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EXTRACCIÓN DE ADN
HARITH BRAVO
JENNIFFER GRANDA
MICHELLE MANZELLA
PAOLA MONTENEGRO
El ADN no existe como molécula libre dentro de las células, solo se puede encontrar
en los cromosomas dentro del núcleo (en el caso de los eucariotas); asociado a
numerosas proteínas (histonas por ejemplo) y ARN. Debido a lo anterior, la
extracción de ADN es una técnica fundamental (y un paso esencial) para la mayoría
de las técnicas y análisis en Biología Molecular.
Dado lo expuesto anteriormente, para extraer los ácidos nucleicos del material
biológico es preciso provocar una lisis celular, inactivar las nucleasas celulares y
separar los ácidos nucleicos de los restos de células. El procedimiento de lisis
idóneo suele consistir en un equilibrio de técnicas y ha de ser suficientemente fuerte
para romper el material inicial complejo (un tejido, por ejemplo), pero
suficientemente suave para preservar el ácido nucleico diana.
Entre los procedimientos usuales de lisis figuran rotura mecánica (trituración, lisis
hipotónica); tratamiento químico (detergentes) y digestión enzimática (Proteinasa K).
En nuestro caso la lisis de la membrana celular la produciremos utilizando un
detergente convencional (Jabón líquido) y la lisis de la pared celular la produciremos
utilizando un método mecánico (licuar).
Materiales:
Semillas de lentejas
Cebolla( fresca)
Espinaca(fresca)
Ablandador de carne
Alcohol al 95%(frío)
Una licuadora
Un colador
Papel filtro o filtro de café
Jabón vel liquido
Sal (NaCl)
Procedimiento
1. Lo primero que hicimos fue preparar 3 vasos químicos donde vertimos 50ml
de agua y un puñado de NaCl.
2. En otros 3 vasos químicos colocamos media taza de lentejas, espinaca y
cebolla respectivamente.
3. En cada vaso químico vertimos la solución de NaCl y la dejamos reposar por
5 minutos.
4. Posterior a esto procesamos por separado cada solución en la licuadora por
20 segundos.
5. Utilizando el colador filtramos las soluciones en vasos químicos distintos.
6. Agregamos 2 cucharadas de detergente líquido y revolvimos suavemente sin
formar espuma.
7. Dejamos reposar las soluciones por 10 minutos.
8. Agregamos el ablandador de carne en cada solución y revolvimos
suavemente con ayuda del policial.
9. Trasvasamos las soluciones en tubos de ensayos.
10. Inmediatamente vertimos por las paredes de los tubos de ensayo el alcohol
frío.
11. El ADN precipito y pudimos retirarlo con ayuda del policial.
Observaciones:
Al entrar al laboratorio nos percatamos de que estaba sucio así que lo primero que
hicimos fue limpiar el área de trabajo antes de comenzar.
Mientras tanto vertimos lentejas en un vaso químico hasta que estuviera un poco
más de la mitad. También vertimos hojas de espinaca en otro vaso químico todo
esto mientras diluíamos 3 vasos químicos con NaCl.
Al licuar la solución #2 notamos que tenía una textura viscosa y gelatinosa color
verde por su abundante cantidad de cloroplasto.
Solución #2 Espinacas siendo licuadas
Residuos de lentejas
Resultados:
Una vez que dejamos reposar los tubos de ensayo con el alcohol frío obtuvimos los
siguientes resultados:
ADN precipitado
Residuos de cloroplasto
Al poco tiempo de haber agregado el alcohol a las muestras a las cuales se les
había añadido ablandador de carne, comenzaron a precipitar las fibras de ADN. El
ADN se evidencia en forma de fibras mucilaginosas blanquecinas que aparecen
flotando en el etanol. Inicialmente, cuando comenzaba la precipitación, se podría
observar una sustancia blanca casi transparente que se “desprendía” del líquido de
fondo.
En la imagen presentada
a la derecha podemos
apreciar con mayor
detenimiento el ADN
precipitado en el alcohol
frío.
Discusión