DETERMINACIÓN DE VITAMINA C EN MUESTRAS BIOLÓGICAS

OBJETIVO: Determinar cuantitativamente el contenido de ácido PROCEDIMIENTO.

ascórbico en el zumo de frutas o en verduras, mediante el método
de Mohr.
INTRODUCCIÓN. La vitamina C es esencial para la formación del
tejido conectivo, como es el caso de los huesos, cartílagos y la
dentina. La vitamina C también estimula las funciones de defensa
del organismo. Además, el ácido ascórbico es un buen reductor y
esta es una de las funciones que lo catalogan como uno de los
mejores antioxidantes con que cuenta el organismo. Su forma
oxidada, el ácido dehidroascórbico, se puede reducir nuevamente
por acción de reductores como el glutatión reducido (GSH).
En las fuentes vegetales, el ácido ascórbico se puede hallar en
formas libres o combinadas (ascorbígenos) a partir de las cuales
puede ser cuantificado.
MATERIALES Y RECTIVOS.
Instrumental: Balanza, centrífuga, espectrofotómetrro.
Materiales: Mortero con su mango, embudo de vidrio, papel
de filtro.
Muestras biológicas: Frutas o verduras (concertarlo con el
profesor)
Reactivos:
 o-nitroanilina al 0.16% en ácido acético-HCl. Se disuelven
80 mg de o-nitroanilina en 4 ml de ácido acético glacial y se
diluye la solución a 50 ml con ácido clorhídrico al 10%
 Ácido oxálico al 0.15%
 Carbón activado
 Nitrito de sodio al 0.08% (preparar fresco!)
 Etanol al 96%
 Solución patrón de vitamina C al 0.02% en ácido oxálico al
0.15% (Recién preparada)
 Hidróxido de sodio al 10%
Cada grupo de laboratorio traerá una fruta cítrica, una fruta no
cítrica y una verdura. (Verduras= perejil, espinaca, acelga,
pimentón rojo, ají, brocoli; Frutas cítricas= naranja, tangelo, toronja,
mandarina, lima; Frutas no cítricas = fresas, uchuvas, kiwi, guayaba,
tomate de guiso)
NOTA. Los grupos deben ponerse de acuerdo para no repetir frutas
ni verduras. Las frutas y las verduras deben estar lo más frescas
posible. Traer también un cuchillo pequeño y sus jeringas
pipeteadoras)
Preparación de la muestra:
Para obtener la muestra biológica proceda de la siguiente
manera:
En el caso de las frutas cítricas se toma 1 ml de jugo y luego
se agregan 4 ml de ácido oxálico al 0.15%, se mezcla bien y
se filtra. El filtrado (D1) se conserva para realizar la
determinación colorimétrica.
Para otras frutas y verduras se pesa 1g de la muestra, la cual
se macera en un mortero, lo mas exhaustivamente posible,
con 4 ml de solución de ácido oxálico al 0.15%. Después de
filtrar se completa el filtrado con ácido oxálico al 0.15% hasta
un volumen final de 5 ml. De allí se toma 1 ml de cada
extracto para los tubos D2 (fruta no cítrica) y D3 (verdura).
Si cualquiera de los extractos exhibe demasiada coloración se
recomienda adicionar una pequeña cantidad de carbón
activado (aproximadamente 0.5 g por cada 5 ml de extracto
coloreado), se agita y luego se filtra. Se utiliza el
sobrenadante y el residuo se desecha.
Curva de calibración:

Rotule 10 tubos de ensayo así: B, 1, 2, ..6, D1, D2, D3 y

agregue en su orden los reactivos tal y como se indica en la
siguiente tabla:
Reactivos Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo
(ml) B 1 2 3 4 5 6 D1 D2 D3
o-nitroanilina 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
Nitrito de sodio 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
Mezcle bien y espere a que se decolore. Si en 5 minutos no ocurre decoración agregue
otros 0.1 ml de nitrito de sodio y descuente este volumen del agua destilada que se
agregará posteriormente.
Etanol al 96% 3.8 3.8 3.8 3.8 3.8 3.8 3.8 3.8 3.8 3.8
Patrón de vitamina C  0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0   
Ácido oxálico 1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2    
EXTRACTO        1.0 1.0 1.0
Mezcle bien y deje en reposo durante 5 minutos
NaOH 10% 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2
Agua destilada 3.8 3.8 3.8 3.8 3.8 3.8 3.8 3.8 3.8 3.8

Mezcle bien el contenido de cada tubo y páselo a una celda del espectrofotómetro. Utilizando el tubo B como blanco se lee la
absorbancia de cada tubo a una longitud de onda de 540 nm.

CUESTIONARIO.

1. Cuál verdura tuvo el mayor contenido de vitamina C?. Está acorde este resultado con la literatura? Si no lo está explique la razón de la diferencia.
2. Cuál fruta cítrica tuvo el mayor contenido de vitamina C?. Está acorde este resultado con la literatura? Si no lo está explique la razón de la diferencia.
3. Cuál fruta no cítrica tuvo el mayor contenido de vitamina C?. Está acorde este resultado con la literatura? Si no lo está explique la razón de la diferencia.
4. Cuál tipo de muestra: verdura, fruta cítrica o fruta no cítrica tuvo el mayor contenido de vitamina C?. Está acorde este resultado con la literatura? Si no lo está
explique la razón de la diferencia.
5. Qué factores influyen en el contenido que se obtenga de vitamina C en frutas y verduras?
6. Por qué razón entre las frutas cítricas sugeridas en esta práctica no se colocó el limón, si se sabe que tiene un alto contenido de vitamina C?
7. Cuál es el fundamento del método de Mohr para determinar el contenido de vitamina C?