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FICHA TECNICA

AGAR MUELLER HINTON II


CAT. 221177

DESCRIPCION:

Agar Mueller Hinton: Es un medio de cultivo recomendado para pruebas de sensibilidad antimicrobiana para
bacterias de rápido crecimiento por el Método de Kirby-Bauer.

REQUERIMIENTOS Y CRITERIOS DE ACEPTACION:

1. Examinar la hoja de proceso para verificar que la caducidad ( 14 semanas ) esta conforme con el programa
de producción.

2. Verificar que el No. de muestras y requerimientos de las pruebas físicas para análisis cumpla con lo
indicado en el (Procedimiento DM9002).

3. Pruebas físicas:

a) Apariencia: Transparente

b) Color: Amarillo claro

c) Burbujas: Carece de burbujas que afecten su funcionalidad.

d) Partículas Insolubles: Carece de ellas.

e) Agua de Condensación: Presenta una mínima cantidad de agua de


condensación que no afecta su funcionalidad.

f) Peso promedio de medio de cultivo: 20 + 0.5 gramos.

g) pH: 7.3 + 0.2

h) Fuerza de gel de: 400 a 550 g/cm2.

4. Pruebas de Sensibilidad Antimicrobiana:

Preparar una suspención de S. aureus, E. faecalis, Ps. aeruginosa y E. coli en Caldo Soya Tripticaseína y
ajustar la turbidez al tubo 0.5 del nefelémetro de Mac Farland. Humedecer un hisopo estéril en la suspensión
anterior, eliminar el exceso de caldo presionando y girando el isopo sobre las paredes internas del tubo por
arriba del nivel del medio.

Inocular masivamente la superficie del medio, rotando la placa 60 grados. Repetir este procedimiento dos veces
más, rotando la placa 60 grados. Con el hisopo efectuar un barrido sobre el borde de la caja petri y el medio.
Permitir absorber el inóculo durante 3 minutos pero no más de 15 y colocar los sensidiscos ( de acuerdo a la
tabla I ) en la superficie del medio, presionando ligeramente para asegurar un contacto completo.
Después de 15 minutos de haber colocado los sensidiscos, invertir la caja e incubar placas en condiciones de
aerobiosis a 35  2C.

Registrar los resultados en el reporte de sensibilidad antimicrobiana con clave: 8402C


5. Pruebas de Soporte de Crecimiento:
a) Inocular las placas con 0.1mL de los siguientes microorganismos a partir de cultivos estandarizados ( 50 a
100 UFC por 0.1mL) sembrar el inóculo por estria para obtener colonias aisladas (Procedimiento DM9012):

Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853


FICHA TECNICA
AGAR MUELLER HINTON II
CAT. 221177

Staphylococcus aureus ATCC 25923


Enterococcus faecalis ATCC 29212
Escherichia coli ATCC 25922
*microorganismos recomendados para el control de calidad del usuario

b) Incubar las placas en condiciones de aerobiosis a 35  2C ( Procedimiento DM9019). Incluir una placa sin
inocular como control.

c) Examinar las placas a las 18 - 24 y en caso necesario a las 48 – 72 horas (o el siguiente dìa de trabajo
despuès de fin de semana o de dìas festivos) y registrar la cantidad de crecimiento, tamaño de las colonias y
pigmentación. Reportar la cantidad de crecimiento como sigue:

4+ = crecimiento abundante d = Dorado


3+ = crecimiento moderado AV = azul verde
2+ = crecimiento pobre b = Blanco
+ = trazas de crecimiento cr = crema
- = sin crecimiento

Anotar cualquier diferencia aparente en el tamaño de las colonias.

Ps. aeruginosa Crecimiento de 2+ a 4+ Color verde a verde-azul.

S. aureus Crecimiento de 2+ a 4+ Colonias circulares, color crema a dorado,


opacas.
E. faecalis Crecimiento de 2+ a 4+ Colonias pequeñas, opacas de color blanco

E. coli Crecimiento de 2+ a 4+ Colonias pequeñas, circulares blancas y


cremosas.

El crecimiento y pigmentación de los microorganismos es comparable a un lote previamente aprobado de Agar


Mueller Hinton y la recuperación deberá ser mayor al 90%. La placa sin inocular no muestra cambios.

5. Prueba de Esterilidad: Realizar la prueba de esterilidad de las placas restantes del muestreo de cada matraz
de todo el lote, incubando a 35 + 2°C durante 3 días.

El producto no presenta evidencias de contaminación al revisar periódicamente las placas del muestreo de todo
el lote, a los 3 días.

6. Conservar el producto entre 2 y 8°C.

Nota 1: Los resultados de la pruebas anteriores serán registrados en el Reporte de Análisis de Producto PPM,
clave:8402A

Nota 2: Se correran controles cada mes de un lote previamente aprobado de Agar Mueller Hinton.

Nota 3: Se recomienda incluir placas de Agar Soya Tripticaseína con 5% de sangre de carnero, como controles
no selectivos de viabilidad para todos los microorganismos.

Repetir las pruebas en caso de que los resultados y/o método sean erróneos.

Se emitirá el certificado de calidad Clave: 8402B al liberar el lote y/o matraz.

El lote completo o parcial por número de matraz se rechaza si los criterios de aceptación no se cumplen.
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AGAR MUELLER HINTON II
CAT. 221177

REFERENCIAS
BBL Quality Control and Product Information Manual for Plated and Tubed Media.
th
Difco Manual, 11 Edition.

NCCLS
Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Eighth Informational Suplement.

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