Hoyos Ana, Lafont Oriana, Montoya Melisa, Dilicio Angie

CROMATOGRAFIA
Estudiantes de Ingeniería de Alimentos

La cromatografía es una técnica de análisis químico cuyo objetivo es la

separación de sustancias puras en mezclas complejas. Esta técnica depende del
principio de absorción selectiva. En este laboratorio recurrimos a un método
confiable como la cromatografía de papel.

Unas muestras liquida (fase móvil) fluye por un papel verticalmente (fase
estacionaria) sobre la cual se separan los componentes en lugares específicos.
La cromatografía es utilizada en bioquímica para la separación de aminoácidos,
determinación de proteínas y pigmentos.
Palabras claves: cromatografía, papel, separación, absorción, fase.

1. Introducción Distancia recorrida por el

compuesto / Distancia recorrida por
La cromatografía describe un
el disolvente. A distancia que
procedimiento químico en el que se
recorre el compuesto se suele medir
separa una mezcla en su sus
desde el centro de la mancha, por lo
componentes individuales mediante
cual se suelen hacer unas marcas
una fase móvil y una fase
en la placa, si dichas manchas son
estacionaria. La fase estacionaria
extremadamente grandes, el valor
consta, según el procedimiento, de
del Rf será erróneo. Así realizamos
materia sólida o un líquido, y la fase
unas marcas en la placa donde
móvil de un líquido o gas. La
depositaremos con ayuda de un
relación de las distancias recorridas
capilar un mínimo de muestra.
por el compuesto y por el
Cuanto más polar sea el
disolvente, desde el punto de origen
compuesto, más retenido estará en
del cromatograma, se conoce como
el absorbente, y por tanto irá más
Rf (rate factor), el cual posee un
lento y el Rf será también menor.
valor constante para cada
Por otra parte, los compuestos poco
compuesto en condiciones
polares, se consiguen desplazar a
determinadas. Estas condiciones
más distancia desde el origen. La
pueden ser el tipo de absorbente
polaridad del disolvente influye en el
utilizado, el tamaño de la cubeta, la
valor del Rf, por lo que deberemos
temperatura, el disolvente, etc. Es
tenerlo en cuenta. Así, para un
poco factible reproducir
mismo tipo de compuesto, un
exactamente las condiciones
aumento de la polaridad del
experimentales, así que se suele
disolvente hará aumentar su
comparar una muestra con otra,
desplazamiento en la placa y por lo
eluyendo ambas dentro de la misma
tanto también aumentará su Rf
placa. Así, para poder calcular el Rf,
se sigue la siguiente fórmula: Rf =

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El siguiente artículo pretende Papel y marcamos con un lápiz la

interpretar un cromatograma de
unas muestras en papel para
calcular su Rf para identificar una
muestra determinada
2. Materiales y métodos
altura alcanzada, dejamos secar en
la estufa y finalmente revelamos con
ninhidrina al 0,1 % en acetona y
secamos para después observar las
manchas en el papel que nos

Señalan la presencia de
 Papel filtro
aminoácidos
 Tubos capilares
 Estufa a 100 ºC 3. Resultados y discusión
 Revelador: solución de
Hicimos una relación de acuerdo
ninhidrina al 0.1 % en
con la muestra y el solvente para
acetona
determinar el Rf
 Muestras(Lisina 0.1 N,
Treononina 0.1 N, Valina 0,1 Los datos del presente artículo
N, Mezcla) fueron obtenidos mediante pruebas
cromatógrafos en papel, en todos
los casos se presentaron manchas
a la misma altura del papel

Cortamos el papel en dimensiones

15x12 cm, trazamos con un lápiz al
largo de una de las extremidades a
2,5 cm de los bordes, luego
marcamos puntos diferentes a lo
largo de la raya para la aplicación
de la muestra estándar, aplicamos
círculos de las soluciones usando
tubos capilares después de eso
dimos forma cilíndrica al papel con
ayuda de una grapadora. Luego de Figura 1: Aminoácidos
todo eso introdujimos el papel en la
cámara cromatografía teniendo
cuidado de no dejar que el papel
acá contacto directo enseguida con
el solvente, sellamos y esperamos
que el solvente suba hasta más o
menos alcanzar 1 cm de la
extremidad superior del papel
después retiramos el cilindro de

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Figura 2: Cilindro en el montaje

cromatógrafo

Figura 4: Resultado de la muestras

 Treonina 0,1N
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑡𝑟𝑒𝑜𝑛𝑖𝑛𝑎
Rf= 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒

1𝑐𝑚
= Rf1 0,20 cm
4,8𝑐𝑚

 Mezcla de
aminoácidos
Figura 3: revelación con ninhidrina 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑚𝑒𝑧𝑐𝑙𝑎
Rf= 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒

0,8 𝑐𝑚
= Rf2 0,17 cm
4,8 𝑐𝑚

 Lisina 0,1 N
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑙𝑖𝑠𝑖𝑛𝑎
Rf= 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒 =
0,3 𝑐𝑚
= Rf3 0,06 cm
4,8 𝑐𝑚

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 Valina 0,1 N
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑣𝑎𝑙𝑖𝑛𝑎
Rf= 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒

2,3 𝑐𝑚
= Rf4 0,47 cm
4,8𝑐𝑚

Al realizar la cromatografía de
papel con soluciones de
aminoácidos, se obtuvieron
manchas de color violeta,
observamos el desplazamiento de
los aminoácidos gracias a la
reacción con ninhidrina que nos
sirvió como base para la
cuantificación

Conclusión

La cromatografía en papel es un
método sencillo y práctico para la
determinación de aminoácidos,
calculamos e identificamos las
muestras y sus recorridos
Bibliografía

HOLME DJ. Química analítica ED

ACRIBIA S.A1987
MURRAY –ROBERT BIOQUIMICA
DE HARPER

BOHINSKI-ROBERT- BIOQUIMICA
PEARSON EDUCACION 5ºA ED
1998

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