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Vol. 10, Núm. 1, Oct.-Dic. 2017


pp 5-13
Artículo de revisión

El laboratorio de inmunohematología
Lilia Rodríguez Sánchez*

Introducción control de calidad, asegurar el proceso desde


la obtención de las muestras hasta la emisión
A lo largo de los años el trabajo del laboratorio de resultados.
dentro de los servicios de transfusión ha sufrido Algunos laboratorios cuentan con sistemas
cambios importantes, entre los que se encuen- informáticos que permiten tener trazabilidad y
tran migrar de técnicas manuales a tecnologías reducir al mínimo las fuentes de error.
automatizadas, siendo obligado asegurar el El control de calidad dentro del laboratorio
control del proceso. Asimismo, la demanda en debe llevarse desde la fase preanalítica, analítica
la atención ha ido en aumento, es imperioso hasta la postanalítica.1,2
trabajar bajo estándares de calidad en todos los Etapa preanalítica:3 en esta etapa se incluyen
laboratorios y es necesario contar con sistemas la valoración médica, elaboración de solicitudes
efectivos que permitan gestionar la calidad. al laboratorio, identificación correcta del pacien-
Un punto determinante en la calidad es contar te, etiquetado de tubos y la flebotomía (toma
con personal capacitado y actualizado que sea de muestras). Se han identificado como fuentes
capaz de resolver problemas transfusionales, de error más comunes: datos incompletos o
dilucidar discrepancias en grupos sanguíneos, erróneos en solicitudes, tubos mal etiquetados,
aplicar programas de control de calidad de pro- tubos no adecuados para el estudio, volumen
cesos y analizar resultados que permitan aplicar inadecuado para estudios, entre otros.
una terapia transfusional adecuada y otorgar Las solicitudes de estudios para el laboratorio
el componente idóneo para el beneficio de los de inmunohematología idealmente deben con-
pacientes que atendemos. tener los siguientes datos del paciente: edad,
El presente escrito brinda algunas bases de género, diagnóstico, antecedentes patológicos,
trabajo en el laboratorio de inmunohematología. antecedentes transfusionales, fecha de última
transfusión, si ha presentado reacciones adver-
El control de calidad en el laboratorio sas y en caso de haberse presentado, de qué
de inmunohematología tipo han sido, antecedentes gineco-obstétricos
(mujeres), si hubo antecedentes de enfermedad
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En la normativa nacional se establece que todos
los laboratorios deben aplicar programas de
hemolítica perinatal o del recién nacido (EHPN)
y tratamiento farmacológico recibido.

* Jubilada. Banco Central de Sangre Centro Medico Nacional Siglo XXI. Instituto Mexicano del Seguro Social.

Este artículo puede ser consultado en versión completa en http://www.medigraphic.com/medicinatransfusional/

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Etapa analítica:3 en esta etapa se contempla eritrocitos del paciente deben lavarse per-
todo el procesamiento analítico de las muestras fectamente utilizando solución salina 0.9% o
e implica el control de: solución amortiguadora pH 7. Si se trata de
un paciente recién transfundido considerar
A. Las muestras. que pudieran presentarse dobles pobla-
B. Los reactivos. ciones celulares, si el paciente es un recién
C. Los métodos analíticos. nacido menor de seis meses los anticuerpos
D. Control de material de vidrio (limpieza). son transferidos pasivamente de la madre
al RN, etc. En pruebas de compatibilidad de
A. Las muestras concentrados plaquetarios, sobre todo los
obtenidos por aféresis, la muestra piloto del
La calidad de las muestras puede verse afecta- componente deberá centrifugarse perfecta-
da por las técnicas de extracción, separación, mente con el fin de evitar interferencia por
conservación y del origen. las plaquetas.

• Extracción: la flebotomía debe realizarse de B. Los reactivos


manera adecuada evitando ocasionar he-
mólisis mecánica que crearía confusión en Los reactivos utilizados en el control de calidad
el estudio. interno son:
• Separación y conservación: los tubos de
sangre coagulada deben separarse perfec- 1. Células de fenotipo conocido:
tamente en un lapso no mayor de cuatro
horas para evitar que el complemento se Las células deben inspeccionarse antes de su
degrade; en caso de no trabajarlas el mismo uso, no deben presentar hemólisis, cambio de
día el suero y/o plasma deben conservarse color, autoaglutinación, contaminación bacte-
en temperatura de congelación (-18 oC a -20 riana, coágulos, etc. La concentración es muy
o
C) y todas las muestras que contengan eri- importante, ya que dependerá si la prueba se
trocitos deben conservarse en temperatura realiza en tubo (2-4%) o en tarjeta (revisar in-
de refrigeración (de 2 oC a 6 oC); el plasma serto de la técnica). Pueden utilizarse soluciones
puede utilizarse para la investigación de para su conservación, siempre y cuando éstas
anticuerpos fuera del sistema ABO, consi- no alteren o modifiquen la estructura y expre-
derando su afectación al complemento de- sión antigénica.
bido a que algunos anticoagulantes actúan
quelando el calcio, que es necesario para 2. Antisueros:
la fijación del complemento al eritrocito;
algunos anticuerpos como los anti-Duffy o Los criterios y especificaciones que deben
anti-Kidd fijan el complemento. cumplir los reactivos hemoclasificadores se
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• Origen: es importante conocer la procedencia encuentran referenciados en la Farmacopea
de la muestra. Algunas muestras como las de de los Estados Unidos Mexicanos como: origen
sangre de cordón umbilical o con hiperpro- (monoclonales, humanos), código de colores,
teinemia pueden ocasionar que se presente pH, avidez, títulos, potencia, etc. siendo de
una aglutinación debida al medio y no por vital importancia siempre revisar el inserto del
anticuerpos, por lo que en estos casos los reactivo antes de su uso.

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3. Control de calidad de los antisueros: b. Prueba de avidez:4 La avidez es el tiem-


po máximo en segundos (s) que tarda en
Deberá llevarse registro del control interno de reaccionar un anticuerpo con su antígeno
calidad de los reactivos cada día de uso, a ex- correspondiente a temperatura ambiente (de
cepción de la titulación esta prueba se realizará 18 a 22 oC) Para la realización de la prueba
al estreno del lote con una muestra aleatoria. Lo de avidez del anti-D es importante revisar
primero que debe hacerse es revisar el inserto, especificaciones del reactivo, podría ser ne-
fecha de caducidad y número de lote. cesario calentar a 37ºC la placa. Esta prueba
Los parámetros a controlar son: aspecto físico, no aplica a la tecnología en gel (Figura 1).
efectuar prueba de avidez, prueba de especifi- c. Prueba de especificidad:4 Es la característica
cidad, titulación y potencia:4 que presentan los anticuerpos al reaccionar
únicamente con su antígeno específico. Esta
a. Aspecto físico:4 Todos los reactivos que se prueba aplica a los métodos que utilizan
utilicen en el laboratorio deben revisarse tubos y tecnología en gel.
físicamente, no deben presentar hemólisis,
turbidez, precipitados, partículas, formación c. 1 Para reactivos anti-A, B, AB y D
Este documento
de geles es
enelaborado por Medigraphic
el sobrenadante, contaminación
bacteriana o cualquier otra anomalía. En el • Técnica en tubo.
caso de las tarjetas de gel deberá apreciarse
un volumen uniforme en todos los pocillos, Se enfrentan las células A1, A2, B y O si se cuenta
sin gotas de gel en la cámara de reacción, con ellas contra los antisueros anti-A, anti-B,
debe observarse claramente la diferencia anti-A,B y anti-D y control como se muestra en
entre el gel y el sobrenadante, sin cambio el cuadro I.
de coloración y su consistencia debe ser Se colocan células en una concentración de
uniforme, libre de burbujas y/o partículas 2 a 4% y la cantidad de antisuero determinada
extrañas.5 en el inserto.

Avidez

Mezclar
El diámetro de la
Eritrocitos 1 gota eritrocitos mezcla no debe ex-
Al 10% ABO + ceder de 25 mm de
Al 40% (Rh) 1 gota antisuero diámetro

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Leer
Se toma el tiempo desde el
momento de mezclar hasta aglutinación Rotar la placa
el inicio de la aglutinación
de lado a lado
(cronómetro)

Figura 1. Técnica de avidez.

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Y el resultado debe anotarse en cruces. marcas con mismo título y diferentes grados
de aglutinación. En el cuadro II se muestra la
• Técnica en gel, fase sólida o perlas de correspondencia entre los grados de agluti-
vidrio: Deben revisarse las instrucciones del nación y el puntaje. Para el ejemplo mostrado
proveedor. en la figura 2 el puntaje es de 60.

c. 2 Prueba de antiglobulina humana (suero C. Los métodos analíticos


de Coombs)
Los diferentes métodos analíticos que se rea-
Preparar una suspensión de eritrocitos lavados lizan en el laboratorio incluyen aquéllos para
(sensibilizados y no sensibilizados) al 2-4% en determinar grupo ABO y Rh, antígenos eritroci-
solución salina isotónica (técnica en tubo) y/o a tarios (fenotipo) de los diferentes sistemas (Rh/
la concentración que indique la técnica en gel o Hr, Diego, Duffy, Kidd etc.), la investigación de
perlas de vidrio. Realizar la prueba de especi- anticuerpos regulares e irregulares libres en
ficidad enfrentando el suero de Coombs contra suero o plasma así como los unidos al eritrocito
eritrocitos sensibilizados y no sensibilizados (si mediante diferentes técnicas.
se cuenta con ellos), centrifugar, leer y registrar Todas las metodologías6 empleadas se ba-
resultados. Interpretación: aglutinación consti- san en la reacción antígeno-anticuerpo (Ag-Ac)
tuye una prueba positiva. que depende de varios factores: concentra-
Para técnica en tubo se realiza una titulación ciones de células, reactivos, pH, temperatura
mediante diluciones doble seriadas (Figura 2). y tiempo de incubación, centrifugación (ve-
Cada dilución se enfrenta contra eritrocitos locidad y tiempo) y lectura, por lo que todos
sensibilizados y no sensibilizados al 2-4%. Se estos factores deben controlarse para todas
centrifuga, se lee y se registra. Resultado: re- las técnicas.
gistrar la última dilución en donde todavía se La concentración de los reactivos y células es
observa aglutinación y se reporta en título, que importante, por tanto debe revisarse el inserto,
es el recíproco de la dilución, por ejemplo, si la utilizar las células y reactivos a la concentración
dilución es 1/64, el título es 64. recomendada para evitar fenómenos de zona.
La solución salina isotónica debe tener un pH de
d. Potencia:4 Se refiere a la intensidad de aglu- 7 + 0.2, conservarse en condiciones adecuadas
tinación que presenta el antisuero al reac- para evitar modificación de osmolaridad y es ne-
cionar con su antígeno específico. Permite cesario cambiarla cada día de uso. Debe respe-
la comparación de antisueros por lotes o tarse el tiempo de incubación para cada técnica,
ya que puede haber disociación de la reacción
Ag-Ac, pudiendo encontrar resultados falsos
Cuadro I. Control de calidad. negativos. Una fuerza excesiva de centrifugación
puede ocasionar un sobrempaquetamiento de
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Células Anti-A Anti-AB Anti-B Células Anti-D
Control
Rh las células, dificultando la lectura, ocasionando
resultados falsos positivos o el caso contrario,
A1 + + - R1r + - una deficiente centrifugación podría dar un
A2 + + - rr - - resultado falso negativo. En todas las técnicas
B - + +
de tubo para la lectura de la aglutinación debe
O - - -
agitarse suavemente el tubo.

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Las técnicas más empleadas son: Para el control de calidad de las técnicas
puede emplearse un suero humano o un suero
• Técnica salina monoclonal diluido que contenga un anticuer-
• Uso de enzimas po conocido, enfrentarlo contra dos células,
• Técnica de LISS (solución de baja fuerza iónica) una que tenga el antígeno correspondiente
• Otras (heterocigoto) y una negativa. Debe correrse

Cuadro II. Relación entre grados de aglutinación y puntaje.

Lectura Aglutinación Puntos

4+ Total en un solo cúmulo grande 12


3+ Grandes aglomerados con pocos eritrocitos libres 10
2+ Gran cantidad de conglomerados pequeños con número moderado de eritrocitos libres 08
1+ Conglomerados definidos pero finos 05
Graniento (g) Eritrocitos dispersos que pueden contener ocasionalmente algún conglomerado pequeño 02
Neg. Los eritrocitos se mueven libremente. No hay conglomerados visibles 00

Correspondencia entre grados de aglutinación y puntaje.

Realizar diluciones seriadas antisuero con solución salina isotónica (volumen a volumen)

DE
SE
CHAR
1 Vol

Suero 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 El tubo en don-
puro de todavía se
observa agluti-
nación corres-
ponde a la dilu-
Adicionar una gota de la suspensión de eritrocitos correspondientes (de 2 a 4%) ción 1/64, por
mezclar gentilmente y centrifugar (30s a 3400 rpm) y leer lo que el título
es 64.

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4+ 4+ 3+ 2+ 2+ 1+ 1+ Neg. Neg. Neg.

Figura 2. Técnica de titulación.

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en paralelo, utilizando las mismas condiciones Determinación del grupo sanguíneo


de prueba. ABO y Rho (D)
Es importante mencionar que hasta la fecha
no existe una sola técnica que nos asegure en- El grupo sanguíneo ABO es el más importante
contrar 100% de los anticuerpos y todas tienen debido a que existen anticuerpos regulares an-
ciertas limitaciones siendo importante en algunos titéticos (anti-A, anti-B y anti-A,B) que producen
casos aplicar varias técnicas para dilucidar el o hemólisis en caso de existir incompatibilidad.
los anticuerpos presentes. Se realiza lo que se conoce como prueba
directa que es buscar los antígenos eritrocitarios
D. Control de la limpieza utilizando sueros conocidos (anti-A, anti-B, anti-
del material de vidrio D y/o anti-AB) y la prueba inversa que es buscar
anticuerpos utilizando células conocidas.
La limpieza del material que se utiliza para las El segundo grupo sanguíneo en importancia
pruebas del laboratorio de inmunohematología es el Rh y solamente se determina el antígeno
es fundamental, ya que la presencia de residuos D, en este sistema también se encuentran los
de jabón o proteína puede ocasionar resultados antígenos C, c, E se ha descubierto que pueden
falsos negativos. causar aloinmunización, teniendo importancia
Etapa postanalítica: Esta etapa comprende la clínica.
recopilación de resultados, elaboración del repor-
te y entrega de resultados y/o entrega de com- Técnica en tubo
ponentes sanguíneos. Debemos asegurar que los
resultados o componentes lleguen al paciente a Antisueros anti-A, anti-B, anti-AB, anti-D y control
quien se solicitaron los estudios y/o componentes de Rh, la cantidad que se deposita es de acuerdo
y se considera hasta que los componentes son con lo que establece el inserto.
transfundidos (hemovigilancia), los datos conteni- Células del paciente y del donador lavadas
dos en las solicitudes deben ser correctos, número con solución salina 0.9% y resuspendidas a una
de bolsa, nombres del donador y receptor. Si al concentración de 2 a 4%.
transfundir presentó reacción, documentar el tipo,
grado. El laboratorio debe realizar el estudio de la Técnica en tarjeta
misma, por lo que es necesario rescatar la bolsa
del componente transfundido y tomar muestras Se utilizan tarjetas de grupo sanguíneo y la con-
sanguíneas al paciente para llevar a cabo el centración de células se realiza de acuerdo con
protocolo de estudio de reacción transfusional. la técnica; (verificar con el proveedor), algunos
Reportar resultados y éstos deberán integrarse proveedores no incluyen suero anti-AB ni células
en el expediente como antecedente para futuras A2 y O para determinar el grupo sanguíneo.
transfusiones. La dilución de las células se realiza utilizando
los reactivos de la casa comercial.
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Pruebas de hemoclasificación En ambas técnicas se centrifuga y se lee el
y hemocompatibilidad resultado.
Siempre deberá colocarse el autotestigo, gló-
Todos los estudios se realizan de acuerdo con bulos rojos y suero del paciente, debido a que
lo establecido en la NOM 253-SSA1-2012 en podrían existir autoanticuerpos tanto libres como
el apartado 9.5. pegados al eritrocito.

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Para los resultados en tarjeta se clasifican se- lenglicol, solución de baja fuerza iónica pueden
gún el grado de aglutinación como se muestra ser demostrados solamente con la prueba de
en la figura 3. antiglobulina indirecta o suero de Coombs.
Para determinar la expresión débil del antíge- Por ser estas características imprevisibles, para
no D se utiliza la técnica en tubo con un antisuero su demostración la mayor parte de los bancos
anti-D que contenga anticuerpos del tipo IgG, emplean técnicas de rutina combinadas, como
la prueba se incuba por aproximadamente 30 la técnica salina, medio de alta concentración
min en baño María a temperatura de 37 oC y proteica medios enzimáticos y/o antiglobulina
se lleva a fase de Coombs. Un resultado posi- humana.
tivo debe etiquetarse como Rho D débilmente Para el estudio en inmunohematología los
positivo o utilizar anticuerpos específicos contra anticuerpos inmunes son aquéllos producidos
las diferentes clonas del antígeno D para deter- como respuesta a una aloinmunización y pueden
minar las diferentes variantes, la más común es hallarse en pacientes que han tenido transfusiones
el DVI+, algunas tarjetas de gel contienen estos o mujeres que hayan tenido embarazos previos.
anticuerpos específicos. Es importante identificarlos, ya que algunos tienen
importancia clínica, esto es, pueden provocar
Investigación de anticuerpos fuera del reacciones adversas en caso de una transfusión
sistema ABO (anticuerpos irregulares de incompatible (Cuadro III).
importancia clínica)
Técnicas
Se les llama irregulares porque, en contraste con
Para la identificación pueden utilizarse dife-
los anticuerpos del sistema ABO que se encuen-
rentes medios de reacción siempre respetando
tran comúnmente en todos los individuos sanos,
tiempos de incubación y técnicas,7 en el cuadro
estos anticuerpos sólo se observan en algunos
IV se muestra el protocolo que se realiza en el
pacientes o donadores que han sido sensibi-
Banco Central de Sangre CMN SXXI:
lizados. Los anticuerpos irregulares son poco
La mayoría de los anticuerpos inmunes son
frecuentes y pueden hallarse como anticuerpos
del tipo IgG, por lo que la reacción se lleva en
hemolizantes, aglutinantes o sensibilizantes.
dos fases:
Se evidencian a diferentes temperaturas in
vitro y para su observación pueden requerir 1. Una primera fase a temperatura de 37 °C
sustancias que favorezcan su demostración de sensibilización, el anticuerpo se fija a la
como: enzimas o substancias como el polieti- membrana del glóbulo rojo.

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Figura 3.

Grados de aglutinación
en técnica de tarjeta
4+ 3+ 2+ 1+ 0 0 de gel.

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2. La segunda fase de demostración del anti- Pruebas de hemocompatibilidad


cuerpo se realiza utilizando un anticuerpo o pruebas cruzadas
dirigido contra la fracción Fc del anticuerpo
(IgG), que es el suero de Coombs. El objetivo de las pruebas cruzadas de compa-
tibilidad es investigar anticuerpos específicos
Los paneles que se utilizan pueden ser:
activos a 37 oC en el suero del paciente contra
• Para realizar un tamizaje con 2 a 4 células, los eritrocitos del donador y viceversa.
las características de este panel es que sólo La prueba cruzada se divide en tres partes:
se utilizan para saber si hay o no anticuerpos,
no se define una especificidad. • La prueba mayor que contiene el suero del
• Para identificar el anticuerpo en donde se paciente y eritrocitos del donador (D).
utilizan paneles de 6 hasta 16 células. • La prueba menor que contiene el plasma del
donador y los eritrocitos del paciente (R), sólo
Es importante mencionar que en ocasiones en casos de contar con él, esto es porque
deben aplicarse varias técnicas para dilucidar los concentrados ertitrocitarios actualmente
el anticuerpo de que se trate. contienen solución aditiva.
La relación de glóbulos rojos en la mayoría • Y el autotestigo que contiene el suero y eri-
de las técnicas en tubo es 1:2, esto es una gota trocitos del paciente (AT).
de glóbulos rojos por dos gotas de suero.
Una prueba cruzada es compatible cuando no
Interpretación de resultados se observa aglutinación en ninguna de las fases
Si se realiza un tamizaje se reporta positivo o de la prueba, ni hemólisis a 37 oC.
negativo, eso significa que el paciente tiene un
anticuerpo inmune de importancia clínica y éste Prueba cruzada menor
debe identificarse.
Si se identifica el anticuerpo a través del uso La prueba cruzada menor se realiza utilizando
de un panel completo y diferentes técnicas, debe plasma del donador y sirve para investigar
reportarse al médico tratante, en el expediente anticuerpos irregulares presentes en el do-
clínico y preferentemente al paciente, se explicará nador. Debe efectuarse cuando se quieran
la importancia para futuras transfusiones, ya que es transfundir componentes sanguíneos que
obligado transfundir sangre compatible por feno- tengan plasma.
tipo, es decir sangre que no contenga el antígeno Cuando un paciente requiere transfusiones
para evitar reacciones adversas a la transfusión. repetidas, debe obtenerse una nueva muestra

Cuadro III. Clasificación inmunohematológica de Anticuerpos.

Anticuerpos Naturales www.medigraphic.org.mx


Regulares IgM activos de 0 oC-45 oC con importancia clínica, Sistema ABO
Irregulares IgM activos de 18 oC a 22 oC, sin importancia clínica H, Ii, Le(a,b),
MN, A1 natural, E natural
Inmunes IgG activos a 37 oC, con importancia clínica, los antígenos eritrocitarios
Autoinmunes Antisistema Rh-Hr, auto-anti-I, auto-anti P, etcétera
Medicamentos Tipo penicilina, alfametildopa

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Cuadro IV. Técnicas empleadas en BCSCMNSXXI. 2. La evaluación de su efecto. Si éste a pesar de


todo llegara a ser negativo, la comunicación
Técnica 22 oC 37 oC inmediata con el laboratorio debe establecer-
se para dilucidar la causa.
Salina 30-45 min. 45-90 min.
Enzima (deben montarse dos 10-15 min. 10-15 min.
series si se requiere trabajar
Referencias
las dos temperaturas)
LISS No procede 15 min. 1. Norma Oficial Mexicana NOM 253-SSA1-2012. Para la
disposición de sangre humana y sus componentes con fines
terapéuticos.
2. Norma Oficial Mexicana NOM 007-SSA3-2011. Para la
organización y funcionamiento de los laboratorios clínicos.
de su sangre para efectuar la siguiente prueba 3. Rodríguez SL. Guía Rápida de Banco de Sangre. Control de
cruzada, si han transcurrido ± 72 horas después calidad en el laboratorio de Inmunohematología. Editorial
Prado. México 2010.
de la última transfusión. 4. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos. Suplemento
Las pruebas pretransfusionales bajo control para Dispositivos Médicos. 3a. ed. México: 2014
5. Golffed TH. Microtécnica de aglutinación en gel DiaMed,
aseguran la compatibilidad inmunohematoló- Fundamentos y Técnicas básicas. Julio 2014.
gica de la sangre y/o sus fracciones reduciendo 6. Roback JD. Technical manual. 16th. ed. Bethesda, Maryland:
American Association of Blood Banks; 2008.
a un mínimo las reacciones transfusionales 7. González BJ. Técnicas y métodos de laboratorio clínico, 3a.
inmediatas. ed. Disponible en: www.medilibros.com. 2010.
Por su parte el servicio médico y de enfermería
deben controlar que:

Correspondencia:
1. La transfusión se lleve a cabo oportunamente Dra. Lilia Rodríguez Sánchez
al enfermo preciso con la técnica adecuada. E-mail: liliarodsan12@gmail.com

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