiology laboratory is the application of a precise methodology
that allows the identification of the microorganisms involved in clinical processes associated with
infections or those that are related to man. In order to identify the etiological agent responsible for the
infectious process and to know the pathogenic implications.

2.METODOS CONVENCIONALES DE IDENTIFICACION Y DIAGNOSTICO MICROBIANA

2.1 METODOS CONVENCIONALES DE IDENTIFICACION MICROBIANA

Actualmente, la identificación bacteriana se realiza por medio de métodos convencionales, basados en


las características fenotípicas, puesto que su realización y coste los hace más asequibles. Los
esquemas tradicionales de identificación fenotípica bacteriana se basan en las características
observables de las bacterias como su morfología, desarrollo, propiedades bioquímicas y metabólicas.

De manera rutinaria los laboratorios de microbiología aplican técnicas fenotípicas que permiten lograr
los objetivos expuestos. Estos métodos están consolidados en los laboratorios de microbiología,
muestra algunas limitaciones que se observan de manera específica y más evidente para algún tipo de
microorganismo.

Estos métodos se utilizan en diferentes áreas, por ejemplo:

 En el área clínica.
 En la industria farmacéutica, cosmética y de alimentos.
 En investigación de nuevos microorganismos.

2.1.1. CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN MICROBIANA

 Métodos basados en criterios morfológicos:


Los rasgos morfológicos (estructurales), han ayudado a los taxonomistas por muchos años a
clasificar organismos.

 Métodos basados en pruebas bioquímicas:


Estas pruebas se fundamentan en demostrar si el microorganismo es capaz de fermentar
azúcares, la presencia de enzimas, la degradación de compuestos, la producción de
compuestos coloreados, etc.

 Métodos basados en tipificación con fagos:


La interacción entre un virus bacteriano (fago) y su célula bacteriana sensible es sumamente
específica, ya que el proceso de adsorción se encuentra mediado por receptores específicos
tanto en el virus como en la célula bacteriana.

 Métodos basados en pruebas serológicas:


Implican la utilización de preparaciones de inmunoglobulinas específicas provenientes del
suero o de un reactivo, y que pueden ser de gran utilidad en la identificación microbiana.

 Métodos basados en tinción diferencial:


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Un examen microscópico de una lámina teñida por medio de gram o de una tinción diferencial
es útil para obtener una información rápida sobre la calidad de un ambiente clínico.

2.2. METODOS CONVENCINALES DE DIAGNOSTICO MICROBIANO

El diagnóstico microbiológico es el conjunto de procedimientos y técnicas complementarias empleadas


para establecer la etiología del agente responsable de una enfermedad infecciosa.

2.2.1. CLASIFICACION DE LOS MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO MICROBIANO

 DIRECTOS:
Implica la demostración del agente, sus metabolitos o componentes antigénicos en los fluidos
orgánicos.
• Examen microscópico.
• Crecimientos en cultivos e identificación.
• Inmunofluorescencia directa (ID).

 INDIRECTOS:
Implica la demostración de la huella que el agente ha dejado en su contacto con el sistema
inmunocompetente.
• ELISA indirecta

• WESTERN BLOT (WB)

2.3. AUTOMATIZACION DE METODOS CONVENCIONALES

Reducir el gasto de material Aumentan el número de muestras a analizar, sin embargo, no disminuye
el tiempo necesario para completar cada ensayo El principal factor de elección será el número habitual
de muestras a procesar.

 Espectrometría de masas (MALDI-TOF):


Más laboratorios están implementando esta tecnología de espectrometría que, mediante el
análisis proteómico de cepas bacterianas y fúngicas, permite su identificación microbiana en
pocos minutos.

2.4. VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS MÉTODOS CONVENCIONALES.

Ventajas:

 Sensibilidad
 Bajo costo
 Facilidad de interpretación

Desventajas:
 Laboriosidad
 Grandes cantidades de medios de cultivo

 Demora en la obtención de datos

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3. MÉTODOS NO CONVENCIONALES DE IDENTIFICACION Y DIAGNOSTICO MICROBIANO

3.1. METODOS NO CONVENCIONALES DE IDENTIFICACIO MICROBIANA

Estos métodos son destinados a la detección, recuento, caracterización y su tipificación de


microorganismos, mediante los cuales se obtienen resultados de manera sencilla, fiable y en menor
tiempo que los métodos convencionales algunos de estos son de un mayor costo que los
convencionales, aunque estos permiten muchas veces tener una mejor estandarización y agilidad a la
hora de establecer diagnósticos más eficaces y oportunos.

3.1.1. METODOS DE IDENTIFICACION SEGÚN EL TIEMPO EMPLEADO.

3.1.1.1METODOS MUY RAPIDOS: Permiten obtener resultados incluso en menos de una hora.

 INMUNOLÓGICOS:
Los métodos inmunológicos o inmunoensayos son métodos analíticos basado en la reacción
Antígeno- Anticuerpo (Ag-Ac), los métodos inmunológicos son ampliamente utilizados en la
detección de patógenos en áreas clínicas, agrícolas y ambientales.
 Inmunoensayos Directos.
 Inmunoensayos con Reactivos Marcados o Indirectos.
 GENÉTICOS:
son métodos de detección directa de microorganismos en muestras clínicas se da la Identifican
un fragmento específico del genoma del microbio, también se da Identificación de
microorganismos tras su aislamiento por métodos convencionales.
Se dirigen a la detección de características celulares mucho más estables contenida en los
ácidos nucleicos.
 Técnicas de hibridación.
 Técnicas de amplificación.
 RIBOTIPADO:
El Ribotipado es un método que permite identificar y clasificar bacterias en función de los genes
del RNA ribosomal, los genes del rRNA se encuentran dentro de las regiones mejor
conservadas del genoma bacteriano.

3.1.1.2. METODOS RAPIDOS

Disminuyen uno o varios días frente a los protocolos tradicionales, permiten obtener resultados en 6-12
horas actúan amplificando los efectos del crecimiento activo de los microorganismos. Utilización de un
equipo que realiza una o varias tareas que habitualmente realiza un profesional.

3.1.1.2.1. SISTEMAS MINIATURIZADOS:

 SISTEMA API:
Los sistemas miniaturizados API son métodos rápidos que permiten la identificación de
microorganismos a través de la realización de diferentes pruebas bioquímicas.

[NOMBRE DEL AUTOR] 5


 BBL Enterotube II: Es un sistema de identificación listo para usar que se emplea en la
identificación de Enterobacteriaceae y otros bacilos gram negativos con resultado negativo a la
oxidasa.

 BBL Crystal: El sistema BBL Crystal para la identificación (ID) de bacterias gram-positivas (GP)
es un método de identificación en miniatura que utiliza substratos convencionales, fluorogénicos y
cromogénicos modificados. Se ha diseñado para la identificación de bacterias aerobias gram-
positivas aisladas frecuentemente de muestras clínicas.

 RapID ™ System: Son una línea completa de paneles de identificación manual rentables para un
amplio espectro de microorganismos, se pueden identificar microorganismos anaerobios, bacilos
gram-positivos, corineformes, entéricos, no fermentadores, estreptococos y levaduras todo en 4
horas.

3.1.1.2.2. SISTEMAS AUTOMATIZADOS

 FENOTIFICAS: Resultados a partir de 4 horas, Combinan reacciones enzimáticas y


bioquímicas

• VITEK: Incluye una extensa base de datos de identificación que le permite detectar un
amplio rango de microorganismos. Todas las etapas de identificación, desde las
lecturas hasta los registros están automatizados, optimizando el flujo de trabajo. Como
el sistema opera con tarjetas con códigos de barras podemos garantizar una
trazabilidad completa y se minimiza el riesgo de errores de transcripción.

• BIOLOG: Permite la prueba e identificación de bacterias aerobias Gram-negativas y


Gram-positivas en el mismo panel de prueba.
Se usa un protocolo simple de instalación de un minuto para cada muestra.

• PHOENIX: identificación de bacterias gram-positivas y gram-negativas, unos de los


mas completos

 GENOTIPICAS: Secuenciación del ARN 16 S

 MicroSEQ: es el componente de secuenciación del sistema de identificación


bacteriano MicroSEQ® 500 16S rDNA, que proporciona un método fácil de usar
basado en secuencias de ADN para identificar la mayoría de las bacterias.

2.2 METODOS NO CONVENCIONALES DE DIAGNOSTICO

 TÉCNICA ELISA:
ELISA se basa en el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una enzima, de forma que los
conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunológica como enzimática. Al estar uno de los
componentes (antígeno o anticuerpo) marcado con una enzima e insolubilizado sobre un soporte

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(inmunoadsorbente) la reacción antígeno-anticuerpo quedará inmovilizada y, por tanto, será
fácilmente revelada mediante la adición de un substrato especifico que al actuar la enzima
producirá un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un
espectrofotómetro o un colorímetro.

Los diferentes tipos de ELISA son los que se enumeran a continuación:

 Anticuerpos marcados:
 ELISA Directo
 ELISA Indirecto
 ELISA sándwich

 Antígeno marcado
 ELISA competitivo

 BIOLUMINISCENCIA
Mide niveles de ATP lo relaciona con niveles de contaminación, la bioluminiscencia es una tecnología
basada en la detección del ATP (adenosintrifosfato), molécula energética de todos los organismos
vivos, este sistema indica el nivel de limpieza en toda la extensión de la superficie por medida del ATP
de orígenes diversos

 SEPARACIÓN INMUNOMAGNÉTICA
Estas técnicas se basan en el uso de anticuerpos unidos a la superficie de unas esferas formadas por
un material supe paramagnético (es decir, que sólo son magnéticas en presencia de un campo
magnético) recubierto de un polímero. Los anticuerpos se unen de manera específica a un antígeno
presente en la superficie de un tipo celular concreto y, mediante un simple imán, se pueden separar las
células que se han unido a los anticuerpos de las demás, existen en el mercado dos sistemas de
separación de células basados en el uso de esferas supe paramagnéticas unidas a anticuerpos

 TÉCNICA ELFA (ENZYME LINKED FLUORESCENT ASSAY)


Unida a técnicas de inmuno-detección, inmunoconcentración y a captura específica mediante fagos La
interacción entre virus bacteriano (fago) y su célula la bacteria sensible es sumamente específica, ya
que el proceso de absorción se encuentra mediado por receptores específicos tanto en el virus como
en la célula bacteriana, se le añade una alícuota de un fago especifico, este puede ocasionar la lisis de
las bacterias. El uso de fagos específicos permite identificar y subclasificar bacterias dentro de una
misma especie

2.3 VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS MÉTODOS NO CONVENCINALES.

Ventajas

 Rapidez
 procesar elevado número de muestras / tiempo
 facilidad de uso
 límites de detección bajos
 precisión (sensibilidad y especificidad)

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Desventajas

 inversión inicial (equipamientos)


 a veces, necesidad de confirmación.
 a veces, difícil traducción cuantitativa de resultados.
3. INNOVACION

Investigadores de EE.UU. desarrollan un nuevo método para la detección rápida de patógenos


en los alimentos.

La detección rápida de patógenos en los alimentos Se trata de un test formado por un sensor con un
microscopio artificial capaz de detectar bacterias nocivas en ocho minutos

Un equipo de investigadores del Departamento de Ciencia y Tecnología de los Alimentos de la


Universidad de Cornell, en Nueva York, ha desarrollado un nuevo método que permite detectar la
presencia de patógenos, como la EscherichiaColi, en los alimentos en tan sólo unos minutos.

Se trata de un test, denominado "Biosensor para la detención rápida del EscherichiaColi O157:H7",
que está formado por un sensor con un microscopio artificial capaz de detectar éste y otros patógenos
en los alimentos en sólo ocho minutos. Richard A. Durst, director del estudio y profesor de química de
la CornellUniversity, asegura que su funcionamiento es similar al del test de embarazo.

Hasta ahora, la detección de bacterias nocivas para la salud en los productos era posible tras un largo
proceso que solía durar unas horas. Sin embargo, ahora es posible detectarlas en sólo unos minutos.
La base del nuevo test para detectar la presencia de E.coli es el liposoma, que en medicina se suele
usar para transportar fármacos terapéuticos en las células enfermas. Los liposomas contienen una
sustancia fluorescente y visible que, cuando se detecta el patógeno, ataca los anticuerpos.

Cuando el patógeno es detectado, el test cambia de color. El cambio es casi al instante, por lo que la
detección requiere sólo de algunos minutos. Los investigadores están trabajando también en una
nueva tecnología para detectar el CryptosporidiumParvum, un parásito intestinal que suele encontrarse
en el agua de abastecimiento y que suele causar diarrea.

4. VOCABULARIO

BacteriaP bacterium

Patogeno pathogen

Anticuerpos Antibodies

convencional conventional

diagnostico diagnosis

ensayo test

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Identificación identification

Métodos methods

microorganismos microorganisms

reacción reaction

técnica technique

5. WEBGRAFIA-BIBLIOGRAFIA

 www.academia.edu/5397941/microbiologia-de-alimentos.pdf

 http://www.elika.eus/datos/otros_docs_nan/Archivo242/detecci%C3%B3n%20pat%C3%B3g
enos2.pdf

 http://media.axon.es/pdf/65248.pdf

 http://www.losmicrobios.com.ar/microbios/diagnostico%20microbiologico.html

 http://confia.com.co/index.php/tecnologia/microbiologia

 http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1561-30032013000100009

 https://books.google.com.co/books?id=xzLQnBU6DOkC&pg=PA372&lpg=PA372&dq=metodos+ri
botipados&source=bl&ots=Kfk2DoTIec&sig=ygiVSgG4jk_NBAA51gyQoO5xx6A&hl=es&sa=X&ve
d=0ahUKEwjom4z0oJbbAhWNy1MKHbB0AMQQ6AEIZTAJ#v=onepage&q=metodos%20ribotipa
dos&f=false

 https://es.scribd.com/document/337668114/Clase-9-Metodos-de-Analisis-Microbiologico-en-
Alimentos.

 https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/4346480

 http://www.microbiosymas.com/ewExternalFiles/MDM%202018Info%20e-mail.pdf

 http://www.plancalidadproductospesqueros.es/uploads/ponencias3/controlmicrobiologico.pdf

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