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Método de esterilización para la preparación de medios de cultivo

Rojas Corona Rodrigo


Traconis Gómez Laura Susana
Universidad Politécnica del Valle de México
RESUMEN
La esterilización es una operación destinada a destruir todos los microorganismos
de un objeto de forma duradera. El objetivo de la esterilización es doble: controlar
los microorganismos y prevenir una eventual contaminación.1
La esterilización es importante en todos los experimentos de laboratorio ya que
con esto podemos contar con resultados confiables, pues la presencia de
microorganismos alteraría nuestras reacciones y resultados.
El presente método de esta práctica comprende en la esterilización, la cual se
llevo a cabo con el manejo del autoclave (recipiente cilíndrico que genera presión
con un cierre hermético), se esteriliza toda la instrumentación a utilizar, como
cajas Petri, tubos de ensayo, pipetas, caldo tripteína de soya y agar a 120°C
durante 15 minutos, para la erradicación de microorganismos presentes.
Después de esterilizar todo el material se almacenó en refrigeración.
PALABRAS CLAVE
Esterilización, microorganismos, controlar, prevenir, resultados, autoclave.
ABSTRACT
Sterilization is an operation designed to destroy all microorganisms of an object
lastingly. The goal of sterilization is twofold: to control microorganisms and prevent
possible contamination.1
Sterilization is important in all laboratory experiments since with this we can count
on reliable results, because the presence of microorganisms would alter our
reactions and results.
The present method of this practice includes in sterilization, which was carried out
with the use of the autoclave (cylindrical container that generates pressure with a
hermetic seal), sterilizes all the instrumentation to be used, such as Petri dishes,
test tubes, pipettes, triptein soy broth and agar at 120 ° C for 15 minutes, for the
eradication of microorganisms present.
After sterilizing all the material was stored in refrigeration.
INTRODUCCIÓN Para evitar posibles desastres, como
algún brote infeccioso causado por
El calor húmedo destruye los agentes potencialmente peligrosos.
microorganismos por coagulación de
sus proteínas celulares. El principal
método de esterilización que emplea 2.- ¿crees que las medidas de
calor húmedo es la esterilización por seguridad e higiene que se aplican en
vapor a presión (método del el laboratorio de microbiología
autoclave). experimental son las adecuadas para
el trabajo práctico?
Existen otros métodos de
descontaminación que emplean este Sí, son de suma importancia para
tipo de calor los cuales, aunque no desarrollar nuestras prácticas.
permiten la destrucción total de los
microorganismos, disminuyen la
carga microbiana que posee un 3.- ¿Cuál crees que sea la
material.La esterilización por vapor a importancia a nivel personal de
presión se lleva a cabo en cumplir con las reglas de seguridad e
un autoclave. Estos equipos emplean higiene?
vapor de agua saturado, a una
presión de 15 libras lo que permite Mantener nuestra salud e integridad
que la cámara alcance una resguardada.
temperatura de 121ºC. El tiempo de
esterilización usualmente es de 15
minutos, sin embargo, en algunas 4.- ¿Qué medidas de seguridad e
oportunidades, dadas las higiene crees que no se cumplen en
características del material, es las instalaciones del laboratorio de
necesario variar el tiempo de microbiología experimental? ¿Cómo
esterilización. Al aplicar a un podrías mejorarlas?
determinado material vapor de agua a
una presión de 15 lb (121ºC) por un
El movernos de manera brusca y
tiempo determinado, se produce la
derramar reactivos, al igual que
destrucción total de los
hablar demasiado mientras
microorganismosviables presentes en
realizamos las prácticas.
el mismo.

Tener mayor cuidado, ser más


1.- ¿por qué debemos seguir el
cautelosos a la hora de manejar los
reglamento de seguridad e higiene
reactivos y hablar menos mientras
dentro del laboratorio de
ejercemos la práctica
microbiología experimental?
correspondiente.
La eliminación de los
microorganismos puede efectuarse
OBJETIVO mediante procesos físicos o
Lograr la esterilización de la químicos. Los métodos físicos se
instrumentación que servirá para el incluyen en el término esterilización y
los métodos químicos en el concepto
sembrado del cultivo bacteriano.
de desinfección.2
MARCO TEÓRICO El método escogido para esterilizar
Esterilización un producto depende
fundamentalmente de su naturaleza y
Esterilización se define como la estabilidad frente al calor u otros
destrucción completa o eliminación agentes esterilizantes.2
total de los microorganismos Esterilización física. Este tipo de
patógenos y saprófitos que se esterilización suele llevarse a cabo
encuentran en el interior o en la mediante la aplicación de altas
superficie de objetos y sustancias. El temperaturas. Puede ser por calor
criterio práctico de la esterilidad es la húmedo o calor seco.4
ausencia de crecimiento microbiano

en un medio adecuado.2 Métodos físicos:3

La importancia de la esterilización 1. Calor seco (estufa u horno)


2. Calor Húmedo (autoclave)
Buena parte de los experimentos
3. Radiaciones ionizantes (gamma,
realizados en laboratorios involucra la
beta y ultravioleta)
mezcla de sustancias y sus
4. Ondas supersónicas (microondas
correspondientes reacciones. Para
odontológico)
que estas reacciones sean favorables
5. Filtración
o controladas se utilizan cantidades
6. Ebullición
específicas de sustancias
7. Flameo
compatibles.4
8. Micro esferas de vidrio

Esterilización química. Para llevar a


Si el material de laboratorio cuenta
cabo la esterilización química se
con los requerimientos de limpieza
utilizan sustancias, llamadas
los experimentos son exitosos. Por el
germicidas o biocidas. Estas
contrario, la presencia de bacterias,
sustancias debilitan la membrana
virus o microorganismos puede
celular de los virus y bacterias
alterar las reacciones y modificar los
atacándolos directamente. Los
resultados. Para evitar esto, es
neutralizan y eliminan las condiciones
necesario aplicar algún método de
favorables para su desarrollo.4
esterilización al material de
laboratorio. 4

Métodos químicos:3

Métodos de esterilización 1. Óxido de etileno


2. Plasma de peróxido de hidrógeno
3. Pastillas de formol
4. Soluciones químicas (algodón hidrófobo, gasa,
papelkraft) en un cesto
Métodos comprobatorios de la metálico. 2

esterilización 
Cerrar herméticamente la
tapa.2
Indicadores o controles físicos. El

control de la esterilización mediante Encender el sistema calórico y
indicadores físicos se lleva a cabo abrir la llave de escape para
mediante su colocación en el interior eliminar el aire (que es
del paquete a fin de comprobar la desplazado por el propio
temperatura, el tiempo de vapor), ya que si éste
esterilización y la presión en un permanece en el interior
equipo determinado y para lo cual alterará la relación temperatura
estos indicadores son calibrados a – presión.2
fin de detectar cualquier fallo, 
Asegurarse que salga todo el
mediante la incorporación de aire residual (hasta que
termómetros, manómetros, sensores comience a salir vapor de
de carga, etc., los cuales son de gran agua).
utilidad pero no constituyen un medio 
eficaz para comprobar la Inmediatamente cerrar la llave
esterilización y para lo cual se hace de escape de vapor.2
necesario usar como complemento 
Comienza a acumularse el
controles biológicos y demás vapor (indicado en el
métodos de control.3 manómetro ) y a aumentar la
temperatura.2
Indicadores o controles 
químicos. Son productos Cuando se llegue a la
comercialesconsistentes en temperatura y presión deseada
sustancias químicas que cambian de (120°C), se debe regular el gas
color (indicadores colorimétricos) si para mantener estos valores
se cumple un elemento clave del constantes. Si es un autoclave
proceso de esterilización, como por eléctrico se regula
ejemplo la temperatura necesaria.3 automáticamente mediante un
termorregulador.2

Algunos indicadores requieren más Transcurrido el tiempo
de un parámetro, como cierto tiempo necesario (15 a 20 minutos) se
de exposición y humedad, para corta la fuente calórica.2
cambiar de color. 3 
La llave de escape de vapor se
abre ligeramente para evacuar
Manejo del autoclave lentamente el vapor del
autoclave.2

Debe haber suficiente agua 
destilada en el fondo del Cuando a presión marque
autoclave.2 cero, se puede abrir el
autoclave y retirar el material

Colocar el material para evitar un
convenientemente tapado sobrecalentamiento.2
Cloruro de sodio 5g
Fosfato dipotásico 2.5 g
Dextrosa 2.5 g

pH final: 7.3 ± 0.2 a 25°C


La fórmula se puede ajustar
y/o complementar según sea
necesario para cumplir con
las especificaciones de
rendimiento.5
Figura 1.- Autoclave de laboratorio.2
Tabla 1.- Contenido energético del caldo
Caldo tripticasa soya tripticasa soya.5

El caldo de soya tríptico se utiliza


para el cultivo de una amplia variedad Agar nutritivo
de microorganismos en un entorno de
laboratorio. El caldo de soya tríptico El agar nutritivo se utiliza para el
no está destinado a ser utilizado en el cultivo de una variedad de
diagnóstico de enfermedades u otras microorganismos en un entorno de
condiciones en humanos. El caldo de laboratorio. El agar nutritivo no está
soya tríptico cumple con los requisitos destinado a ser utilizado en el
armonizados de las USP/EP/JP.5 diagnóstico de enfermedades u otras
condiciones en humanos.
El caldo de soya tríptico, un medio de
uso general, se denomina A principios de los 1900, la
comúnmente como agar de digerido Asociación Americana de Salud
de caseína-soya, y se abrevia como Pública (APHA) sugirió la fórmula del
TSB. Los clostridios y anaerobios no agar nutritivo como un medio de
esporulados crecen exuberantemente cultivo estándar utilizado en las
en este caldo cuando se incuban en pruebas de agua. El agar nutritivo
condiciones anaerobias. El TSB se sigue siendo un medio de uso general
recomienda para pruebas de ampliamente utilizado para el cultivo
contaminantes bacterianos en de microorganismos no fastidiosos. Si
cosméticos y cumple con las normas es necesario, se pueden agregar
establecidas en la industria enriquecimientos a este medio. El
alimentaria. 5 agar nutritivo, modificado mediante la
incorporación de 4-metilumbeliferil-β-
Fórmula Litro
D-glucurónido (MUG), se utiliza para
Digerido enzimático de 17 g la detección fluorogénica de
caseína Escherichia coli.

Digerido enzimático de harina 3g El agar nutritivo cumple con los


de soya métodos estándar de la APHA y la
Asociación de Químicos Analíticos
Oficiales (AOAC). El agar nutritivo se
especifica en muchos métodos  Mezcle bien.
estándar para pruebas de alimentos,  Autoclave a 120°C durante 15
agua y otros materiales6. minutos.
Fórmula Litro Preparación Agar:
Digerido enzimático de
gelatina
5g  Disolver 10 g de agar nutritivo
en 500ml de agua destilada.
Extracto de carne de res 3g  Mezclar perfectamente.
 Autoclave a 120°C durante 15
Agar 15 g minutos.
pH final: 6.8 ± 0.2 a 25°C
La fórmula se puede ajustar y/o
complementar según sea necesario Preparación:
para cumplir con las especificaciones
de rendimiento.6  Lavar, enjuagar y dejar secar
Tabla 2.- Contenido energético del agar el material.
nutritivo.6  Llenar los tubos de ensayo con
caldo nutritivo y/o agar (10ml)
c/u y cerrarlos perfectamente.
MATERIALES Y MÉTODOS  Envolver las cajas Petri, la
Material: pipeta y los tubos de ensayo
con papel kraft y asegurarlos
con cinta maskin.
 2 cajas de Petri de vidrio.  Identificar todo el material con
 3 tubos de ensayo de 16 x 150 el plumón indeleble (Equipo,
con rosca fecha y grupo)
 1 pipeta.  Poner todo el material dentro
 1 matraz Erlenmeyer de 500ml del autoclave.
con rosca.  Esterilizar a 120°C x 15
 Papel Kraft. minutos.
 Cinta maskin.  Después de esterilizar,
 Agua destilada. almacenar en refrigeración.
 Alcohol etílico.
 Plumones indelebles. Conclusión
 Caldo tripticasa de soya.
 Agar. Reiterando los parámetros
 Autoclave. (120ºCx15min) el tiempo establecido
a la temperatura señalada, y
efectuando el análisis pertinente.
Cabe destacar que el funcionamiento
Preparación del caldo tripticasa soya: del autoclave fue correcto, logrando
así la eficiente esterilización de los
 Disuelva 15 g del medio en instrumentos representativos, se
500mlde agua destilada. manifiesta satisfactorio el proceso, y
el método utilizado, obteniendo así 3. http://uvsfajardo.sld.cu/tema-7-
los resultados esperados en la metodos-de-esterilizacion
realización de esta práctica. 4. https://www.quiminet.com/articul
os/asegure-la-correcta-
esterilizacion-del-material-de-
Bibliografía laboratorio-2805814.htm
5. https://foodsafety.neogen.com/sp/
1. https://salud.ccm.net/faq/17784-
tryptic-soy-broth
esterilizacion-microbiologia-
6. https://foodsafety.neogen.com/sp/
definicion
nutrient-agar
2. https://es.wikibooks.org/wiki/Micr
obiolog%C3%ADa/Esterilizaci%C3%
B3n

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