APLIKASI ANALISIS DNA DALAM BIDANG FORENSIK (STUDI PUSTAKA) Elza Ibrahim * Analisis DNA dalam bidang fornsi mera tek yang rai bare dan berkembang pst ssn’ dengan peningkatan Kuala dan kusattasriminalias damping dapat digansan dalam penenous fabungan Eclnsg Permasashannys adalah bngaimaca Ketampuan tals DNA ia dala. mengidetfias idivida pads Fase: ‘anus teracbu. Dari 3.3, rulyar psang bas yang membentuk genom manvsia,terdpat seit 3 juts porta late stp ds ind, Untuk tan dentine DNA dalam bang Totena ego yg aga pets ‘salah lous poimorte DNA termasuk resi urn satelit (Satellite sequence pada hagan Yang tak engkode rod tetetu di genom manus. Bila ekuens foimore DNA pada sis popu diet, poeta ar identifi, Jokuspolimorfik dengtnfekuesi Yang dike dalam sua popula) dapat ph schepe DNA macker, Analisis DNA merupakan sua mode Yang sings potnsel yang devas ini telah ierima seen Jane saga sat cara eatin dalam Bang Trent, scab hanya Sbuuhan seit sumpel a ane dapat dambil dari sea sel bern di scar tubuh: Penggvoaan ancis DNA dan bank data BNA teers bag dengan peat sertamerupakan sara yang pentng saga pelengkao lerhadup bidang kedokteran dan Keo ‘ean git foes linya, Gua efi eta bang Yoresi iajrkan agar etoemetode ny a ‘ikon Pendahuluan [dentifikasi korban dan tersangka dalan suatu kasus kriminalita termasuk penetuan hubun- gan keluarga merupakan obyek utama untuk analisa forensik. Dewasa ini dengan kemajuan feknologi DNA, ilmu forensik menyediakan berbagai sarana yang mengandalkan citi spesifik individu yarg temyata berbeda pada setiap orang. Sebelumnya berbagai cara klasik telah digunakan seperti visualsasi sidik jar antigen golongan darah, perbandingan dengan status sii geligilain-lain, Walaupun demikian metode forensic tadsional tersebut cenderung terbatas jangkauannya an dibutuhkan rekaman dan sarmpel dan sampel yang adekuat sehingga didapaikan hasil yang ‘apat dipertanggungjawablan. Perkembangan akhirakhir ini dalam identifies: genotip ‘memungkinkan penggunaan analisis DNA untuk tujuan tersebut.!2345 Dewasa ini terdapat Kecenderungan peningkatan penggunaan analisis DNA dalam bidang forensik, walaupun Penggunaannya belum secara lua, Hal ini karen tekniktersebut relat masih baru dan metode analisa dan aplikasinya harus menurut prosedur standar intemasional. Namun di beberapa negara maju penggunaan teknik ini telah menjadi suatu sarana forensik yang bersifa rutin, walaupun masihdiperlukan beberapa pertimbangan dalam penyederhanaan teknik analsis DNA untuk mendapatkan hasit yang lebih cepat, penekanan biaya analisis DNA guna penggunaan yang lebih luas, dan pengembangan teknologi agar lebih dikenal dan memungkinkan penghi- tungan probabilitas dalam identifikasi. ‘Aspek yang terakhir masih terus diperdebatkan selama dekade tcrakhir ini.2* Hal ini sisebabkan oleh fakta bahva terdapainya DNA genotyping baru dalam waktu relatif singkat Perdebatan ini bukan ferhadap valiitas dari aplikasi analisis DNA dalam bidang forensik, lo hin, Dr Bg Oral Hoey, Faas oso i Ue ladon 2tetapi lebih terhadap metode-yang ideal untuk interpretasi" Dalam hal ini kesulitan teknis ‘umumnya berhubungan dengan fakta bahwa tidak seperti analisis biokimia untuk forensik (misalnya, golongan darah), analisis DNA melibatkan pula aspek genetika populasi Dari 3,3 milyar pasang basa yang memibentuk genom manusia, hanya sekitar 1/1000 atau 3 jjta perbedaan diantara setiap individu dalam populasi di dunia,* Untuk melihat perbedaan di antara individu, hanya sebagian kecil dari fraksi DNA yang berbeda yang ditargetkan untuk DNA genotyping. Walaupun demikian dalam penggunaan DNA tersebut sebagai marker terda- pat suatu seleksi yang luas untuk diperbandingkan. Materi genetik mempunyai derajat polimor- fik yang tinggi Karena itu genotip dari tap individu merupakan suatu ciri yang spesifik bagi individu tersebut, kecvali pada kembar identik. Dalam prakteknya saat ini belum memungkin- Jkan penggunazn semua lokus yang berbeda dalam analisis DNA, Walaupun demikian dengan penggunaan DNA marker yang dipilih untuk melihat regio DNA dengan derajat polimorfik ‘yang tinggi, probabilitas identifikasi positif (dan alternatif eksklusi posti) biasanya lebih tinggi ‘ibandingkan metode forensik tradisional. Demikian pula regio yang tidak mengkode produk tertentu (merupakan 99 % dari seluruh genom) sangat berguna karena pada regio inilah terda- pat urutan tasa DNA yang berulang-ulang yang disebut satelit. Pada manusia regio satclit ‘meliput 30 % dari genom dengan derajat polimorfik yang tinggi." Dewasa ini sidik DNA = DNA genotyping = DNA analysis = DNA finger printing = DNA profiling) dapat dikatakan merupakan suatu sarana rutin dalam identifikasi manusia ferutama di negara maju, telapi belum merupakan pilihan yang utama karena prosesnya lama, biasanya mahal dan belum dikenal secara meluas dalam analisis forensik dibandingkan metode tradisional. Tyjuan penulisan makalah ini adalah untuk membahas metode dan teknik yang sesuai untuk analisis DNA dibidang forensik. Selain itu juga untuk membandingkan DNA genotyping dengan metode forensik tradisional Analisis DNA di Bidang Forensik Metode Analisis DNA di bidang forensik dimutai dengan pengambitan sampel. Ukuran sampel yang dianjurkan terdapat pada tabel 1, tetapi dengan menggunakan metode PCR (Polymerase Chain Reaction) ukuran sampel pada dasarnya jauh lebih sedikit, bahkan sampai satu sel sekalipun.! ‘abel L. Ukuran sampel yang dianjurkan untuk Analisis DNA." Bile Amplifkasi dengan PCR tidak digunakan. MACAMJARINGAN KUANTITAS (a) Darah so* Semen lo Hat, ginjl, kuti 1s* cot 25" Keterangan: Sermo el berint mislays twang, 80 olkel rmbt dea lan spat Daly bento ork sept deter Febibbesar dar 18mmSampel dikumpulkan dengan hati-hati, harus dihindarkan kontaminasi dengan DNA sing. CCaranya, operator menggunakan sarung tangan dan penempatan sampel lebih baik pada secar- ik kertas dasipada dalam kantung plastik guna mencegah rusaknya DNA karena infeksi oleh jamur, Suatu keuntungan bahwa DNA merupakan materi yang kuat, walaupun diambil dari bercak darah atau semen yang sudah berumur lebih dari 10 tahun. Jaringan yang dibekukan atau spesimen yang difiksasi dengan etanol atau buffer formaldehid lebih baik digunakan untuk Jaringan yang berasal dari autopsi. Sampel Kering ditempatlan pada tempat yang sejuk dengan dessicant atau dalam keadaan boku, Jaringan autopsi dibungkus dengan alumunium foil dan ditempatkan dalam kantung plas- tik untuk segera dibekukan pada temperatur -20°C sampai -80°C. Penting mencatat keadaan spesimen, Kemungkinan-kemungkinan kontaminasi DNA asing, temperatur tuang penyimpanan dan informasi yang berguna dikemudian hari Classic Restriction Fragment Length Polymorphisms (RFLP) disebabkan karena perubahan sepasang basa pada DNA. Perubahan pada suatu basa menyebabkan hilangaya atau bertam- bahnya sisi enzim restriksi, selanjutnya terjadi suatu fragmen restrksi yang lebih panjang atau lebih pendek, Ukuran polimorfisme yang dikenal sehagai DNA marker dapat digunakan seba- fai sidik jari DNA. DNA dapat disolasi dari setiap sel yang berinti (ermasuk juga DNA mitokondria yang diturunkan secara materal dapat digunakan), DNA tersebut dapat dipotong, dengan enzim restrksi. Biasanya digunakan enzim dengan 4 recognition sites (Hinfi, Mbol, ‘Alul, Ha IID untuk sidik jari DNA karena akan dihasilkan distribusi fragmen DNA (panjang berkisar 1,5 - 30 kb) yang sesuai untuk teknik pemisahan menggunakan gel elektroforesis dengan agarose (0,7 %). Sidik jari DNA dilihat melalui_klasfikasi bentuk pita dari ukuran-ukuran fragmen pada elektroforesis kemudian ditransfer dalam membran imobilisasi (Southern blots). Analisis DNA yang sederhana sekalipun yaitu dengan single locus DNA markers dapat sangat poteasial untuk identifikasi dalam sistem multialel, walaupun analisis multilokus dapat lebih efektif). Pengeta- huan tentang frekuensi polimorfisme DNA di dalam suatu populasi memungkinkan perkiraan ‘kuantitatif dari probabilitas diterima atau tidaknya identitas atau hubungan Keluarga. Untule tmendapat probabiltas identifkasi yang tinggi, lokus polimorfk yang diketahui frekuensinya dalam suatu populasi dapat diplin sebagai markers. Di samping itu sebanyak mungkia mark- ers genetik dapat digunakan; sebagai contoh menggunakan 3 lokus VNTR (Variable Number Tandem Repeat) memberikan potensi rata-rata | dari S00 orang, Enam lokus memberikan 1 dari 200,000 orang dan 12 lokus 1 dari 90 juta.” Fiksasi DNA dengan PCR untuk sampel jumlah Keel dapat meningkatkan sensitftas anal sis DNA. PCR telah dipermudah dengan penggunaan heat-stable enzyme taq polymerase dari ‘Thermophilus aquaticus dan dilengkapi dengan pengatur temperatur yang otomatis. Harus diperhatikan penanganan sampel supaya tidak terjadi kontaminasi. Karena kontaminasi DNA asing yang sangat keel selalipun dapat menyebabkan kesalahan yang besar, Untuk tujuan amplifikasi DNA dengan PCR, destruksi inti sel dan pemanasan sampel biasanya sudah cukup. Kirackira 25-1000 ng dari DNA manusia digunakan pada setiap reaksi PCR yang dapat ‘memproduks jumlah sekuens target yang tidak terbatas.? Tingkat Kepercayzan Analisa DNA. Analisis DNA hanya dapat dipercaya bila mengguna- kan prosedur dasar genetika molekuler yang dapat menunjukkan perbedaan antara individu. Dewasa ini validitas dari pendelatan analisis DNA yang berhubungan dengan prinsip-prinsip dlasar tidak lagi diragukan.* Walaupun demikian tidak berarti dari hasil analisis DNA tidak ada ‘kesalahan. Misalnya, Keraguan tentang kualitas masih tetap diperdebatkan seperti juga teknik forensik lainnya, Kemungkinan Kesalahan yang terjadi dalam Kesalahan analisis DNA antara Jain kontaminasi dari sampel oleh DNA asing, destruksi DNA seat penyimpanan atau persia- 2