UNIVERSIDAD DE ORIENTE

NUCLEO DE BOLIVAR
ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD
“DR. FRANCISCO VIRGILIO BATTISTINI CASALTA”
DEPARTAMENTO DE BIOANALISIS
ASIGNATURA: INMUNOLOGIA II
LABORATORIO DE INMUNOLOGIA II

PROFESORA: REALIZADO POR:

Lic. Esmeralda Partidas Colina María Laura

C.I: 23.905.045

CIUDAD BOLIVAR, JUNIO 2016.

 HISTORIA

En los sistemas inmunoanalíticos competitivos utilizados en la actualidad e

independiente del tipo de respuesta que midamos (radiactividad, densidad óptica,
fluorescencia, electroquimioluminiscencia o quimioluminiscencia), el fundamento y
el comportamiento de la inmunorreacción primaria [Ag-Ac] se mantiene tal como
fuera explicado entre las décadas de 1960 y 1980 por los doctores Rosalyn
Yallow, David Rodbard, Roger Ekins, entre otros.

Un gran avance científico se produjo en la década de 1970 con el desarrollo de los

anticuerpos monoclonales y, a partir de allí, el desarrollo de las técnicas
inmunométricas llamadas también "Sistemas Sándwich", donde participan dos
anticuerpos que, según el diseño de los distintos fabricantes, pueden ser
monoclonal-monoclonal o policlonal-monoclonal.

En este desarrollo, la reacción transcurre con equilibrios múltiples; en el

“Sándwich” Ab-Ag-Ab, uno de los anticuerpos está unido a una fase sólida y el otro
está unido a una marca o a un anclaje, se desarrollan en condiciones de no
competencia donde el analito que se va a dosar es ligado con una fuerza
equivalente a una unión covalente.

Además permitió disminuir los tiempos de incubación, agregar o aumentar pasos

de lavados, disminuir uniones inespecíficas y lograr niveles de detección de
concentraciones mucho más bajos, por lo menos un orden de magnitud menor que
los sistemas competitivos.

A finales de la década de 1980, la tecnología permitió obtener sistemas de

respuestas mucho más amplificadas que la radiactividad y la densidad óptica
basadas en los mismos principios de las inmunorreacciones, se logró disminuir en
otro orden de magnitud el nivel de detección de muchos analitos que resultó de
gran utilidad para el diagnóstico médico.

Existen muchos métodos para detectar el complejo Ag-Ac, una vez que éste se
ha formado. Uno de ellos es la quimioluminiscencia, la cual está tomando cada
vez mayor auge. Cuando se utilizan sustancia productoras de luz al ser
estimuladas. También están tomando cada vez mayor auge las técnicas
quimioluminiscentes.

QUIMIOLUMINISCENCIA

La quimioluminiscencia consiste en términos generales en la producción química

de la luz. Los marcadores quimioluminiscentes son sustancias capaces de emitir
luz cuando, al absorber la energía de una reacción química oxidativa, son
colocadas en un estado de excitación electrónica. La emisión de luz se produce al
volver a su estado inicial y la energía química absorbida se cede en forma de
fotones fácilmente cuantificables con un fotodetector.

Generalmente se emplean para detectar la existencia de sustancias químicas en

las biopsias de tejidos. Si, por ejemplo, queremos saber si un fragmento de hígado
tiene una proteína que caracteriza al cáncer, se baña la muestra con un anticuerpo
que se pega a esa proteína. El anticuerpo va combinado con una sustancia
quimioluminiscente. Se examina el espécimen al microscopio y, si se aprecia
que brilla con luz propia, es que contiene la proteína.

Los marcadores quimioluminiscentes, como es la biotinas, constituyen una

alternativa al uso de isótopos radiactivos en el inmnunoanálisis, pues los
compuestos quimioluminiscentes son de gran estabilidad y la emisión de luz sólo
se produce cuando se provoca la reacción oxidativa siendo posible almacenar
largo tiempo los compuestos luminiscentes.

En la actualidad disponemos de varios métodos para seleccionar células a las que

previamente se ha unido un anticuerpo.

Se ha propuesto un nuevo sistema automatizado de quimioluminiscencia que

puede mejorar la reproducibilidad y reducir la variación entre laboratorios ya que el
diagnóstico por el laboratorio del APS sigue siendo un reto para cada profesional
de laboratorio en el campo

FUNDAMENTO

Es un inmunoensayo que se basa en la emisión de luz asociada con la energía.

La quimioluminiscencia es definida también como la emisión de fotones de luz

asociada con la disipación de energía con una sustancia electrónicamente
excitada esto se da a través de una reacción enzima sustrato.

La emisión de luz es causada por los productos de una reacción específica

química, en la cual se involucran las siguientes sustancias según el sistema
automatizado que sea utilizado: éster de acridina, peróxido-ácido, hidróxido de
sodio, fosfatasa alcalina. En el caso de esta reacción el agente quimioluminiscente
es el éster de acridina que es oxidado por el peróxido ácido y el hidróxido de
sodio.

TIPOS DE QUIMIOLUMINISCENCIA

1. Quimioluminiscencia (Directa)

Emplea como fase sólida, micro partículas paramagnéticas recubiertas de

anticuerpos específicos contra la sustancia a analizar y como marca el éster de
acridina, además el sustrato es oxidante utiliza catalizadores y es necesaria la
existencia de cofactores.
 2. Quimiolumiscencia amplificada (indirecta)

Esta quimioluminiscencia indirecta reacciona por enzimas (fosfatasa alcalina) o

iones utiliza también catalizadores y puede necesitar o no cofactores y el sustrato
es el éster de fosfato.

MARCADORES DE REACCIÓN LUMINISCENTE

Ester de Acridina.
Hidróxido de Sodio
Peróxido Acido
Fosfatasa Alcalina

VENTAJAS DE LA QUIMIOLUMINISCENCIA

Alta sensibilidad (femtogramos 10"15g).

No emplea radiactividad.
No genera riesgo contaminante ni ruido de fondo a la hora de efectuar el
proceso del análisis de una muestra, control o estándar.
Los resultados son rápidos (generalmente a los 15 min).
Equipos automatizados de fácil manejo.

EQUIPO

Hitachi 911

Es un analizador automático altamente sensible que puede realizar una amplia

gama de pruebas. Es útil para determinar analitos del metabolismo de proteínas,
carbohidratos, lípidos, purinas; así como electrolitos del metabolismo óseo, del
metabolismo del hierro. También determinan enzimas para evaluar daño al
miocardio, pancreático, muscular, hepático y renal fundamental para le eficacia
diagnóstica y control terapéutico.

Además se emplean para la monitorización de fármacos, perfil reumático,

reactantes de fase aguda.

UNIDADES O PARTES DEL EQUIPO

El equipo posee dos unidades

Unidad de Control: Compuesta por el monitor. CPU, impresora y teclado.

Unidad de Análisis: Esta compuesta por las sondas de succión, las cubetas
porta muestras para la unidad de análisis la parte óptica de este equipo es
 el fotómetro con longitud de onda 360m/hora y posee un ionselectivo-
760m/hora.

MUESTRAS QUE MANEJA EL EQUIPO:

Suero
Plasma
Orina
LCR

PRECAUCIONES QUE SE DEBE TENER CUENTA AL MOMENTO DE USAR

EL EQUIPO

Observar la fecha de caducidad de los reactivos

No se recomienda hacer los exámenes en pacientes con sueros lipémicos o
hemolizados.
Si se da un uso frecuente realizar las calibraciones correspondientes.

PRUEBAS QUE SE REALIZAN

Perfil Hormonal
Química Sanguínea (Perfil Lipídico, Perfil Renal, Perfil Cardiaco, etc.)
Proteínas en Suero y en LCR
Drogas Terapéuticas (Ácido Valproico)
Drogas de Abuso como la Cocaína, TMC.
Pruebas Inmunológicas - PCR-C, C3 y C4 complementario, entre otros

Se han desarrollado sistemas automatizados para el uso de inmunoensayos por

quimioluminiscencia (emisión de luz asociada con la energía) desplazando
aquellas metodologías como el Radioinmunoanálisis (RIA), Inmunoradiometría
(IRMA) y otras, haciendo hincapié que cada vez son más sencillas las
determinaciones inmunológicas con esta tecnología de vanguardia, es
un método de lectura que se basa en el principio de emisión luminosa a través de
una reacción (Enzima-Sustrato). La variedad de pruebas que conforman
esta metodología permite realizar diferentes determinaciones de casi todas las
áreas del Laboratorio Clínico tales como: Endocrinología, Inmunología, Virología,
Epidemiología, Hematología, Bioquímica Clínica, etc.

Los laboratorios de investigación que han desarrollado estos ensayos de

quimioluminiscencia han demostrado la excelente correlación con los ensayos de
referencia, como los automatizados y Radioinmunoanálisis, donde encuentran
precisión, baja reactividad cruzada, gran sensibilidad analítica sobre el orden de
diez veces más sensible que la mayoría de los ensayos de hoy en día. La mayor
parte de los ensayos se determinan en aproximadamente 15 a 30 minutos y por su
simplicidad se ha convertido en una opción muy propia para evitar
los riesgos inherentes en la metodología del RIA como lo son la utilización de
isótopos radioactivos.

Este sistema posee una gran especificidad y sensibilidad ya que con este método
radiométrico se puede determinar una reacción antígeno-anticuerpo aunque su
concentración sea del orden de los picogramos y con un mínimo de
desnaturalización.
 Referencias Bibliográficas

 Cubedo, R. Servicio de Oncología Médica, Clínica Universitaria Puerta de

Hierro (MADRID). Buscador en línea:
[http://www.tideca.net/content/sensibilidad-de-las-t%C3%A9cnicas-
inmunoanal%C3%ADticas-primera-parte]

 González, J.M. 1998. Inmunoanalisis con reactivos marcados. Bioquímica

clínica. Edit. Mc. Gram-hill interamericana. España. Cap 5:41-42 [Mayo
2015]. Buscador en línea:
[http://www.labmedica.es/inmunologia/articles/294740707/analisis-por-
quimioluminiscencia-identifica-anticuerpos-antifosfolipidos.html]

 Grupo Industrial MexLan S.A de C. V. Ensayos inmunoenzimaticos por

Quimioluminiscencia. Buscador en línea:
[http://es.scribd.com/doc/96236339/QUIMIOLUMINISCENCIA-
FUNDAMENTO#scribd]