I.

INTRODUCCION
Otro de los pasos para la identificación de las bacterias luego de ser cultivadas y
aisladas (observación morfológica microscópica) es la observación de su
morfología, esto se logra con la ayuda en algunas ocasiones de coloraciones
especiales o en otros casos con el equipo adecuado se puede prescindir de
algunas de estas.

Entonces la morfología microscópica de los microorganismos puede ser

observada a partir de preparados frescos o fijados y teñidos por alguno de los
métodos de ticion conocidos. Hay ocasiones en que es necesario fijar
microorganismos. Durante este proceso se matan y a que se coagula el
protoplasma y se preserva la morfología celular ademas de adheridos a la placa
por la deshidratación del medio que los rodea. El agente fijador mas utilizado es el
calor aunque puede utilizarse alcohol y otros compuestos químicos.

II. OBJETIVOS
● Realizar la tinción Gram de coloración de bacterianas.
● Observar algunas formas bacterianas.
● Observar que coloración se obtuvo para poder identificar si fue gram
positiva o gramnnegativa.
III. MARCO TEÓRICO

TINCIÓN DE GRAM

Tinción de Gram
Es definida como una tinción diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifica a
las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram
positivas.
Fue desarrollada por el científico danés Hans Christian Gram en 1884; hoy en día,
sigue siendo una de las tinciones más utilizadas universalmente debido a lo
económico, sencillo y eficaz que resulta.
Principios
Los principios de la tinción de Gram están basados en las características de la
pared celular de las bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a
cada microorganismo.

Utilidad en el diagnostico presuntivo

Las características fenotípicas que presentan algunas bacterias contribuyen a su
diagnóstico presuntivo:
➢ La observación de cocos Grampositivos dispuestos en racimos sugieren la
presencia de estafilococos.
➢ La disposición de cocos Grampositivos en cadena indica estreptococos.
➢ Diplococos Grampositivos en forma de lanceta o con extremos alargados son
característicos de S. pneumoniae cuando se observan en esputos.
➢ Diplococos Gram negativos arriñonados o reniformes son característicos de las
especies de Neisseria.
➢ Bacilos Grampositivos ordenados en letras chinas o empalizadas son típicos del
Corynebacterim.

IV. PARTE EXPERIMENTAL

4.1 EQUIPOS Y MATERIALES
● Portaobjetos.
● Mechero Bunsen.
● Asa de siembra.
● Tubos con cultivos de bacterias Gram-positivas y Gram-negativas.
● Cubetas de tinción o similar.
● Colorantes para las tinciones: Cristal violeta, Lugol, Alcohol-Acetona (1:1) y
Safranina.
4.2 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. Se prepara el frotis, se seca y se fija.

2. Se cubre con cristal violeta durante un minuto.

3. Lavar suavemente con agua destilada para eliminar el exceso de colorante.

 4. Se traza con lugol un minuto. El lugol actúa como mordiente aumentando la
afinidad del colorante por la bacteria.

5. Lavar con agua el exceso de lugol.

6. Se gotea alcohol-acetona de forma continua hasta que la preparación deje

de perder color y se lava enseguida con agua abundante.

7. Se cubre la preparación con un colorante de contraste, como la safranina,

durante un minuto.

8. Se lava con agua y se seca al aire, observándose a continuación con el

objetivo de inmersión.

CONCLUSIONES
 ● Se hizo uso de la tinción gram con cristal violeta, luego el lugol para
aumentar la afinidad del colorante, el alcohol-acetona y finalmente la
safranina; todo ello para poder identificar el color de la gram.
● Las formas de las bacterias son diferentes dependiendo de que bacteria se
brindó como muestra.
● Al realizar la prueba de laboratorio siguiendo los pasos de la guía se pudo
observar el tipo de bacteria que se nos dio para nuestro caso fue gam
negativa las dos muestras ya que los resultados de las coloraciones finales
fueron rosa.
V. RECOMENDACIONES

● Trabajar siempre considerando las medidas de higiene y seguridad en el

laboratorio.
● Se puede utilizar otros compuestos quimicos como medio fijador.
VI. BIBLIOGRAFÍA

➢ Luis Esaú López-Jácome, Melissa Hernández-Durán, Claudia Adriana Colín-Castro,

Silvestre Ortega-Peña, Guillermo Cerón-González, Rafael Franco-Cendejas.
(marzo, 2014) Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. Obtenido de
http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf

➢ Revista Portales Médicos (15 de marzo, 2013) Artículo de revisión. La coloración

de gram y su importancia en el diagnóstico microbiológico. Obtenido de
http://www.revista-portalesmedicos.com/revista-medica/coloracion-gramdiagnostico-microbiologico/

VII. ANEXOS

CUESTIONARIO

2. Investigue a qué se debe la afinidad de los colorantes básicos por las bac terias,
y a qué la de los ácidos.

Los colorantes más utilizados son colorantes básicos, la parte que proporciona el
color está cargada positivamente. Se utilizan estos colorantes porque las células
bacterianas están débilmente cargadas en su superficie con cargas negativas. Los
más Los más utilizados son el Cristal Violeta, el Azul de Metileno y la Safranina.
Los Mordientes, como el Lugol, son sustancias que aumentan la afinidad de la
célula por el colorante. Suelen añadirse después del colorante en determinadas
tinciones diferenciales

Permite dividir a las bacterias en grampositivas (violetas) que retienen el colorante

principal tras la decoloración con alcohol o alcohol-acetona y gramnegativas
(rojas) que pierden el colorante principal tras la decoloración por lo que es
necesario aplicar un colorante de contraste para visualizarlas. Esta diferencia de
coloración está basada en la diferencia estructural de la pared. En las
grampositivas el colorante se fija fuertemente al peptidoglicano que lo "retiene" e
impide que "salga" con el decolorante. En las gramnegativas el colorante es
retenido con menos fuerza al ser más delgada la capa de peptidoglicano. Además,
la mayor cantidad de lípidos presentes hace que el colorante se elimine al
solubilizarse los lípidos en el alcohol.

3. ¿Por qué los colorantes negativos no penetran a la bacteria?

La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración se debe a que la
membrana externa de las bacterias gram negativas es soluble en solventes
orgánicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de
peptidoglucano que posee es demasiado delgada como para poder retener el
complejo de cristal violeta/yodo que se formó previamente, y por lo tanto este
complejo se escapa, perdiéndose la coloración azul-violácea.