CAPACIDAD ANTIOXIDANTE DE LA FRUTA DEL MANGO (MANGIFERA INDICA).

UN ESTUDIO ELECTROQUÍMICO COMO UNA APROXIMACIÓN A LOS

MÉTODOS ESPECTROFOTOMÉTRICOS.

RESUMEN

La capacidad antioxidante en mango (pulpa, cáscara y semillas) se midió utilizando

métodos espectrofotométricos y electroquímicas con el fin de hacer que los métodos
tradicionales comparables con los electroquímicos, utilizando estándares de
referencia de ácido gálico y Trolox. ABTS, DPPH, polifenoles totales, y el índice
electroquímica se evaluaron. Con el fin de presentar los resultados electroquímicas de una
manera más comparable, la carga voltamétrica (utilizando Di ff Se utilizó voltametría de
pulso diferencial). Los métodos espectrofotométricos permitieron determinar la diferencia
en el contenido de metabolitos con capacidad antioxidante, excepto en la cáscara y la
semilla, mientras que el método electroquímico separado los tres extractos y no es un ff
ected por interferencias. Los métodos espectrofotométricos presentan una buena
correlación con los métodos electroquímicos, usando los mismos estándares de
referencia, por lo tanto, una mejor comparación entre los métodos es posible.

INTRODUCCION

La determinación de la capacidad antioxidante en frutas, verduras y bebidas para su aplicación

potencial como alimentos funcionales que complementan la dieta normal es un análisis de interés
para la industria alimentaria ( Bigliardi y Galati, 2013; Pradeep y Guha, 2011 ). La capacidad
antioxidante se determina habitualmente utilizando métodos basados en la captura radical sintético y
monitorización espectrofotométrica (UV - Visible) ( Alam, Bristi, y Ra fi quzzaman, 2013; Huang,
Boxin, y Prior, 2005; Oroian y Escriche, 2015 ). Estos métodos se caracterizan por el uso de
reactivos hostiles con el medio ambiente, la necesidad de realizar un tratamiento previo de las
muestras, y los tiempos
de reacción largos.
pretratamiento de la muestra ( Hoyos-Arbeláez, Vázquez, y Contreras-Calderón, 2017; Lino et al.,
2014 ). El concepto de índice electroquímica (EI) era fi RST propuesto por el grupo Escarpa (
Blasco, González, y Escarpa, 2004; Escarpa de 2012 ), Teniendo en cuenta los parámetros de
voltametría: el potencial de pico anódico (E Pensilvania) y la corriente pico anódico (I Pensilvania)
independientemente. Por lo tanto, ya que el menor es el potencial (parámetro termodinámico),
mayor es la capacidad de donante de electrones; Del mismo modo, cuanto mayor es la corriente
pico (parámetro cinético y concentración), mayor es la velocidad de transferencia de electrones y /
o el número de especies electroactivas ( Makhotkina y Kilmartin, 2009 ). La determinación de la IE
se basa en la medición de la corriente y el potencial de cada pico anódico en un di ff voltametría de
pulso diferencial, y realizar una suma de la relación I / E usando la siguiente ecuación Otra
desventaja que debe ser tomado en cuenta, es la interferencia de las sustancias que pueden
reducir los compuestos cromogénicos, lo que conduce a una sobreestimación de la
capacidad antioxidante que puede una ff ect los resultados ( Escarpa, 2012; Oliveira-Neto et al,
2016.;

MATERIALES Y METODOS
2.1. Reactivos químicos

2.2'-Azino-bis (3-etilbencenotiazolina6-ácido sulfónico) (ABTS), 6Hidroxi-2,5,7,8-

tetrametilcroman-2-carboxílico (Trolox), 1,1difenil-2-picrilhidrazilo (DPPH) fueron comprados
de Sigma-Aldrich. El reactivo de Folin-Ciocalteu se adquirió de Merck, ácido gálico (GA) y
peroxodisulfato de potasio fueron PANREAC, carbonato de sodio, ácido acético, ácido
bórico, ácido fosfórico, metanol, acetona y otros reactivos utilizados fueron de calidad
analítica.

2.2. Muestras de fruta

Las frutas de mango (Mangifera indica L. cv. Hilacha) en la maduración de la comida se

compraron en un mercado local, se enjuagaron con agua corriente. Se tomaron al azar 50
unidades de mango y se separaron la pulpa, la cáscara y la semilla para cada una. El
mango se combinó y homogeneizó manualmente y se sometió a procesos de secado. Las
muestras de pulpa y cáscara se liofilizaron (LABCONCO, FreeZone 6 Plus, a 0.140 mBar, -
85 ° C durante 72 h) con fines de conservación. Las muestras de semillas (endocarpio y
grano) se secaron a 65 ° C durante la noche y se trituraron utilizando un mezclador Oster.
Las muestras secas se almacenaron en un desecador protegido de la luz hasta que se llevó
a cabo la extracción.

2.3. Extracto de preparación

Los diferentes extractos (pulpa, cáscara y semilla) se obtuvieron utilizando el método

descrito por Contreras-Calderón, Calderón-Jaimes, Guerra Hernández y García-Villanova
(2011) con leves modificaciones. Se colocó 1 g de cada muestra en un tubo de centrífuga
tapado y se agregaron 8 ml de metanol ácido-agua (50:50, v / v pH 2), después de lo cual el
tubo se agitó en vórtice durante 1 minuto en una atmósfera normal (Vortex V1 plus, BOECO)
y sonicados (Ultrasonido ELMA E30H) durante 15 minutos a temperatura ambiente. El tubo
se centrifugó luego a 6000 RPM (Hettchin Zentrifugen, EBA 20) durante 15 minutos y se
recuperó el sobrenadante. Este procedimiento se repitió 3 veces. Después de eso, se
agregaron 8 ml de acetona-agua (70:30) al residuo, seguido de agitación, sonicación y
centrifugación. Este procedimiento también se repitió 3 veces. Los sobrenadantes se
combinaron y se transfirieron a un caudal volumétrico de 50 ml, y se añadió agua de mili-Q
para obtener un volumen final de 50 ml. Los extractos se almacenaron a -20 ° C.

2.4. Ensayo ABTS

El ensayo ABTS se realizó siguiendo a Re et al. (1999). Se mezclaron 100 μl de la muestra

de prueba, diluida 1:10, 1:60 y 1:90 para pulpa, cáscara y extracto de semilla
respectivamente con agua milli-Q o Trolox standard con 1 mL de solución ABTS +% y se
incubaron a 30 ° C. C / 30min. Lecturas de absorbancia a 730 nm (UV / VIS-Genesys 10S).
Se usaron soluciones acuosas de concentraciones de Trolox (entre 0 y 200 µM) para la
calibración. Los resultados se expresaron como micromoles de equivalentes de Trolox (TE)
por gramo de peso seco (μmol de TE / g DW).

2.5. Ensayo DPPH

El ensayo DPPH se realizó siguiendo Alam et al. (2013) con una ligera modi fi cación. Se
mezclaron 100 μl de la muestra de prueba con 500 μl de metanol y 200 μl de solución de
DPPH (0,5 mM) y se mantuvieron durante 30 min a temperatura ambiente en la oscuridad.
Se tomaron lecturas de absorbancia a 517 nm (UV / VIS-Genesys 10S). Se usaron
soluciones acuosas de concentraciones de Trolox (entre 0 y 500 µM) para la calibración. Los
resultados se expresaron como μmol de TEs / gDW.

2.6. Fenolicos totales (TP)

El contenido fenólico total se determinó utilizando el ensayo de Folin-Ciocalteau (Contreras-

Calderón et al., 2016) con una ligera modificación. Se mezclaron 20 μl de la muestra de
prueba, diluida 1: 2 para la cáscara y el extracto de semilla con mili-Qwater, o el ácido
metálico (GA) estándar con 1580 μl de agua, 100 μl de reactivo de Folin-Ciocalteu y 300 μl
de 20% de solución de carbonato de sodio. La mezcla se agitó y se mantuvo durante 60
minutos a temperatura ambiente en la oscuridad. La absorbancia se midió a 725 nm frente al
blanco (UV / VIS-Genesys 10S). Se usaron soluciones acuosas de GA (entre 0 y 500 ppm)
para la calibración. Los resultados se expresaron como mg de equivalentes de GA (GAE)
por g de peso seco (mg de GAE / gDW).

2.7. Método electroquímico

Los experimentos electroquímicos se llevaron a cabo utilizando un potenciostato Autolab

PGSTAT 101 controlado por el software Nova 1.11 (Metrohm, Países Bajos). Una celda de
con fi guración de tres electrodos convencional.
J. Hoyos-Arbeláez et al. Química de alimentos 266 (2018) 435–440
436
se usó, que incluye un electrodo de carbono vítreo (GCE) como electrodo de trabajo, un Ag |
AgCl | KClsat como un electrodo de referencia y un cable Pt como electrodo contador. Se
utilizó la voltimetría de pulso diferencial (DPV) para calcular la IE para cada muestra. Los
GCE se pulieron mecánicamente utilizando polvo de alúmina (1 µm, 0,3 µm y 0,05 µm)
durante 1 minuto cada uno, y luego se enjuagaron con abundante agua desionizada para
eliminar cualquier residuo de alúmina. Finalmente, el electrodo se activó por voltametría
cíclica entre −0.3V y 1.0V (vs Ag / AgCl) hasta que se obtuvo una respuesta estable. La
velocidad de barrido utilizada fue de 100 mV.s − 1, en el tampón Britton-Robinson (BRB)
0.04M a pH 5. Para experimentos electroquímicos, los extractos se diluyeron en BRB para
alcanzar la proporción 2: 3 (extracto: bu ff er) mL (Lino et al., 2014). Para los voltamogramas
obtenidos, la línea de base se corrigió utilizando el algoritmo de "media móvil" disponible en
el software Nova 1.11. Después de corregir la línea de base, se llevó a cabo la
determinación de la carga voltamétrica (Q). Los voltamogramas Trolox y GA se obtuvieron
haciendo pequeñas adiciones de una solución estándar de concentración conocida a una
celda que contiene BRB 0.04M a pH 5, y luego recalculando la concentración en la celda de
medición.

2.8. análisis estadístico

Todos los ensayos espectrofotométricos de antioxidantes se realizaron 10 veces para cada

extracto, los ensayos electroquímicos se realizaron 6 veces para cada extracto. Los
resultados se expresan como medias ± desviación estándar (DE). Para determinar la
correlación entre los métodos de capacidad antioxidante y el método electroquímico, se
calcularon los coeficientes de correlación de Pearson. Todos los análisis se realizaron
utilizando Statgraphics® Centurion XVI, (Statpoint Technologies, Inc., EE. UU.).

. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

3.1. Determinación espectrofotométrica de la capacidad antioxidante.

La Tabla 1 muestra los resultados de la capacidad antioxidante obtenida por las diferentes
técnicas espectrofotométricas. Se puede observar que, para todos los métodos, existe una
clara tendencia en que el extracto de semilla es el que tiene la mayor capacidad antioxidante,
seguido del extracto de la piel y la pulpa, respectivamente. Una posible explicación para esta
tendencia tendría que considerar el contenido total de fenol en cada extracto, pero esto no
explicaría el comportamiento observado entre la semilla y la cáscara. Se sabe que la cáscara
del mango contiene pigmentos coloreados que pueden interferir con la medición, lo que lleva
a una sobreestimación (Ajila, Bhat y Prasada Rao, 2007; Serna-Cocketal., 2016).

Mientras que en la pulpa se han reportado estos mismos tipos de compuestos además de los
compuestos de carotenoides y ácido ascórbico, por lo que la diferencia observada podría estar
asociada con la concentración de los metabolitos en la semilla, la cáscara y la pulpa Franco,
y Rojano, 2014; Ribeiro & Schieber, 2010). Los valores de capacidad antioxidante obtenidos
en este trabajo están en el rango comparable con otros estudios informados para las mismas
matrices (variedades Haden, Tommy Atkins, Palmer, Ubá y azúcar mango) del estudio que
obtuvieron 0.09–2.08mgGAE / g para la pulpa ( Corrales-Bernal et al., 2014; Ribeiro &
Schieber, 2010; Rocha Ribeiro, Queiroz, Lopes Ribeiro de Queiroz, Campos, y Pinheiro
Sant'Ana, 2007). Sin embargo, son diferentes de aquellos que reportan valores de
82.54mgGAE / g para semilla de mango (Torres-León et al., 2016), y 54.6mgGAE / g para
cáscara de mango (Serna-Cock et al., 2016) posiblemente debido a la La variabilidad en la
concentración de los metabolitos en las frutas se ve afectada por factores como el clima, los
fertilizantes, entre otros (Bindi, Fibbi y Miglietta, 2001; Hathout Bassim y Pecket, 1975) o que
los métodos de extracción no fueron los mismos los métodos incluyen extracción asistida por
microondas, extracción con fluidos supercríticos y una mezcla de metanol: agua (60:40; v / v).

3.2. Método electroquímico

La figura 1 muestra los voltamogramas de impulsos diferenciales obtenidos para los diferentes
extractos. En ellos, se pueden observar dos picos de oxidación principales para todos los
extractos (0.445 y 0.550V), que pueden deberse a la oxidación del grupo catecol presente en
muchos de los polifenoles encontrados en las matrices estudiadas. En este sentido, es
interesante considerar la señal de un polifenol utilizado como referencia, el ácido gálico, que
en las condiciones estudiadas presenta una señal típica a 0,450 V (ver Fig. 2A). Esto no se
limita a este grupo funcionalmente solo presente en la matriz estudiada que puede ser oxidada
a tal potencial. Otro aspecto a considerar es que puede haber un efecto sinérgico entre los
metabolitos en el extracto (terpenoides, antioxidantes minerales) que también pueden ser
responsables de las señales observadas, lo que dificulta la asignación particular de cada uno
de los picos. La capacidad antioxidante de un extracto no está dada por la suma de las
capacidades antioxidantes de cada uno de sus componentes. Los compuestos interactúan
entre sí, produciendo efectos sinérgicos o inhibitorios.

En los métodos, observamos que el método electroquímico que utiliza la carga voltamétrica
expresada en unidades equivalentes tiene mayores coeficientes que el método EI. Esto podría
deberse al hecho de que la carga voltamétrica considera la contribución de todos los procesos
de la fauna que se producen en la ventana de análisis, mientras que el EI, como se define en
la definición, solo considera la corriente máxima y el potencial de los picos presentes en el
voltamograma. La buena correlación entre los métodos puede deberse a la similitud en el
mecanismo por el cual se proporciona la reacción, los métodos espectrofotométricos
estudiados se clasifican como transferencia de un solo electrón (SET) (Alam et al., 2013;
Huang et al., 2005) , mientras que la oxidación del grupo catecol y las especies metálicas
oxidables (que son responsables de los principales procesos observados en los
voltamogramas) implica la transferencia de electrones y protones (Timbola, De Souza,
Giacomelli y Spinelli, 2006). Aunque debe tenerse en cuenta que esta comparación es entre
métodos que involucran reacciones en fase homogénea (espectrofotométrica) con un método
que involucra una reacción en fase heterogénea (electroquímica). El último puede verse
influido por la naturaleza del material del electrodo, el mecanismo de reacción, el pH, etc.

4. Conclusiones

La capacidad antioxidante del mango varía de acuerdo con la parte del fruto que se analizó,
al ser mayor la capacidad de la capacidad y la pequeña capacidad de la pulpa. Cuando se
comparan estos métodos de determinación de la situación, se comprueba la situación de la
persona con la que se observa la situación con el método electroquímico. Es importante tener
en cuenta que todos los métodos, tanto espectrofotométricos como electroquímicos, miden o
evalúan diferentes aspectos, aunque se pueden analizar las similitudes entre ellos, las
tendencias y los comportamientos. Aunque la medición de la carga voltamétrica total no es
una determinación selectiva, da una idea de todas las especies oxidables en la superficie del
electrodo en estas condiciones. La similitud obtenida en los estudios confirma el método
electroquímico como un complemento adecuado para determinar la capacidad antioxidante y
su utilidad, al ser un método menos costoso, simple y más rápido, para analizar matrices de
alimentos.