PRACTICA 5.

ESTUDIO DE AMINOÁCIDOS, CROMATOGRAFÍA DE

AMINOÁCIDOS Y ESPECTROFOTOMETRÍA

Espectrofotometría
Resultados
La espectrofotometría es un método usado en bioquímica para saber la cantidad
o concentración de proteínas que una muestra tenga; dicha técnica se realiza a
base del empleo de un espectrofotómetro, el cual nos brinda datos de absorbencia
y Transmitancia tomando en cuenta que una hace referencia a la cantidad de luz
que es absorbida por un cuerpo traslucido al ser atravesada por la misma, y la
cantidad de energía que atraviesa un cuerpo en una determinada cantidad de
tiempo respectivamente. (Gonzales, 2010)

Cuando se quiere determinar la concentración se aplica las bases de la Ley de

Beer, en donde se toman en cuenta los diferentes parámetros se dice que la
absorbencia de una muestra a la que se le conoce la concentración es
directamente proporcional a la absorbencia y concentración de otra muestra.
(USAC, 2010). A continuación se presenta los datos obtenidos de la
espectrofotometría de las muestras preparadas

Cuadro 1. Datos de espectrofotometria en el cálculo de Concentración por el

Método de Espectrofotometría.

Muestra Absorbencia Transmitancia Concentración

Extracto Acuoso 0.20 63 3.44
Extracto Salino 0.23 59 3.97
Albumina 0.29 51 5
desconocida 0.25 56.5 4.31
Fuente: Propia
Formulas:

𝐴 = 2 − log 𝑇

𝐴1 𝐴2
=
𝐶1 𝐶2

Donde:

A: Absorbencia

T: Transmitancia

C: Concentración

0.20 ∗ 5
𝐶𝑒𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜 𝑎𝑐𝑢𝑜𝑠𝑜 = = 3.45
0.29

Cromatografía

Para la cromatografía de absorción realizada fueron necesarios los componentes

de absorbente, medio de elusión y compuesto cromatografíado. El absorbente fue
un eluyente previamente preparado, a continuación se muestran los datos del
recorrido de las manchas.
Cuadro 6. Toma de datos sobre el recorrido de las diferentes muestras
estudiadas en la Cromatografía

Muestra Recorrido en cm
Extracto acuoso 0
Extracto salino 2.4
Triptófano 4.8
Eluyente 5.3
Fuente: Propia

Análisis

En el cuadro 1 se evidencian datos alternos de una medición realizada con la

misma preparación de extracto acuoso y salino de la semilla de frijol blanco
(Phaseolus vulgaris), la muestra desconocida y albumina que es nuestra solución
patrón o constante, al tomar datos de Absorbencia y Transmitancia se ve que
varía respecto al blanco de reactivo.

Al efectuar los cálculos respectivos siguiendo la Ley de Beer, se obtiene como

resultado de concentración de la muestra desconocida un total de 4.31 %, los
datos de otros grupos son diferentes, esta variación se produce por errores de
preparación ya que al no tener una buena agitación la mezcla no es homogénea y
los datos obtenido al momento de traspasar la luz se obtienen de manera variante.

Ahora bien en el caso de los extractos de la semilla de frijol blanco la suma de

ambos da una concentración de 7.41 %, consultando la literatura según Botánica
online, esta semilla tiene un contenido de proteína aproximado del 22 %, el motivo
de la variación puede ser el prolongado tiempo de hidrólisis al que fue sometido, o
además de que un compuesto no está formado solamente por proteínas simples,
que son a los que equivales dichos estudios, además presentan proteínas
conjugadas en su mayor cantidad, por lo que para obtener una cantidad
aproximada es necesario realizar un análisis de ambas composiciones presentes
de proteínas.

Cromatografía

En los resultados se puede observar las diferencias en el recorrido de la manchas

de las diferentes soluciones, la razón por la cual unas recorrieron mas fue su
solubilidad ya que cada sustancias tienen diferentes solubilidades lo que provoca
una separación, la solución que recorrió mas distancia es la mas soluble en el
medio en el caso de las que avanzaron poco o no avanzaron son poco solubles
hasta insolubles.