xilema

Aplicación de la técnica de análisis de

imagen digital para caracterización y
medición de elementos xilematicos de
especies forestales
Jedi Rosero Alvarado1; Pablo Perez Chaves2; Vanessa Moreano2; Andrea Vera Arabe2; Daigard
Ricardo Ortega Rodriguez2; Adrian Alonso Tapia Ghersi2; Juana Llacsahuanga Salazar2; Paola Coro-
nado Werner2; Claudia Zuñiga Carrillo2; Claudia Lozano Alvarez3; Moises Silveira Lobão4; Manuel
Chavesta Custodio5

INTRODUCCIÓN de información resultante ya que se optimiza la

La anatomía de la madera es la ciencia que
estudia los diversos elementos que constituyen
la estructura y organización del leño. Sus
características estructurales son de fundamental
importancia para la determinación del posible
aprovechamiento tecnológico de la especie.
Las dimensiones, frecuencia y arreglo de estos
elementos presentan gran influencia sobre las
propiedades físicas y mecánicas de la madera
(HAYGREEN; BOWYER, 1982; BURGER;
RICHTER, 1991). Técnicas convencionales
permiten describir características de las especies
para un uso específico; sin embargo, en muchos
casos estas actúan en forma destructiva,
imprecisa y lenta, por lo que es necesario optar
por nuevas técnicas no destructivas, eficaces
y rápidas reduciendo costos y tiempo en la
obtención de resultados (MACEDO et al., 1998;
EMBRAPA, 1997). El desarrollo o aplicación
de un sistema de análisis de imágenes digitales
permite minimizar la intervención del operador,
sistematizar el proceso, mejorando la precisión y
rapidez en la medición de elementos xilematicos.
El procesamiento de imágenes digitales busca
extraer información relevante para el análisis
mediante la identificación de patrones y objetos
de estudio, así como también, mejorar la calidad
visualización (GONZALEZ; WOODS, 1992).
Entre las aplicaciones más importantes en el área
forestal se tienen estudios de actividad cambial
(crecimiento), forma y dimensiones de elementos
leñosos, detección de defectos, fallas, calidad de
piezas de madera y en el manejo forestal análisis
de imágenes remotas (sensoriamiento remoto)
aplicado a estudios de estratificación para
inventarios forestales (TRENARD; GUINEAU,
1975; GROSSKOPF, 1976; HUBER, 1980;
VETTER; BOTOSSO, 1985; SILVA; TRUGILHO,
2003). La presente investigación tiene como
objetivo aplicar y validar la técnica de análisis
de imágenes digitales de elementos leñosos en
especies forestales mediante comparación y
correlación de resultados obtenidos con el método
convencional brindando así una alternativa de
análisis a los estudios en anatomía de la madera.
REVISIÓN DE LITERATURA
Sistemas de Análisis de Imágenes aplicados en
estudios forestales
El desarrollo y adaptación de nuevos
procedimientos de sistematización de información
aplicados a estudios forestales permiten la
obtención de resultados confiables y precisos.
Yanosky y Robinove (1986) fueron los pioneros

1
jediros@gmail.com MSc. En Recursos Forestales, ESALQ/USP;
2
Alumnos Fac. de Ciencias Forestales, UNALM;
3
Bachiller en Ciencias Forestales UNALM
4
moiseslobao@hotmail.com Doctorando, ESALQ/USP;
5
mchavesta_539@hotmail.com, Docente, Laboratorio de Anatomía e Identificación de Maderas – UNALM.

62

en la utilización de software de procesamiento
de análisis de satélite (SIG) para caracterizar y
medir elementos anatómicos y ancho de anillos
de crecimiento usando proyección en fondo
blanco. Posteriormente se desarrollaron sistemas
más eficaces para medición de estos elementos
en estudios de dendrocronología, determinando
también la densidad y ancho de los anillos
(Thetford et al., 1991; Amaral; Tomazello Filho,
1998; Rigozo; Nordemann, 2000; Rosot et al.,
2000, 2001, 2003). Moya et al. (2007) estudiaron
la variación de la estructura anatómica de Gmelina
arbórea mediante el análisis de imágenes tomadas
con cámara digital acoplada a microscopio y
evaluadas en software SAIM e Image Tool v3.0,
del mismo modo Bellini et al. (2008) utilizando
la misma metodología caracterizo la estructura
anatómica de astillas de madera de Eucalyptus
grandis. Biging y Wensel (1984) fueron los
pioneros en aplicar una técnica fotográfica (35
mm a color) para análisis de tronco en coníferas,
utilizando un microdensitómetro acoplado a un
proyector y determinando también los límites de
anillos de crecimiento. Posteriormente análisis de
imágenes de tronco fueron empleados por Tasissa
e Burkhart (1997) para estudiar las variaciones
verticales y laterales en el ancho de los anillos de
crecimiento de arboles de Pinus taeda sometidas a
diferentes intensidades de raleo. Para estudios del
sistema radicular de las plantas de forma simple,
rápida y precisa se desarrolló un sistema integrado
para análisis de raíces y cobertura del suelo como
producto del perfeccionamiento de diferentes
programas de análisis de rajaduras en discos y
tablas, mediciones de elementos anatómicos de la
madera, evaluación de la densidad y movimiento
de agua en la madera por medio de imágenes de
rayos X a partir de imágenes patrones para las
diferentes densidades. (Embrapa, 1997). Rosot et
al. (2000, 2001) probaron la viabilidad del uso
de imágenes de piezas de madera de Araucaria
angustifolia para estimación de áreas transversales.
Tomazello Filho et al. (2008) evaluaron la calidad
de piezas de maderas de eucalipto determinando
la variación y rangos de densidad aparente
máxima, mínima y media a través del análisis de
imágenes de las placas de rayos X en el software
CRAD e CERD. Vaz et al. (1996) establecieron la
metodología para evaluación de masa específica
(g.cm-3) de muestras de madera a través de
imágenes de tomografía computarizada donde
puede verificarse la variación de la densidad a lo
largo de una sección de un cuerpo de prueba.
63
xilema
MATERIALES Y MÉTODOS
Selección de láminas histológicas
Laminas histológicas (cortes transversal, tangencial
y radial) y laminas de macerado (fibras y vasos)
fueron seleccionadas de diez especies forestales
previamente preparadas en el Laboratorio de
anatomía e identificación de maderas de la
UNALM. El criterio de selección consistió en
separar láminas en buen estado sin rajaduras
ni presencia de hongos, preferentemente con
poco tiempo de haber sido montadas. Las
especies seleccionadas fueron Calycophyllum
spruceanum, “capirona”, Cariniana domestica
“cachimbo”, Cedrela odorata “cedro”, Cedrelinga
catenaeformis “tornillo”, Ceiba pentandra
“lupuna blanca”, Copaifera officinalis “copaiba”,
Crepidospermum goudotianum “palo baston”,
Dipterix odorata “shihuahuaco”, Swietenia
macrophylla “caoba” y Tetrochidium rubrivenium
“col de monte”.
Calibración del sistema de análisis de imagen.
Fue necesario calibrar el software Image Tool
v.3.0 mediante captura de imágenes de la reglilla
micrométrica Carl Zeiss Jena 5+100/100 mm a
diferentes aumentos 40x, 100x y 400x (Figura 1a).
Estas imágenes son reconocidas por el programa
permitiendo introducir la medida de la escala
en micrómetros (a un aumento determinado)
generando un archivo con extensión “itc”.
Cada vez que necesite realizar mediciones a un
aumento determinado se deberá cargar el archivo
con el aumento respectivo de la imagen. En casos
de caracterización macroscópica de la madera o
de anillos de crecimiento, donde no se necesite
mayor aumento la calibración puede realizarse
con la captura de la imagen de una escala
milimétrica como muestra la figura 1b.
Captura y análisis de imágenes digitales
El sistema de análisis de imagen digital consta
de una cámara digital Canon Powershot S50
acoplada a microscopio óptico Olympus BH2
(figura 1c) para captura y análisis de elementos
xilematicos utilizando el software Image Tool
v3.0 propuesto por Moya et al. (2007) y Bellini
et al. (2008) (figura 1c). Fueron capturadas un
total de 3 imágenes por sección (40x y 100x de
aumento respectivamente) y 25 imágenes para
fibras (400x) por cada especie. Las variables a
xilema

Figura 1. Sistema de Análisis de Imágenes digitales a) escalas micrométrica 100x para medición
de elementos xilematicos, b) escala milimétrica para medición de anillos de crecimiento, c)
sistema completo de análisis de imágenes y software para análisis de elementos xilematicos.

evaluar fueron diámetro y frecuencia de los Análisis estadístico

vasos, altura y ancho de radios, diámetro y
espesor de pared de fibra. Para la determinación
del espesor de pared se utilizó la expresión
EP = (L – DL)/2, donde L = ancho de fibras y
DL= diámetro del lumen siguiendo la norma
IAWA committee (1989) para descripción de las
características macro y microscópica de especies
tomando repeticiones de n=25. Fueron también
empleadas las mismas láminas con la misma
cantidad de repeticiones para cada variable
en el sistema convencional de proyección de
imágenes en fondo blanco (Tomazello Filho,
1985), que consiste en proyectar imágenes de
los cortes histológicos para análisis directo en
el microscopio con la finalidad de probar la
viabilidad de la técnica comparando resultados
del análisis de imágenes con los de la técnica
convencional.
Mediante el uso del paquete estadístico ASSISTAT
7.5 beta se realizó el análisis de variancia
(ANVA), bajo el delineamiento de experimento
al azar considerando los resultados de las dos
técnicas de análisis de imágenes con la finalidad
de determinar posibles diferencias entre ellas.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
La captura de imágenes en el sistema (figura 2)
permitió observar con mayor detalle la estructura
anatómica de las especies en las secciones
transversal, tangencial y radial (figura 2a, b, c y
e) así como también vasos, fibras y parénquima.
Además gomas, tilósis, puntuaciones areoladas
(figura 2c), campo de cruzamiento, células
procumbentes, cristales de oxalato (figura 2e) y
finalmente diámetro, lumen y espesor de pared de

64
 xilema

fibras (figura 2f). Todas estas imágenes permitieron
identificar, medir y analizar elementos anatómicos
en todas las especies en estudio.
Mediciones con ambas técnicas fueron comparadas
mediante análisis de regresión (coeficiente de
determinación “r2”), correlación (coef. Correl.
Pearson “r”) y análisis de variancia (ANVA) “test-
Tukey” de promedios para cada variable en
estudio. Los resultados del análisis de regresión y
correlación (tabla 1) mostraron tendencias lineales
positivas y significativas (figura 3) en todas las
variables analizadas, diámetro de poros r2= 0.64,
r= 0.79; frecuencia de poros r2= 0.95, r= 0.97;
altura de radios r2= 0.68, r= 0.82; ancho de radios
r2= 0.63, r= 0.79; diámetro de fibras r2= 0.59, r=
0.77 y espesor de pared r2= 0.56, r= 0.75. Puede
observarse también que la frecuencia de poros
presenta una concentración de datos separados
del resto (figura 3) que también mantienen una
tendencia lineal, esta concentración corresponde a
la especie Calycophyllum spruceanum “capirona”

Figura 2. Imágenes de elementos anatómicos tomados con el sistema de imágenes en las especies
de estudio. A. sección transversal de Tetrochidium rubrivenium “Col de monte”; B. sección
transversal de Cedrelinga catenaeformis “Tornillo”; C. sección tangencial de Tetrochidium
rubrivenium “Col de monte”; D. sección tangencial de Calycophyllum spruceanum “Capirona”;
E. sección radial de Copaifera officinalis “Copaiba”; F. elemento anatómico, fibra de Tetrochidium
rubrivenium “Col de monte”. Barra = 100µm.

65
xilema

Tabla 1. Ecuaciones lineales de cada variable que presenta una mayor frecuencia de poros por
en estudio milímetro cuadrado. Ya en el alto y ancho de
radios pueden observarse datos fuera del promedio
Variable Ecuación lineal
considerados como “outliers” que no llegan a
Diámetro tangencial de y= 0.7585x + 7.453 influir significativamente en el análisis.
poros
Frecuencia de poros y= 0.9658x + 0.5027 El análisis de variancia de los datos en estudio
Altura de radios y= 0.9235x + 38.504 no mostro diferencias significativas (α= 0.05 y
p≥0.05) entre los promedios de cada variable
Ancho de radios y= 0.7431x + 10.907
(diámetro de poros p= 0.94; frecuencia de poros
Diámetro de fibra y= 0.8431x + 3.1551 p= 0.88; altura de radios p= 0.96; ancho de radios
Espesor de pared y= 0.6195x + 0.9540 p= 0.98; diámetro de fibras p= 0.75 y espesor
de pared p= 0.96) demostrando así no existir
Nivel de significancia α=0.05 diferencias en los valores tomados por ambas

Tabla 2. Parámetros anatómicos de las especies en estudio Software Image Tool v3.0

Especies DP (µm) FP (N°.mm-2) ALR (µm) ANR (µm) DF (µm) EP (µm)

Calycophyllum spruceanum 93.52 34 - 47 706.65 38.73 13.42 2.76
Cariniana domestica 170.94 2 - 5 297.22 19.56 17.4 1.87
Cedrela odorata 238.3 2 - 9 347.28 54.13 26.18 1.66
Cedrelinga catenaeformis 284.97 1 - 3 221.76 18.85 27.55 2.2
Ceiba pentandra 320.63 1-2 1460.81 139.32 33.97 2.61
Copaifera officinalis 190.5 3-6 629.47 45.57 27.22 3.44
Crepidospermum goudotianum 136 6-9 305.61 28.36 16.94 1.86
Dipterix odorata 177.58 3-5 312.79 23.28 11.59 5.04
Swietenia macrophylla 175.12 6 - 11 536.4 58.56 14.87 2.09
Tetrochidium rubrivenium 188.82 6-8 590.75 17.16 24.94 2.09

Donde: DP= diámetro de poros, FP= frecuencia de poros, ALR= altura de radios, ANR= ancho de radios,
DF=diámetro de fibras, EP= espesor de pared celular.

Tabla 3. Parámetros anatómicos de especies en estudio según bibliografía

Especies DP (µm) FP (N°.mm-2) ALR (µm) DF (µm) EP (µm)

Calycophyllum spruceanum 39-145 40 - 100 <1000 22 6
Cariniana domestica 105-236 2-8 270-424 22 4
Cedrela odorata 192-504 1-9 300-440 46 4
Cedrelinga catenaeformis 293-333 1-5 <1000 24 3
Ceiba pentandra ≥ 200 ≤5 >1000 36 4
Copaifera officinalis 100 - 200 3-8 309-691 18 2
Crepidospermum goudotianum 108 - 163 4 - 10 257 - 429 15 - 22 2–4
Dipterix odorata 119-238 3-9 249-427 13 2.5
Swietenia macrophylla 100 - 200 5 - 12 367-569 22 3
Tetrochidium rubrivenium 147,4 2 - 12 940 32,7 3,08

Fuente: ACEVEDO; KIKATA (1994), PORTAL (2008), KULJICH (2008), IAWA

66
 xilema

técnicas. Por otro lado los valores promedio de con literatura consultada presentada en la tabla
las variables analizadas mediante el sistema de 3, demostrando la viabilidad y precisión de la
análisis de imágenes y software Image Tool v3.0 técnica, encontrando los promedios dentro del
presentados en la tabla 2 fueron corroborados rango establecido por los autores consultados.

500 50

Frecuencia Proyector N.mm-2

Diámetro Tg Proyector (µm)

400 40

300 30

200 20

100 10

0 0
0 100 200 300 400 500
0 10 20 30 40 50
Diámetro Tg Image Tool (µm)
Frecuencia Image Tool N.mm-2
2500
300
Altura radio Proyector (µm)

Ancho radios Proyector (µm)

2000 250

1500 200

150
1000
100
500
50

0 0
0 500 1000 1500 2000 2500
0 50 100 150 200 250 300
Altura radio Image Tool (µm)
Ancho radios Image Tool (µm)
50
Diám. total de fibras Proyector (µm)

10
Espesor pared Proyector (µm)

40
48

30
6

20
4

10
2

0
0
0 10 20 30 40 50
0 2 4 6 8 10
Diám. total de fibras Image Tool (µm) Espesor pared Image Tool (µm)

Figura 3. Análisis de regresión de los datos tomados en ambas técnicas de análisis para
cada variable en estudio. Dispersión de datos siguiendo una tendencia lineal positiva.

CONCLUSIONES La aplicación de la técnica de análisis de imágenes

presenta un gran potencial para avances en
Los valores de las variables analizadas en el sistema estudios anatómicos dada su precisión y rapidez
de imagen digital no varían significativamente a en la obtención de resultados.
los obtenidos con el método convencional ni en
la literatura consultada.
RECOMENDACIONES
La técnica de análisis de imágenes y el software Se recomienda que las láminas histológicas
Image Tool v.3.0 demostraron ser una valiosa a utilizar sean permanentes recientemente
herramienta en la identificación y medición montadas o semi-permanentes teniendo como
precisa de elementos leñosos para estudios base glicerina y safranina (1:1) teniendo como
anatómicos de especies forestales. espesor entre 15 a 25 micras para evitar rasgaduras

67
xilema
optimizando el análisis de las imágenes de los
elementos. En cuanto al programa de análisis
de imágenes (Image Tool v3.0) y el paquete
estadístico (ASSISTAT v.7.5), se recomienda usar
Windows 2003 y/o Windows XP, debido a que
en algunos casos el programa presenta problemas
en versiones actuales de Windows (Windows
Vista). En la captura con el sistema se sugiere un
número mínimo de 6 imágenes para cada variable
a ser analizada pues esto facilitará conseguir 25 a
más datos de medidas de diversas secciones de la
imagen. Al momento de tomar las fotografías de
fibras, se debe de tener cuidado la aglomeración
de elementos pues estas se encuentran en
diferentes planos de nitidez. De igual manera al
momento de realizar la medición de esta variable,
se debe tener sumo cuidado con confundir las
paredes de cada fibra debido a que se encuentran
superpuestas. En el caso que la muestra presente
elementos anatómicos como radios y poros muy
grandes, se recomienda que las mediciones sean
realizadas en las fotografías de menor aumento
(40x). Para el caso de medición de elementos
individuales (vasos y fibras), se recomienda
enfocar el centro de la imagen, debido a que esta
se encuentra libre de distorsión y asegura un dato
más confiable.
AGRADECIMIENTOS
Un especial agradecimiento al Laboratorio de
Anatomía e Identificación de Maderas de la
Universidad Agraria La Molina, al profesor MSc.
Manuel Chavesta Custodio y al Técnico David
Huaman por haber permitido desarrollar y aplicar
la técnica además de capacitar a los alumnos
practicantes y tesistas en el uso del sistema de
análisis de imágenes, ya que ellos han sido pieza
clave en la realización de esta investigación.
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