“Año de la lucha contra la corrupción e impunidad”

UNIVERSIDAD NACIONAL
JORGE BASADRE
GROHMANN

FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL FARMACIA Y
BIOQUÍMICA
PRÁCTICA ° 07

CURSO : BIOTECNOLOGÍA FARMACÉUTICA

TÍTULO : EXTRACCIÓN DEL ADN VEGETAL
GRUPO : MIERCOLES DE11:00 – 1:00 PM
DOCENTE : Q. F. LOURDES LUQUE RAMOS
ALUMNO : JAN CARLOS VILCA ZAVALA
CÓDIGO : 2016 – 125016
TACNA – PERU
2019
PRÁCTICA N° 07 EXTRACCIÓN DE ADN VEGETAL

PRÁCTICA N° 07
EXTRACCIÓN DE ADN VEGETAL

1. INTRODUCCIÓN

El ADN es un ácido nucléico formado por nucleótidos. Cada nucleótido consta de tres
elementos: un azúcar: desoxirribosa en este caso (en el caso de ARN o ácido
ribonucleico, el azúcar que lo forma es una ribosa), un grupo fosfato y una base
nitrogenada. Si la molécula tiene sólo el azúcar unido a la base nitrogenada entonces
se denomina nucleósido.
-EL ADN es la abreviatura del ácido desoxirribonucleico. Constituye el material
genético de los organismos. Es el componente químico primario de los cromosomas y
el material del que los genes están formados.
Actualmente es muy importante el conocimiento del ADN pues permite explicar el
genoma humano. Constituye el material hereditario de un individuo. En él están
escritas las instrucciones que deben seguir las células para construir un organismo y
mantenerlo vivo. Todas las células que forman un individuo contienen una copia
idéntica de ADN. Cada una de ellas, sin embargo, lee una parte de estas
instrucciones y por eso hay células con diferentes formas y funciones. La extracción y
purificación de ácidos nucleicos constituyen la primera etapa de la mayoría de los
estudios de biología molecular y de todas las técnicas de recombinación de ADN.
El ADN vegetal se encuentra en el núcleo celular, específicamente dentro de los
cromosomas, pero también se encuentra en los cloroplastos, ya que este organelos
presenta una molécula de ADN circular y arrollada de tipo procarionte y eso le da
cierta autonomía parcial con respecto al núcleo, es decir puede realizar sus propias
síntesis de proteínas
El ADN de las células vegetal se encuentra dentro del núcleo, pero además tienen
dos orgánulos con su propio material genético* las mitocondrias y los cloroplastos,
ambos tienen una molécula circular de DNA
Tomando en cuenta que el componente de las membranas son los lípidos, se utiliza
detergente para romperlos y permitir la salida del ADN, el papel que juega el alcohol
es para precipitar las proteínas y el ADN se obtiene como una estructura más pura.

2. OBJETIVOS

 Objetivos generales
 Demostrar que las células del plátano y tomate portan ADN.
 Extraer el DNA del plátano y del tomate licuado con agua y obtener la
mayor cantidad posible del ADN de alto peso molecular, libre de proteínas,
carbohidratos y otros inhibidores de enzimas.

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PRÁCTICA N° 07 EXTRACCIÓN DE ADN VEGETAL

 Objetivos específicos
 Identificar la estructura del ADN vegetal.
 Utilizar sencillas técnicas para la extracción de ADN vegetal
 Confirmar su estructura fibrilar, mediante el aspecto que presenta
 Comprender los procedimientos necesarios para extraer ADN de buena
calidad y alta pureza.
 Identificar la composición de los diferentes reactivos usados durante la
práctica, los cuales tienen funciones especiales en la extracción del ADN
vegetal.
 Comprender la aplicación de esta técnica en el ámbito científico, para
resolver problemas de genética.

3. MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES Y EQUIPOS  1 tubo de ensayo sellado que

contenga 95% de etanol o 91%
 1 tazas o vaso de plástico (por de alcohol isopropílico
grupo)  1 conservadora con hielo para
 Licuadora enfriar los tubos con alcohol
 Una cuchara plástica para medir  1 varilla de vidrio o 1 pipeta
y mezclar Pasteur
 2 filtros de papel de café Nº 2
(conos)
 20 ml de agua destilada
 Shampoo de color claro
 Detergente (lavavajillas)
 1 banana
 1 tomate
 5ml de jugo de piña o de papaya.
 Sal de mesa, con o sin Iodo
 1 pipeta de transferencia plástica
o un gotero médico

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PRÁCTICA N° 07 EXTRACCIÓN DE ADN VEGETAL

4. DIAGRAMA DEL FLUJO DEL PROCEDIMIENTO

1. En una licuadora, mezclar una banana por taza de agua destilada (250ml).

2. Licuar por 15-20 segundos, hasta que la solución se mezcle.

3. En una taza, preparar una solución consistente en una cucharadita de té de

shampoo y dos pizcas de sal.

4. Agregar 20 ml (4 cucharaditas) de agua destilada.

5. Disolver la sal y el shampoo revolviendo lentamente con la cuchara de

plástico evitando formar espuma.

6. A la solución preparada en el paso 3, agregar tres cucharaditas de té de la

mezcla de banana del paso 1.

7. Mezclar la solución con la cuchara por 5-10 minutos.

5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1) PROCEDIMIENTO CON EL TOMATE

Preparar una solución de banana procesada con sal, agua destilada y shampoo
(detergente) mediante los siguientes pasos:

1. En una licuadora, mezclar un

tomate por taza de agua destilada
(250ml).
2. Licuar por 15-20 segundos, hasta
que la solución se mezcle.

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PRÁCTICA N° 07 EXTRACCIÓN DE ADN VEGETAL

3. En una taza, preparar una

solución consistente en una
cucharadita de té de shampoo y
dos pizcas de sal.

4. Agregar 20 ml (4 cucharaditas)
de agua destilada.

5. Disolver la sal y el shampoo

revolviendo lentamente con la
cuchara de plástico evitando
formar espuma.

6. A la solución preparada en el
paso 3, agregar tres 7. Mezclar la solución con la
cucharaditas de té de la cuchara por 5-10 minutos.
mezcla de tomate del paso 1.

8. Mientras uno de los miembros del

grupo mezcla la solución de banana, otro
miembro pondrá el filtro Nº 2 de café
dentro de otra taza de plástico. Doblar el
borde del filtro alrededor de la taza para
que el filtro no toque el fondo de la taza.

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PRÁCTICA N° 07 EXTRACCIÓN DE ADN VEGETAL

9. Filtrar la mezcla
vertiéndola dentro del filtro
y dejar que la solución
drene por algunos minutos
hasta que sean 5 ml
aproximadamente de
filtrado para testear.

10. Tomar un tubo de ensayo

con alcohol frío. Para mejores
resultados el alcohol debe estar
tan frío como sea posible.

11. Llenar la pipeta plástica con

la solución de tomare y
agregarla al alcohol. El ADN no
es soluble en alcohol. Cuando el
alcohol se agrega a la mezcla,
los componentes, excepto el
ADN, permanecen en la
solución mientras el ADN
precipita en la capa de alcohol.

12. Dejar la solución reposar por

2 a 3 minutos sin mover. Es
importante no batir el tubo de
ensayo. Se puede observar el
ADN blanco el cual precipita en
la capa de alcohol.

13. Cuando se obtienen buenos resultados, habrá suficiente ADN para levantar
con una varilla de vidrio (el ADN se enrolla a la varilla). O usando una pipeta de
Pasteur que haya sido calentada en la punta para formar un gancho, se puede
recuperar (tomar) algo de ADN. El ADN tiene la apariencia de mucus blanco y fibroso

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PRÁCTICA N° 07 EXTRACCIÓN DE ADN VEGETAL

2) PROCEDIMIENTO CON EL PLÁTANO

Preparar una solución de banana procesada con sal, agua destilada y shampoo
(detergente) mediante los siguientes pasos:

1. En una licuadora,
mezclar una banana por
taza de agua destilada
(250ml).

2. Licuar por 15-20

segundos, hasta que
la solución se
mezcle.

3. En una taza, preparar una solución

consistente en una cucharadita de té de
shampoo y dos pizcas de sal.
4. Agregar 20 ml (4 cucharaditas) de agua
destilada.
5. Disolver la sal y el shampoo revolviendo
lentamente con la cuchara de plástico evitando
formar espuma.

6. A la solución preparada en el
paso 3, agregar tres cucharaditas
de té de la mezcla de banana del
paso 1.
7. Mezclar la solución con la
cuchara por 5-10 minutos.

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PRÁCTICA N° 07 EXTRACCIÓN DE ADN VEGETAL

8. Agregar un 5ml
de jugo de piña o
de papaya

6. A la solución
preparada en el paso 3,
agregar tres
cucharaditas de té de la
mezcla de banana del
paso 1.

7. Mezclar la solución
con la cuchara por 5-10
minutos.

9. Mientras uno de los miembros del grupo mezcla

la solución de banana, otro miembro pondrá el filtro
Nº 2 de café dentro de otra taza de plástico. Doblar
el borde del filtro alrededor de la taza para que el
filtro no toque el fondo de la taza.
10. Filtrar la mezcla vertiéndola dentro del filtro y
dejar que la solución drene por algunos minutos
hasta que sean 5 ml aproximadamente de filtrado
para testear.

11. Tomar un tubo de

ensayo con alcohol frío.
Para mejores resultados
el alcohol debe estar
tan frío como sea
posible.

13. Dejar la solución

reposar por 2 a 3
minutos sin mover. Es
importante no batir el
tubo de ensayo. Se
puede observar el
ADN blanco el cual
precipita en la capa
de alcohol.

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PRÁCTICA N° 07 EXTRACCIÓN DE ADN VEGETAL

14. Cuando se obtienen buenos resultados, habrá suficiente ADN para levantar con una varilla
de vidrio (el ADN se enrolla a la varilla). O usando una pipeta de Pasteur que haya sido
calentada en la punta para formar un gancho, se puede recuperar (tomar) algo de ADN. El ADN
tiene la apariencia de mucus blanco y fibroso

6. RESULTADOS

1) PROCEDIMIENTO CON EL TOMATE

Se evidencio la presencia de
ADN en el resultado con el
inconveniente de que la
cantidad de ADN era muy
poca.

2) PROCEDIMIENTO CON EL PLÁTANO

Tiene la apariencia de mucus

blanco y fibroso, esa vendría
a ser el ADN, en este caso del
plátano

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PRÁCTICA N° 07 EXTRACCIÓN DE ADN VEGETAL

7. CONCLUSIONES

 La primera práctica en sí salió bien, aunque hay que decir que el ADN del tomate
no se veía muy claramente. Teníamos que agitar el tubo un poco para poderlo
mejor.

 Lo que pudimos deducir es que no se notó claramente por dos factores:

 El licuado no fue el tiempo indicado, y esto ocasionó el rompimiento del ADN.

 El enfriamiento del alcohol fue muy poco, no estaba muy frío.

 La segunda práctica sí se notó un mucus fibroso blanquecino, se evidenció el ADN

del plátano.

8. CUESTIONARIO

1. ¿Para qué se le agrega el champo al plátano licuado con agua?

Cada célula está rodeada por la membrana celular.

El ADN se encuentra dentro del núcleo dentro de cada célula.

Para ver al ADN tienes que romper estas dos membranas.
Esto es lo que hacemos con el detergente.
Las moléculas del jabón y de grasa están hechas de dos partes:
La cabeza, Hidrofílica.
Las colas, Hidrofóbas.
La molécula de grasa y jabón se
organizan estructuralmente formando
micelas (burbujas), las cuales tienen las
cabezas hacia afuera (de manera que
estén orientadas hacia el agua) y sus
colas hacia adentro para ocultarse del
agua.

En este experimento, las enzimas que

estamos utilizando provienen del
ablandador de carne.
La membrana celular y nuclear han sido
rotas, al igual que todas las membranas
de los organelos, como las que rodean a
las mitocondrias y cloroplastos.
Entonces ¿qué es lo que queda?

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PRÁCTICA N° 07 EXTRACCIÓN DE ADN VEGETAL

Proteínas
Carbohidratos

ADN

El ADN en el núcleo de la célula está

moldeado, doblado y protegido por proteínas. El ablandador de carne corta las
proteínas separándolas del ADN.

Establecer la relación entre el proceso de extracción y propiedades químico-

físicas del ADN. Hay que proteger el ADN de enzimas que puedan disminuirlo y
para aislarlo hay que hacer que se precipite en alcohol
El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y
precipita en la interface entre el alcohol y el agua.
Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros
componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa. La sal evita
la unión de las proteínas al ADN.

2. ¿Que se logra con la filtración?

Se realiza la filtración para obtener una mezcla más homogénea.

3. ¿Para qué se agrega la sal?

La sal se agrega para separar las histonas del material genético. El cloruro de
sodio ayudar a separar algunas de las proteínas que están unidas al ADN.
También mantiene las proteínas disueltas en la capa acuosa de forma a impedir
que estas precipiten también con el alcohol, junto con el ADN. Adicionalmente, los
cationes sodio (Na+) contrarrestan las cargas negativas de los fosfatos del ADN.

4. ¿Porque se agrega alcohol frio??

El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solución, donde puede ser visto.

Ademas de permitirnos ver el ADN, el alcohol separara el ADN de otros
componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.
Cuando el ADN se separa de la solución acuosa, tiende agruparse, lo que hace
que sea visible. Esto provoca el desenrrollamiento del ADN y que suba hacia la
parte más alta del recipiente, ya que el alcohol es menos denso que el agua.

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PRÁCTICA N° 07 EXTRACCIÓN DE ADN VEGETAL

9. BIBLIOGRAFÍA

 www.porquebiotecnologia.com.ar/adc/uploads/pdf/1Extraccion_ADN_vegetal.pdf
 https://prezi.com/cf-ls25genuq/extraccion-de-adn-vegetal/
 www.madrimasd.org/experimentawiki/feria/Extracción_de_ADN_de_tejidos_vegeta
les
 http://html.rincondelvago.com/extraccion-del-adn-de-una-cebolla.html
 http://centros5.pntic.mec.es/ies.victoria.kent/Rincon-C/Practica/PR-5.htm
 http://www.joseacortes.com/practicas/extraccionADN.htm
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 http://www.joseacortes.com/practicas/extraccionADN.htm
 https://www.todamateria.com/extraccion-adn-experimento/
 http://www.cicloanatomia.com/extraccion-adn-celulas-vegetales/


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