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investigación y apoyen el aprovechamiento de los recursos naturales del entorno mediante procesos científicos
y tecnológicos”.
Laboratorio de Biotecnología
Compilador: Angélica María García T. PhD.
Material a traer por parte del estudiante: hígado de pollo congelado, gasa, bandas de caucho,
arena limpia (o lavada, 50 g), bisturí o tijeras quirúrgicas (preferiblemente quirúrgica para cortes
más finos), 5 toallas de papel absorbente, papel de aluminio, cinta de enmascarar, gotero (2),
guantes, tapabocas, jabón, toalla (2, una para uso personal y otra para el trabajo práctico).
INTRODUCCIÓN
Los ácidos nucleicos son polímeros de alto peso molecular, sus monómeros son nucleótidos que se
polimerizan al formar enlaces fosfodiéster 3'-5'. Los ácidos nucleicos presentes en las células son el
ácido Desoxirribonucleico (ADN) y el ácido Ribonucleico (ARN), los cuales desempeñan diferentes
funciones. El ADN es el “asiento” de la información genética. Del ARN existen tres tipos: RNA
mensajero (ARNm), que lleva la información del ADN a los ribosomas, ARN ribosomal (ARNr)que
forma junto con las proteínas a los ribosomas y el ARN de transferencia (ARNt), responsable de
trasladar a los aminoácidos del citoplasma a los ribosomas.
Al efectuar la aislación de los ácidos nucleicos, es necesario considerar que éstos presentan su
mayor estabilidad y solubilidad en soluciones salinas. Los enlaces fosfodiester y N-glucosídicos son
estables hasta temperaturas mayores que 100ºC. Durante el proceso de aislación de un tejido, es
importante eliminar las proteínas no solo porque impurifican los ácidos nucleicos, sino que para
eliminar las ribonucleasas y desoxirribonucleasas que los degradan. La separación de las proteínas
(especialmente las básicas con las que forman complejos), se facilita por la adición de detergentes
aniónicos y/o de sales concentradas (NaCl ó NaClO4 1-3 M). También es necesario eliminar los lípidos
mediante extracciones con solventes orgánicos. Los ácidos nucleicos se precipitan de sus soluciones
por adición de etanol.
Para comprobar que se aisló efectivamente ADN y/o ARN se recurre a la propiedad de las
bases nitrogenadas de absorber en la región de los 260 nm. Una manera de estimar la
contaminación de los ácidos nucleicos con proteínas es la relación A260 nm/A280 nm. Si esta razón es
igual a 2 se considera que la muestra tiene una pureza excelente; si esta razón se encuentra entre 2
y 1,6 se considera una contaminación aceptable con proteínas y si es menor que 1,6 se considera
una contaminación no aceptable.
Cuando se trata de aislar ARN, debe decidirse primero si se va a extraer ARN total o un tipo
especial de RNA (ARNm, ARNr, ARNt), de esta decisión dependerá la técnica a seguir. La extracción
de RNA total puede realizarse de dos formas diferentes, ya sea utilizando NaCl ó fenol. Para
reconocer la presencia de ARN se utiliza una reacción específica para la ribosa (pentosa) a través del
test de BIAL, donde la 2-desoxiribosa da negativo a este test.
PROCEDIMIENTO
RESULTADOS
Analice y discuta los resultados obtenidos. Presente sus resultados de la forma más clara posible
apoyándose en el uso de tablas, gráficos, etc.
BIBLIOGRAFÍA
EDWARDS, A.M., GARCÍA, A.M., SOTO, M., FUENTEALBA, D. 2010. Prácticas de Laboratorio
de Bioquímica. Pontificia Universidad Católica de Chile, Facultad de Química, Programas de Química y
Química y Farmacia, Santiago de Chile, Chile.
HIDALGO, M.B., et al. 2002. Laboratorio de Bioquímica II. Benemérita Universidad Autónoma de
Puebla, Facultad de Ciencias Químicas, Programa de Química Farmacobiólogo. Puebla, México.
MIGUEZ, J.B.1997. Prácticas de bioquímica. Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia,
Facultad de Ciencias, escuela de Química. Tunja, Colombia.
Textos de apoyo:
LEHNINGER, A., NELSON; D.; COX, M. 2004. Lehninger Principles of Biochemistry. Macmillan
Higher Education, 4a ed.
VOET, D., VOET, J. 2002. Biochemistry. Wiley & Sons. 2ª ed. Canada.
BOHINSKI, R.C. 1991. Bioquímica. Addison-Wesley-Longman, 5ª ed. México D.F. México.
Visión del programa: “El programa de química de la UPTC para el año 2019 se proyecta en el ámbito nacional como uno de los
líderes en la gestión y desarrollo de procesos de investigación, apropiación, adaptación e innovación de ciencia y tecnología en
química”.
UNIVERSIDAD PEDAGÓGICA Y TECNOLÓGICA DE COLOMBIA
PROGRAMA DE QUÍMICA
LABORATORIO BIOTECNOLOGÍA
HOJA DE RESULTADOS
Nombres:___________________________________________________________________
Sección/grupo: ________________
2. Pruebas de reconocimiento
Test Observaciones
Test de Bial
Test de Dische
3. Observaciones adicionales: