TRADUCCION DEL LIBRO: NEW GENERATION VACCINES

CAPITULO 69: An Anti-arthropod vaccine: TickGARD-A vaccine to prevent

cattle tick infestations.

UNA VACUNA CONTRA ARTROPODO: TickGARD-UNA VACUNA PARA

PREVENIR INFESTACIONES POR GARRAPATAS EN VACUNOS.

Garry S. Cobon
Biotech Australia Pty. Ltd., Sydney, New South Wales, Australia

INTRODUCCION

El concepto de desarrollo de vacunas contra parásitos de humanos y animales ha

tenido un largo sueño de los vacunólogos y en forma similar de los parasitólogos. Hace
muchos años, se ha hecho una inversión grande de fondos de investigación con estos
objetivos en mente. En general las consecuencias han sido desafortunadas. Ha habido
buen progreso en la identificación de un gran número de los componentes de los
parásitos basado en una variedad de criterios que podrían servir como potenciales
antígenos para tales vacunas. Sin embargo, solamente con una sola excepción, ninguno
ha satisfecho con el criterio requerido que demanda un producto comercial. TickGARD,
una vacuna que ayuda en el control de la garrapata Bophylus microplus en vacunos, es
la primera vacuna recombinante de subunidades contra los parásitos para ser registrada
y lanzada comercialmente alrededor del mundo. Ciertamente, solo hay una sola vacuna
recombinante registrada (Hepatitis B).
Algunas de las experiencias durante el desarrollo de TickGARD sirven para
ilustrar la magnitud de la dureza encontrada en el progreso de la identificación de un
clon recombinante que exprese un antígeno potencialmente protectivo y lanzar una
vacuna comercial. Esto sería de aplicabilidad general para todas aquellas vacunas del
mismo tipo para humanos o para animales domésticos.

STRATEGIA DE INVESTIGACION

Identificación de Antígenos.

La identificación de antígenos para vacunas contra parásitos puede seguir alguno

de los varios métodos discutidos en mayor detalle en el capítulo 3 de este libro. El
siguiente, resume algunos de los principales métodos que han sido probados.
Uno puede concentrar los antígenos a los cuales un animal infectado monta una
respuesta inmune: Antígenos presumidos de estar involucrados en la inmunidad natural
que un hospedero monta a la infección. Estos son generalmente en número muy grande:
en algunos casos, un animal infectado puede montar una respuesta inmune a todos los
componentes del parásito (1). Es claro que la mayoría de estos antígenos no están
involucrados en la inmunidad protectiva y es muy difícil luego distinguir los
componentes del parásito responsables para una respuesta inmune protectiva. Esto es
particularmente el caso, si la naturaleza de los mecanismos de la inmunidad protectiva
son desconocidos. Investigando los componentes del parásito que conducen a una
respuesta inmune sistémica, por ejemplo, no podría por completo ser relevante para el
estado inmune protectivo del animal y en realidad podría estar en contra del estado
protectivo. Pueden citarse varias instancias en donde se ha hipotetizado que la infección
parasitaria en realidad modula adversamente el estado inmune del hospedero.

Sin embargo, si se toma este curso, muchos clones diferentes de cADN podrían ser
aislados basados en la reacción con anticuerpos de animales inmunes. Luego el desafío
es determinar cual si alguno de los antígenos aislados, esta involucrado en la respuesta
inmune protectiva. Desafortunadamente, con este acercamiento, no hay seguridad
absoluta que las moléculas clonadas son protectivas. Sin embargo, esto puede llegar
hasta el estado donde recursos sustanciales están asignados a un antígeno particulatr y el
objetivo de la investigación se orienta en un intento para demostrar que le antígenos es
protectivo en vez de probar si es o no protectivo. Aunque la distinción podría verse sutil,
es vital, como muchos miles de dólares se pueden desperdiciar en esta actividad
infructuosa.
Es bastante conocido que la mejor estrategia es vacunar los animales con los
extractos de parásitos y luego desafiar aquellos animales con el parásito. Un extracto
que demuestra un efecto protectivo, sin importar la debilidad, puede purificarse aún
mas, resultando finalmente en la identificación de los componentes protectivos como
una consecuencia de una serie de experimentos de desafío, fraccionamiento y
vacunación. Esto remueve los riesgos técnicos del proyecto en un estado temprano. Es
cierto que los extractos a ser investigados contienen componentes protectivos y que el
régimen de vacunación esta estimulando una respuesta inmune protectiva- p.ej., que es
posible un método de vacunación. Adicionalmente, si el régimen de vacunación es uno
que podría ser aceptable en el mercado para el producto final, las ganancias comerciales
se incrementan consecutivamente. Este es el método que nosotros hemos adoptado a
Biotech Australia y CSIRO en la busca de antígenos protectivos de las garrapatas (2).
Desafortunadamente este método no puede ser adoptado para todos los parásitos.
Una de las mayores limitaciones de los métodos prácticos para la identificación de
antígenos es que se requiere grandes cantidades de parásitos. Durante la purificación de
Bm86, el antígeno contenido en TickGARD, se tuvo que usar mas de un kilogramo de
garrapatas en aras de purificar 20-100ug de antígeno para el análisis de las secuencias
de péptidos (2). Para cada experimento, algo como 60,000 garrapatas tuvieron que ser
arrancado manualmente con pinzas de vacunos para obtener esta cantidad de parásitos.
Similarmente con la investigación sobre una vacuna contra Haemonchus contortus, el
nemátode gastrointestinal de ovejas, 50 ovejas tuvieron que ser infectadas y
beneficiadas 2 semanas mas tarde para proveer suficiente cantidad de parásitos adultos
requeridos para purificar uno de los antígenos candidatos (datos no publicados).
Es esencial, en este programa, mantener un grado sobresaliente de excelencia
técnica. La calidad química de la proteína usada durante el aislamiento de Bm86 ilustra
muy bien éste (2). Pocos bioquímicos podrían imaginarse purificando una proteína de
un extracto crudo de un volumen más de un millón de veces la proteína purificada,
especialmente usando solamente 32 pruebas en total. Sin embargo, esto se alcanzó
durante la purificación de Bm86. En esta instancia, cada prueba de 4 meses involucró la
vacunación de un grupo de 3 vacunos, luego un refuerzo 4 semanas mas tarde y luego 2
semanas después de éste, desafiando luego con garrapatas cada día por 3 semanas, luego
colectando, contando y pesando todas las garrapatas que cayeron de los animales,
incubando aquellas garrapatas para permitir la producción de huevos y pesando la masa
de huevos. Una vez que la fracción efectiva fue identificada, se fraccionó aún más en el
siguiente experimento hasta que fue aislada la proteína pura. Un total de 32 grupos de
tres vacunos se usó en el periodo de 4 años para purificar Bm86 de más de un millón de
veces de volumen de un homogenizado crudo de garrapatas.
EL USO DE HOSPEDEROS MODELOS

Se está probando el uso de sistemas hospedero-parásitos como modelo en vez de

concentrarse en las combinaciones naturales. Nuestra experiencia durante la fase de
investigación de Tick-GARD y con nuestras vacunas de nemátodes demostró grandes
beneficios de la concentración en hospederos naturales. Los parásitos parasitan
hospederos particulares por muy buenas razones. Ellos también han hecho posible de
sobrevivir con ese hospedero por muy buenas razones. Uno de los principales
mecanismos que se han propuesto es la mimetización de los antígenos del hospedero.
De allí que los antígenos que podrían aislarse usando modelos, podría no ser protectivo
en el hospedero natural debido a la falta de inmunogenicidad. Ciertamente que con
patógenos humano, tienen que utilizarse sistemas modelos aunque aquellos podrían no
ser ideales.
Las dificultades que se puede encontrar en esta situación se ilustran por el
aislamiento del antígenos tropomiosina de Trichostrongylus colubriformis un nemátode
parásito de ovejas. Los cuyes han sido un modelo muy popular para éste parásito por
varios años. Ellos han sido vacunados con extractos de éste nemátode en programas
orientados a la identificación de antígenos protectivos. En un estudio, el antígeno
aislado como un resultado de esta investigación se identificó de la secuencia de ADN
del gen clonado de ser tropomiosina. El gen de la tropomiosina de T. colubriformis ha
sido expresado en forma recombinante y usado para vacunar ovejas en un gran número
de experimentos. En estos estudios no se ha observado protección significativa en
ovejas, a pesar de que la proteína recombinante protegería en forma efectiva a los cuyes.
Esto podría deberse a las dificultades en estimular la respuesta inmune requerida
mediante la vacunación parenteral de las ovejas. Sin embargo, el gen de T.
colubriformis se usó para aislar un gen homólogo de otro parásito gastrointestinal de
ovejas, Haemonchus contortus. El antígeno recombinante del último parásito ha sido
altamente protectivo en las pruebas de vacunación en ovejas.
Similarmente con TickGARD, los ratones vacunados con formulaciones de
Bm86 alcanza títulos altos y persistentes de anticuerpos, mientras que los vacunos
vacunados con las mismas formulaciones, alcanzan un pico de títulos de anticuerpos 2 a
4 semanas después de la vacunación y declina subsecuentemente, con una vida media de
aproximadamente 4 semanas. La credibilidad en los datos de ratones en esta instancia
podría haber sido muy errónea.

ANTIGENOS NUEVOS O ESCONDIDOS

TickGARD contiene una forma recombinante de una glicoproteína de garrapata

localizada en la superficie del lumen del tracto intestinal de las garrapatas (3). Como
con muchos antígenos candidatos en consideración para la generación de nuevas
vacunas recombinantes, el sistema inmune del animal hospedero no es reforzado
durante la infección natural con el parásito. Tales antígenos han sido denominados
“nuevos” (debido a que estos no están comprometidos en la respuesta inmune natural
montada por un hospedero durante la infección natural) o antígenos “escondidos”
(debido a estos no se exponen al sistema inmune del hospedero durante una infección
natural).
Hay algunas ventajas teóricas para usar tales antígenos nuevos en una vacuna
recombinate contra parásitos. La mayoría de parásitos han desarrollado gradualmente
para vivir en armonía con su hospedero y en este trance han derivado muchos medios
por los cuales ellos pueden tolerar la respuesta inmune del hospedero durante la
infección. Por ejemplo, se ha propuesto que los parásitos podrían desviar la respuesta
inmune hacia una respuesta no protectiva o que el parásito podría expresar componentes
de la superficie los cuales el hospedero falla de reconocerlos como extraños debido a
que ellos semejan a las proteínas del hospedero. Para algunos parásitos, la evasión a la
respuesta inmune, podría involucrar la exposición de una gran cantidad de componentes
de parásitos altamente inmunogénicos a los cuales el sistema inmune del hospedero
responde vigorosamente, minimizando la respuesta inmune a los componentes
relevantes potencialmente protectivos del parásito. Es frecuentemente la respuesta
inmune, particularmente una respuesta de hipersensibilidad, que el hospedero monta
hacia los antígenos del parásito la responsable por los efectos adversos que el hospedero
sufre como consecuencia de la infección parasitaria. Es no deseable producir esas
respuestas inmunes nocivas con un producto comercial.
Mediante la incorporación de antígenos nuevos o escondidos en una vacuna, la
mayoría de estos problemas pueden ser sobrepasados o prevenidos toda vez que un
antígeno protectivo escondido se puede identificar. No ha habido necesidad para el
parásito de desarrollar progresivamente medios por los cuales los antígenos escondidos
podrían ser pobremente inmunogénicos; las vacunas se pueden dar antes de las
infecciones por parásitos y poder evitar cualquier mecanismo de evasión al sistema
inmune que puede inducir el parásito; el antígeno puede ser presentado en la presencia
de un adyuvante poderoso que dirigiría la respuesta inmune hacia una respuesta
protectiva; y los antígenos escondidos pueden operar por mecanismos inmunes que no
son dañinos al hospedero animal.
Sin embargo, el desarrollo de las vacunas conteniendo antígenos nuevos o
escondidos presenta un número de otros desafíos. Tales vacunas tienen que ser
diseñadas para estimular una inmunidad alta y persistente en la mayoría de la población
de animales. El sistema inmune del hospedero no está expuesto al antígeno durante la
infección y así no es potenciado durante la infección. De allí que los animales deben
montar una respuesta alta solamente como resultado de una vacunación. Es esencial que
las vacunas que contienen antígenos nuevos o escondidos sean manufacturados a una
alta y consistente calidad en orden de asegurar máxima inmunogencidad del producto.
Este requerimiento es bastante mas importante que con las vacunas convencionales,
donde el objetivo es estimular el sistema inmune del hospedero de tal manera que este
responda rápidamente cuando infecta el patógeno.
La inmunidad se mantiene solamente mientras la respuesta del sistema inmune
está por encima de un nivel particular. Es necesario por lo tanto , potenciar los animales
con vacunas que contienen antígenos nuevos. Esta tiene desventajas comerciales obvias.
Es deseable para tales vacunas estimular una respuesta inmune persistente, si es posible,
en orden de minimizar la frecuencia de tales vacunaciones potenciadotas. Otra vez, este
requerimiento es mas importante para las vacunas que contienen antígenos escondidos
en vez de aquellas que contienen antígenos convencionales. Finalmente, es esencial que
una alta proporción de animales en la población respondan a la vacuna. Los animales
que responden pobremente entre una población contribuye sustancialmente al nivel de
infestación por parásitos y minimiza el efecto del programa de vacunación.
En resumen, en el desarrollo de un producto comercial basados en antígenos
escondidos, debe de ponerse considerable atención para desarrollar los medios óptimos
para estimular respuestas inmunes altas y persistentes en la mayoría de de la población
de hospederos. Los medios clásicos por los cuales pueden alcanzarse estos objetivos son
a través del uso de adyuvantes, el cual es el tópico de la siguiente sección.
ADICION DE ADYUVANTES

TickGARD es una de las muy pocas si no solamente la única vacuna comercial

en el mercado que es críticamente dependiente de un alto título de anticuerpos para su
eficacia. Desde que el adyuvantamiento y la calidad de la formulación son vitales para
el perfomance óptimo de la vacuna, estos parámetros han sido investigados
enteramente. Durante el desarrollo de TickGARD, hemos probado mas de 40
formulaciones de adyuvantes diferentes en vacunos y otros 50 o mas en modelos
animales. Como una consecuencia de este esfuerzo, se puede afirmar con seguridad que
la mayoría de los reclamos que se hacen para las formulaciones de adyuvantes en la
literatura científica no son aplicables generalmente a todos los antígenos, no son
aplicables a todas las especies animales.
El resultado de toda esta investigación es que las formulaciones aceitosas
convencionales son los mejores medios para estimular un alto título de anticuerpos. En
vacunos, la respuesta inmune alcanza un pico a las 2 a 4 semanas después de la
aplicación de la vacuna y luego baja con una vida media de aproximadamente 4
semanas. Las formulaciones similares inyectadas en ratones estimulan un alto título de
anticuerpos, el cual alcanza un pico también aproximadamente a las 4 semanas después
de la aplicación pero persiste por muchos meses. Podríamos citar varios ejemplos de
formulaciones que han sido mostradas en ratones de dar respuestas altas y persistentes
de anticuerpos pero en vacunos condujo a respuestas bajas y pasajeras. Esta observación
resalta la necesidad de conducir la investigación en la especie hospedero en la que se
produce la infección como sea posible. Usando animales de laboratorio para
investigación en el desarrollo de tales adyuvantes es por consiguiente de poco o ningún
significado.
Algunas otras observaciones interesantes han emergido de este trabajo. Parece
que la vacunación primaria es crítica para el perfomance subsecuente del animal
individual. Si la respuesta inmune a la vacunación primaria es baja, las inyecciones
subsecuentes de la misma formulación – se han probado tantas como ocho-fallaron para
estimular alguna otra que no sea una respuesta baja. No es claro porque esto debería ser
el caso y es un desafío considerable para desarrollar medios por los cuales este estado
de respuesta puede mejorarse una vez que este se ha iniciado. La adición de adyuvantes
no es la respuesta simple.
Este fenómeno parece no ser simplemente restringido al complejo mayor de
histocompatibilidad (MHC). En general, parece que los vacunos los cuales responden en
forma más alta a un antígeno recombinante, tendrían también altas respuestas a otros
antígenos recombinantes no relacionados. Sin embargo hay siempre excepciones y
tenemos evidencia que algunos antígenos estimulan respuestas inmunes más altas en
algunos vacunos mientras que un segundo antígeno recombinante no relacionado no es
tan inmunogénico. De esta observación, es difícil decidir si los mejores medios para
mejorar la respuesta inmune e investigar epitopos de las células T en los antígenos o si
la limitación es una restricción genética inherente a los individuos animales. Sin
embargo de estas observaciones es claro que la adición de adyuvantes no provee todas
las respuestas.

APLICACIÓN EN EL CAMPO

Una gran cantidad de trabajo desarrollado tempranamente para TickGARD se condujo

con vacunos confinados bajo condiciones experimentales en corrales usando un
aislamiento de garrapatas que han estado en cultivo en el laboratorio por varios años.
Los resultados de esos trabajos fueron muy alentadores. Cuando vacunos vacunados se
desafiaron con garrapatas, hubo una reducción significativa en la sobrevivencia de las
garrapatas del desafío (en el orden de 20-30%), los parásitos sobrevivientes fueron mas
pequeños en tamaño (40-50% de reducción en peso promedio) y ellos fueron menos
fértiles. Las consecuencias generales de estos efectos fue la reducción del peso total de
los huevos producidos por las garrapatas hasta en un 90% comparado con aquellos de
garrapatas de los animales controles no vacunados.
Estos trabajos se condujeron varias veces con una variedad de formas y
formulaciones de antígeno. Hubo una gran tendencia a continuar con el trabajo de
desafío en el campo orientados a optimizar mas los efectos de la vacuna. Sin embargo,
afortunadamente para nosotros mismos, un productor de vacunos del área endémica
para garrapatas quien había estado siguiendo el desarrollo de la vacuna contra
garrapatas con gran interés nos apoyó con el solo objetivo de tener las vacunas probadas
en su propiedad. Con respecto a lo precedente, ésta fue la mejor cosa que podría haber
pasado, como estos experimentos resaltaron una serie de de problemas diferentes los
cuales no podrían haber sido considerados si hubiéramos continuado con mas
investigación experimental (4,5).
Primero, vacunos en el campo tienden a responder menos vigorosamente a la
vacunación que los vacunos confinados bajo condiciones mas controladas. En si mismo,
esto probable no es una sorpresa. Sin embargo, identificando la razón para esta
diferencia ha comprobado de ser algo mas difícil que lo imaginado inicialmente.
Podemos decir con certeza que esto no se relaciona con la raza. Vacunos de una gran
variedad de razas han sido ahora vacunados y mostraron responder en una manera
similar.
Podemos decir que esto no está relacionado con el sexo. Generalmente, toros
intactos pueden responder un poco menos vigorosamente que las vacas, vaquillonas,
bueyes. Sin embargo, la magnitud de la diferencia es no suficiente para tener en cuenta
las diferencias en el campo.
Podemos decir que no está relacionada con la edad. Los terneros responden un
poco mejor que animales de mayor edad, pero otra vez, la magnitud de estas diferencias
es pequeña.
Podemos decir que no esta relacionado al estado nutricional simplemente. Ha
habido ejemplos de vacunos que han estado en pobre condición corporal (como
resultado de 5 años de sequía continua a través de las áreas endémicas a garrapatas en
Australia) pero estos respondieron vigorosamente a la vacunación. Por el contrario, ha
habido ejemplos de animales que han estado en excelente condición corporal pero han
respondido pobremente. Hay la posibilidad de que podría haber algún nutriente esencial
o vitamina que falte en la dieta de los animales que responden más bajo. Sin embargo,
los intentos para identificar los factores críticos no pueden ser justificados al menos que
haya algún medio relativamente simple mediante los cuales la deficiencia podría ser
mejorada con los animales en la situación de campo.
Podemos decir que los animales durante el tercer tercio de gestación parecen
estar parcialmente inmunodeprimidos. La magnitud de los títulos de anticuerpos
generados tanto a una vacunación primaria o secundaria es algo menor en esos
animales. Este es un fenómeno temporal y se recupera seguido al parto.
Podemos decir que la co-presentación de otras vacunas comerciales no impide
significativamente la habilidad de los vacunos para responder a TickGARD. La mayoría
de vacunas para ser inyectadas al mismo tiempo con una aplicación de TickGARD han
sido probadas sin ninguna disminución en la respuesta.
 Sorpresivamente, cualquiera sea el evento que podría ser considerado de ser
altamente estresante – tal como destete, castración, descorne y/o marcado – no parece
impedir la habilidad de los vacunos para responder vigorosamente a TickGARD. Esta
deja la posibilidad que el estrés asociado con congestionamiento de los animales en
áreas reducidas podría encubrir cualquiera de los otros eventos de estrés. Sin embargo,
esta posibilidad no se puede probar simplemente.
Dada toda esta información y las dificultades en solucionar los problemas, nos
hemos enfrentado con ninguna opción, pero recomendar un programa para el uso de
TickGARD que hemos demostrado de ser efectiva en la peor situación en mas de 60
pruebas de campo a los largo de las estaciones. Como una consecuencia, nuestras
recomendaciones para el uso son algo conservadoras. Enfatizamos que toda la población
de vacunos debe ser vacunada que el programa debe empezar cuando la población de
parásitos estaja como un resultado de una campaña química intensiva o condiciones de
clima que son desfavorables para el parásito, que todos los vacunos deben ser
revacunados entre intervalos de 6-10 semanas y que los químicos deben de estar a la
mano en caso de que el número de parásitos alcance niveles altos. Sin embargo, hemos
decidido que es preferible recomendar un programa conservador en vez de correr el
riesgo de que los productores estén insatisfechos.

VARIACION EN SENSIBILIDAD

La segunda sorpresa que resulta del cambio hacia el campo fue los resultados
que diferentes garrapatas difieren en su sensibilidad a los efectos de la vacunación con
TickGARD. Esto podría ser no tan sorprendente por si mismo: uno puede esperar que la
estructura del antígeno Bm86 difiere de una garrapata a otra, de esta manera explicar la
variación en sensibilidad. Sin embargo, las diferencias en sensibilidad a los efectos de la
vacuna no parece de ser una consecuencia de la variación en la secuencia del antígeno
Bm86. Los genes han sido secuenciados de alguna de los aislamientos de garrapatas
más altamente sensibles para Australia y algunos de los menos sensibles. De los 660
aminoácidos que conforma la secuencia primaria de Bm86, hasta 17 han sido
encontrados que difieren entre estos genes. Sin embargo, precisamente los mismos
genes han sido aislados de cada aislamiento de garrapata. Las diferencias en
sensibilidad de las garrapatas no se deben simplemente a la variación en la estructura en
el antígeno Bm86 de aislamiento-a-aislamiento.
De mayor sorpresa en este contexto es el resultado de algunos trabajos en Cuba.
La secuencia de ADN de un gene Bm86 de garrapatas alegadamente aislados en Cuba
ha sido publicado. Remarcablemente, este difiere del clone inicial publicado por
nosotros mismos por solamente 4 bases, solamente uno de los cuales conduce a una
alteración en la secuencia de aminoácidos de la proteína. De estos datos, uno puede
concluir que la variación en la secuencia del gen Bm86 fue más extenso entre
aislamientos dentro de Australia que lo que ocurre internacionalmente. Sin embargo,
nosotros hemos secuenciado el gen Bm86 de garrapatas de México, y Venezuela. En
realidad, el gen de las garrapatas mexicanas codifica para una proteína que tiene 27
aminoácidos diferentes comparados con el gen aislado inicialmente de las garrapatas de
Australia. No es claro donde los investigadores cubanos obtuvieron su gene Bm86, pero
parece de ser relacionado muy cercanamente a los genes australianos. Nosotros hemos
expresado tanto los genes australianos y mexicanos en forma recombinante, vacunado
vacunos y desafiado primero con garrapatas mexicanas y luego con garrapatas de
Australia. Ambos antígenos fueron igualmente efectivos contra ambos aislamientos de
garrapatas.
 De este y otros estudios, es claro que la variación en la secuencia de
aminoácidos de la proteína Bm86 no es el factor clave a tener en cuenta para la
variación en la sensibilidad de los aislamientos de garrapatas a los efectos de las
vacunas. Otros factores todavía no identificado podría tenerse en cuenta para la
diferencia. Esos serían alguno de un gran número de candidatos. Las garrapatas han
desarrollado progresivamente en una variedad de condiciones de temperatura y
humedad. Posiblemente esto conduce a las diferencias en su balance de fluidos, los
cuales podrían afectar el volumen de sangre que ellas tienen que tomar para sobrevivir.
Nosotros tenemos alguna indicación que las garrapatas que se alimentan in Vitro bajo
diferentes condiciones de temperatura o humedad en sangre conteniendo anticuerpos
contra Bm86 son afectadas en forma diferente. Si esto contribuye o no a las
observaciones en el campo y cuanto contribuye se desconoce totalmente y difícil de
probar.

VARIACION EN LA FALTA DE RESPUESTA INMUNE

Una observación subsiguiente que sorprende en el campo es el rango de

respuestas inmune montada por vacunos seguido a la vacunación. Dentro de un grupo
razonablemente homogéneo de vacunos de la misma edad, sexo y estado nutricional y
en la misma pastura, el título de anticuerpos seguida a la vacunación con antígeno en
formulación aceitosa varia en más de cien veces. Esto podría ser una ventaja enorme si
el total de los animales vacunados respondieron vigorosamente a la vacuna, desde que
los animales con respuestas pobres contribuyen significativamente a la población de
parásitos en el campo. Muchas explicaciones posibles se han propuesto para tener en
cuenta en esta variación. La restricción de MHC es una posibilidad obvia. Sin embargo
es difícil comprender porque un antígeno tan largo como Bm86 que contiene 660
aminoácidos le faltaría epitopos de las células T que todos los animales podrían
reconocer potencialmente. Intentos para demostrar una correlación entre el tipo de MHC
y falta de respuesta no ha sido exitoso hasta ahora. Otra observación intrigante es la
variación que puede observarse de propiedad en propiedad. Grupos de vacunos
vacunados exactamente con la misma formulación puede variar en los títulos promedios
por hato por más de 10 veces. Como se mencionó arriba, esta variación no se debe a la
raza, sexo, edad, etc. No parece haber ninguna conexión con infecciones concurrentes o
estado nutricional: Vacunos de buena condición corporal, pueden y ha sido encontrados
de ser los grupos de respuesta pobre mientras que en otras ocasiones, vacunos que no
estuvieron en buenas condiciones corporales respondieron muy vigorosamente a la
vacuna. La consecuencia de estas observaciones para el desarrollo del programa de
TickGARD ha sido profundizadas. Ha sido necesario acomodar el programa a la
situación del peor caso para asegurar la eficacia del producto en todas las circunstancias.
Si se podría obtener medios por los cuales podría eliminarse la variación en la falta de
respuesta, la eficacia del producto en el campo mejoraría dramáticamente. En el
presente los únicos medios por los cuales se puede investigar esto, es probando las
sugerencias empíricamente para mejorar en grupos de 20 vacunos en dos o tres
propiedades diferentes en el campo. Esto es una pérdida de tiempo y costoso y tiene un
bajo índice de éxito.

EL PROGRAMA TickGARD

Una fase crítica en el desarrollo de TickGARD como un producto comercial fue obtener
un programa que tenía una ventaja demostrable para los productores de vacunos. Este
desafío fue presentado a los investigadores por personal oficial y de marketing.
Tradicionalmente, las garrapatas son controladas mediante la aplicación de químicos
altamente efectivos que mata 99% de los parásitos seguido a una aplicación, aunque los
animales se reinfectan rápidamente después de retornar al pasto contaminado.
TickGARD tiene un conjunto diferente de especificaciones. Por consiguiente fue
necesario prepara un programa en vez de simplemente vender el producto.
Es necesario conocer el concepto que se va ha controlar la infestación parasitaria
del hato, mas no el número de garrapatas en los animales individualmente. Como las
garrapatas tienen un ciclo reproductivo de aproximadamente seis semana fue importante
hacer conocer a los productores que fue la siguiente generación de garrapatas que fue
controlada por la vacunación. Los siguientes puntos son los importantes del programa
de TickGARD:
 Deben ser vacunados todos los vacunos del hato
 Los vacunos no deben de moverse de un hato relativamente libre de garrapatas hacia
otro que tiene alto nivel de parásitos.
 Los vacunos deben recibir revacunación regular en aras de mantener niveles efectivos
de anticuerpos.
 En aras de observar los beneficios de la vacuna, es necesario permitir a las garrapatas
alimentarse en animales vacunados: estas garrapatas tienen una fertilidad, lo cual
disminuiría la infestación en la siguiente generación.
 Los efectos de la vacuna son a término prolongado. Por consiguiente los químicos no
debe de aplicarse a los animales vacunados mientras los títulos de anticuerpos son altos,
o los beneficios de los altos títulos de anticuerpos se perderían como las garrapatas no
van ha alimentarse en aquellos animales.
 Químicos con una actividad residual prolongada, no deben de aplicarse junto con la
vacuna.
Estos elementos se incorporaron en el programa, los cuales fueron luego aplicados en
más de 60 propiedades diferentes a través de las áreas endémicas de Australia. Desde
una perspectiva de mercado, fue esencia asegurar que los productores de vacunos en un
rango de localizaciones diferentes y diferentes requerimientos para el control de
garrapatas podrían implementarse el programa exitosamente y obtener beneficios
medibles. Desde una perspectiva de mercado fue necesario cuantificar estos beneficios
en aras de ubicar el producto apropiadamente en el mercado y evitar algún reclamo sin
fundamento. Por consiguiente una cantidad enorme de de trabajo de campo se completó
antes de un lanzamiento del producto. Es de interés notar que los productores de
vacunos fueron bastante astutos apoderándose de los conceptos del programa e
implementando este exitosamente muy rápido. La reacción positiva de los productores
de vacunos al producto influenció fuertemente la decisión para progresar a la siguiente
fase.

SOPORTE AL PRODUCTO

A pesar de todos los trabajos preparatorios, hubo aún algunas preocupaciones acerca si
los productores podrían implementar el programa exitosamente en todas las situaciones,
dado la novedad del concepto, las instrucciones razonablemente complejas para el uso y
las expectativas altas asociadas con el término vacuna, el cual es frecuentemente
asociado con una aplicación por todo el tiempo de vida. Por consiguiente se estableció
un centro de asesoría con un número libre de costo para alentar a los productores a hacer
preguntas antes que inicien el programa. Los revendedores alrededor de toda el área
endémica de garrapatas se les pidio notificar el centro de asesoría de todos los clientes
quienes compraron TickGARD. A los clientes se les telefoneó y se discutió el programa
con ellos para asegurar que ellos estén familiarizados con todos los elementos claves y
que ellos fueron a implementar el programa bajo condiciones apropiadas. A cada cliente
se le ofertó un video libre de costo explicando los aspectos claves involucrados en el
uso del producto. Aunque este nivel de soporte del producto podría haber sido de alguna
manera excesivo, este aseguró que los clientes claves, aquellos quienes fueron
innovativos, probablemente que sean los que toman decisiones locales e influenciar en
las opiniones de otros, ganaron un alto respeto para el producto.
Al final del primer año, los clientes fueron encuestados. El resultado de la
encuesta fue muy positivo. La vasta mayoría de los productores quienes fueron
encuestados argumentaron que ellos tenían la intención usar el producto en un mayor
número de animales que en la primera estación. El éxito comercial del producto ha sido
asegurado por el nivel de soporte dado al producto en la estación inicial.

RESUMEN

El desarrollo y lanzamiento de la primera vacuna recombinante en una subunidad contra

un parásito no ha sido un proceso suave y fácil. Muchas durezas significativas han
tenido que cruzarse en aras de hacer el proceso un éxito. Hay algunos mensajes muy
importantes en esta cola para otros que consideren desarrollar tales productos para
humanos o animales. Este es el caso particular de las vacunas que confían en una
respuesta de anticuerpos alta y persistente para su eficacia.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Rand, KN., Moore T., Srishkantha, A. et al., 1989. Clonación y expresión de un

antígeno protectivo de la garrapata del vacuno Bophylus microplus. Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 86:9657-9661.

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recombinante contra Bophylus microplus. Parasitology 110: S43-S50.

https://www.tickgard.com.br/