La biomasa y la bioenergía 120 (2019) 257-264

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La biomasa y la bioenergía

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Trabajo de investigación

Biohidrógeno la producción de las aguas residuales de la industria láctea en un anaeróbico

Florida reactor fluidizado-cama

Aline Neves da Silva una , Williane Vieira Macêdo una , Isabel Kimiko Sakamoto segundo ,
Daniela de Los Ángeles Dalmao Pereyra una , Camila Oliveira Mendes una ,
Sandra Imaculada Maintinguer segundo , Roberto Augusto Ca ff Aro Filho una ,
Marcia Helena Zamariolli Damianovic do , María Bernadete Amancio Varesche segundo ,
Eduardo Lucena Cavalcante de Amorim una , *
una Centro de Tecnología de la Universidad Federal de Alagoas, Av. Lourival Melo Mota, s / n, Ciudad Universitaria, CEP 57072-900, Maceió, AL, Brasil
segundo Universidad Paulista Julio de Mesquita Filho, Prof. Calle Francisco Degni, 55, Quitandinha, CEP 14800-900, Araraquara, SP, Brasil
do Universidad de S una o Paulo, Av. jo una O Dagnone, 1100, Jardim de Santa Angelina, CEP 13563-120, S una o Carlos, SP, Brasil

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO RESUMEN

palabras clave: El presente estudio evaluó la en Florida influencia de velocidad de carga orgánica en la producción de biohidrógeno de aguas residuales lácteas en un anaerobio Florida
La digestión anaerobia de reactor fluidizado-cama inoculado por fermentación natural de las aguas residuales utilizada durante el período de funcionamiento. El material de soporte para la
hidrógeno Dairy producción de adhesión de biomasa fue triturado de neumáticos. El reactor tenía un volumen de trabajo de 908,4 cm 3. Biohidrógeno producción se evaluó utilizando tres di ff tasas
aguas residuales
Erent orgánicos de carga (OLR) de
28,7 kgDQO m - ³d - 1, 53,2 kgDQO m - ³d - 1 e 101,7 kgDQO m - ³d - 1 correspondiente al tiempo de retención hidráulico (HRT) de 8 h (2,7 L d - 1), 6 h (3,6 L
d - 1) y 4 h (5,4 L d - 1), respectivamente. El rendimiento de hidrógeno disminuyó al aumentar la velocidad de carga orgánica (OLR) de 2,56 ± 0,62
mol H 2 hidratos de carbono mol - 1 a 0,95 ± 0,28 moles H 2 hidratos de carbono mol - 1 como el OLR aumentó de 28,65 m kgDQO - ³d - 1 a 95,76 m
kgDQO - ³d - 1. El contenido de hidrógeno en el biogás (volumen de H 2 / volumen de biogás) producido y la producción volumétrica más alta fueron
respectivamente 35,72 ± 9,43% y 0,80 ± 0,21 LH 2 h - 1 L - 1 obtenido cuando el OLR era 53,25 ± 7,81 kgDQO m - ³d - 1. Los principales metabolitos
producidos fueron ácido acético (67,15% -87,42%) y etanol (6,01% -

13,09%). El aumento de la OLR aplicada también causó un aumento de la diversidad bacteriana como se evidencia por el valor más alto del
índice de Shannon-Wiener (2.811) que corresponde a la fase operativa de la más alta OLR (95,76 ± 29,10 kgDQO m - ³d - 1).

1. Introducción
La producción lechera es uno de los componentes más importantes de la industria alimentaria
brasileña. La producción de leche en el país ha crecido de manera constante de 15,6 mil millones de
litros en 1993 a 30.7 mil millones en 2010, lo que representa un aumento del 96% [ 1 ]. La descarga de
e industrial ffl uents es uno de los mayores impactos ambientales de la industria láctea, y tanto la
calidad y cantidad de esta atención mérito de aguas residuales. De acuerdo a [ 2 ]; la industria lechera
produce 0,2 - 10,0 litros de correo ffl uente por litro de leche procesada.
varios di ff Erent métodos se han estudiado para el tratamiento de productos lácteos e ffl uente,
tales como el tratamiento biológico [ 3 - 6 ], Electrocoagulación [ 7 ], Coagulación [ 8 ], procesos de
oxidación avanzada [ 9 , 10 ], Ultra fi filtración y nano fi filtración [ 11 ], otros. tratamiento biológico
anaeróbico
métodos han demostrado ser una alternativa atractiva debido a la baja necesidad de energía
requerida por el proceso de producción y menor lodos [ 9 ]. Además, estos procesos anaeróbicos
generan subproductos de mayor interés para este tipo de tratamiento, tal como ácidos orgánicos
(acetato, butirato, propionato, entre otras) que pueden utilizarse para la producción de biogás:
hidrógeno, durante la etapa acidogénica de anaeróbico la digestión, y metano durante la
metanogénesis.
De acuerdo [ 12 ]; las aguas residuales y subproductos de la industria láctea, ricos en lactosa,
representan una fuente potencial de sustrato para la producción de gas hidrógeno. En teoría, cuando
el acetato es el principal metabolito producido (Ec. (1)) el rendimiento máximo molar de hidrógeno
(HMY) a partir de fermentación de la lactosa es 8 mol H 2 mol de lactosa - 1, mientras que en la
fermentación por vía butírico (Ecuación (2 )), Un HMY de 4 mol H 2
lactosa mol - 1 se espera. Además, [ 12 ] Concluyó que la HMY

* Autor correspondiente.

Dirección de correo electrónico: eduardo.lucena@ctec.ufal.br (ELCD Amorim).

https://doi.org/10.1016/j.biombioe.2018.11.025
Recibido el 28 de julio de de 2018; Recibido en forma 31 de octubre 2018 revisado; Aceptado el 20 de noviembre de 2,018 mil

Disponible en línea el 29 de noviembre de 2018 0.961 a 9.534 / ©

2018 Publicado por Elsevier Ltd.
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debe ser inferior si se producen también otros metabolitos tales como el ácido láctico, etanol, butanol,
o acetona. do 12 H 22 O 11 + 5H 2 O → 4 canales 3 COOH + 4CO 2 + 8H 2
(1)
importar. A pesar de la disponibilidad de hidratos de carbono en los productos lácteos e ffl uente, estas
sustancias están en formas más complejas que requieren un período hidrolítica más tiempo, lo que no
sería favorable debido a la corta HRT aplicada en el experimento.

do 12 H 22 O 11 + H 2 O → 2CH 3 CH 2 CH 2 COOH + 4CO 2 + 4H 2 (2) Las aguas residuales de productos lácteos se recogió tres veces durante todo el período de
funcionamiento del reactor; la caracterización de la e ffl uente mostró significación fi la variabilidad entre
La producción de hidrógeno a partir de aguas residuales lácteas real puede estar en Florida influido
las muestras no puede. Esta variabilidad puede estar asociada con los productos lácteos (leche,
por las altas concentraciones de grasas y aceites por lo general presentes en este tipo de e ffl uente.
mantequilla, queso, yogur y otros) que genera di ff Erent correo ffl uents. Las principales características
La tasa de conversión de sustrato puede estar limitado por la reducción del transporte de sustratos
de las aguas residuales recogidas fueron pH en el intervalo de 0,80 - 12,28; concentración de
solubles y no complejos a las células microbianas; por lo tanto, hidrolíticas pre-tratamientos para
carbohidratos de 1738.3mg L - 1 - L 4750.4mg - 1; DQO que van desde 8121.3mg L - 1 L a 15441.1mg - 1; sólidos
romper estos compuestos en sustancias no complejo puede mejorar la producción de hidrógeno [ 13 ].
volátiles entre
Además de los tratamientos hidrolíticos, un digiere más fácilmente sustrato tal como glucosa se
puede añadir al proceso hasta que el reactor alcanza el estado estacionario. Se han realizado
L 260.0mg - 1 - L 707.0mg - 1; proteínas de 250.0mg L - 1 - 590 mg L - 1;
muchos estudios para evaluar la producción fermentativa de hidrógeno a partir de agua residual
y las grasas que van desde 90.0mg L - 1 L a 550 mg - 1. El e ffl uente se almacenó a - 20 ° C después de la
relacionado con la industria láctea. Sin embargo, este asunto sigue faltando en algunos parámetros
recogida. La variabilidad de este tipo de correo ffl uente se atribuye a los hechos de que varios productos a
importantes como la temperatura ideal y tiempo de retención hidráulica para el tratamiento de bienes
base de leche se producen en las industrias de productos lácteos y el agua residual generada durante el
e lácteos ffl uente en sistemas continuos. La mayoría de las investigaciones usan suero de queso
proceso incluye todos los pasos de producción tales como la higienización, calentamiento, enfriamiento y
como un sustrato para la producción de hidrógeno [ 14 - 17 ] O lactosa aislado [ 12 , 18 , 19 ]. El suero de
queso es un subproducto importante generado durante la producción de queso y se compone
Florida oor lavado [ 31 , 32 ].
principalmente de azúcares (lactosa, 70 - 72% de extracto seco), proteínas (8 - 10%), y sales minerales
(12 - 15% de extracto seco) [ 20 ]; Sin embargo, el uso de aguas residuales lácteas real para la
2.2. Material de apoyo
producción de biohidrógeno es una alternativa más viable y sostenible.

neumáticos triturados se usaron como el material de soporte en el reactor con el fin de facilitar la
inmovilización de biomasa y fijación microbiana. El tamaño de partículas fueron aproximadamente 3 - 5
mm y se sometieron a un tratamiento químico para incrementar su rugosidad de la superficie como
en el trabajo de [ 33 ]. Este tratamiento consistía en sumergir las partículas en ácido clorhídrico (10 M)
Además, reactores discontinuos se han utilizado con mayor frecuencia en los estudios que
durante 30 minutos y posteriormente secado en un horno a 40 ° C. Este procedimiento se realizó tres
utilizan productos lácteos e ffl uents [ 21 , 22 ]. En los modelos hidráulicos semi-continuas, se ha
veces.
informado de los productos lácteos desechos mixtos (DPW). En la obra de [ 23 ]; alrededor del 40 - 50%
(en volumen) de la utilizada e ffl uente era cheddar queso de suero, 50 - 55% de DPW fue el desecho
de la producción de helados, yogur y leche, y alrededor del 5% era las aguas residuales de los
2.3. condiciones de operación AFBR
procesos de limpieza. Para los modelos hidráulicos continuas, el sustrato utilizado principalmente es
queso de suero [ 12 , 13 , 24 - 26 ]. anaeróbica Florida reactores fluidizado-cama (AFBR) se han utilizado
un anaeróbico Florida reactor fluidizado-cama (AFBR) se hizo funcionar para este experimento.
con di ff sustratos Erent para la producción biológica de hidrógeno [ 27 , 28 ].) y que proporcionan
Tenía 110,0 cm de altura, 4,0 cm de diámetro interno, y
resultados que demuestran que para ser una alternativa interesante para la producción de
908,4 cm³ de volumen de trabajo. Era fi llena de material de apoyo de hasta 40 cm de su altura total.
bioenergía. De acuerdo a [ 29 ]; anaeróbica Florida reactor fluidizado-cama sistemas (AFBR) han sido
Durante el funcionamiento, la altura del lecho varió entre 34 y 48 cm. Esta variación se atribuye a la
ampliamente utilizados para investigar el tratamiento de aguas residuales agroindustriales que
biomasa de adhesión al material de soporte, aumentando su densidad (sedimentación), y para el
contienen sacarosa, glucosa, xilosa, celulosa y polisacáridos alineado a la producción de gas
pulso de recirculación (de expansión). El experimento se llevó a cabo a temperatura ambiente con el
biohidrógeno. Este reactor con fi configuración es adecuada para el tratamiento de aguas residuales y
objetivo de incorporar el beneficio climático fi ct de un país tropical como Brasil. La temperatura que el
la producción de bioenergía debido a su alta e FFI eficiencia cuando se somete a un tiempo de
reactor se sometió varió entre 24 ° C y 30 ° C.
retención hidráulico de baja y altas concentraciones de biomasa.

Figura 1 muestra el sistema operativo utilizado para la producción de hidrógeno. La velocidad de

Por lo tanto, este estudio dirigido a evaluar la producción fermentativa de hidrógeno a partir de
aguas residuales lácteas suplementado con glucosa utilizando un anaerobio Florida reactor
fluidizado-cama de mezcla completa y el modelo hidráulico continuo.
2. Procedimiento experimental
2.1. Inóculo y fermentación medio
El reactor se inoculó con la biomasa obtenida por fermentación natural de acuerdo con el
procedimiento adaptado por [ 30 ]. Este procedimiento consiste en dejar el correo ffl uente a
temperatura ambiente durante 48 h para favorecer la fermentación y el crecimiento microbiano de las
poblaciones bacterianas que ya están presentes en el agua residual. Más tarde, el fermentado correo ffl
uente se bombeó en el reactor y se recircula durante 48 h. Durante la recirculación, no se alimentó el
reactor.
El agua residual se usa como sustrato para la producción fermentativa de H 2 era el correo ffl uente
de una granja industria láctea local situado en Palmeira dos Índios - AL - Brasil (9 ° 26 ' 5.4 ” S 36 ° 36 '
22.7 ” W), y suplementado con glucosa (2 g L - 1). La adición de glucosa se utilizó la intención de
alcanzar más rápido el proceso de estabilización de los microorganismos mediante el aumento de la
disponibilidad de no complejo orgánico disuelto
recirculación inóculo se determinó que era 30% mayor que el mínimo Florida velocidad de
fluidización del material de apoyo (neumático triturado) (1,18 cm s - 1 - [ 33 ].
El biorreactor fue operado durante 83 días en el que di período de tres ff Se aplicaron las tasas
de carga orgánicos Erent (OLR). Esas etapas eran di ff erentiated aumentando la OLR de 28,65 m
kgDQO - d ³ - 1 a
53,2 kgDQO m - d ³ - 1 y fi nalmente a 95,8 kgDQO m - ³ re - 1. La variación de la OLR se gestiona a través
del tiempo de retención hidráulico (HRT), que disminuyó de 8 h (fase 1) a 6 h (fase 2) y luego a 4 h
(fase 3). De acuerdo a [ 34 ]; cuando se alcanzó un estado estacionario (basado en constante H 2 tasa
de producción con una variación dentro de 5 - 10% para 5 - 10 días), la HRT se redujo progresivamente
de 8 a 4 h. Estos HRT se eligieron basándose en la HRT estudiado en la literatura para experimentos
similares, tales como [ 34 ]. Este parámetro se ajustó mediante la regulación de la Florida velocidad de
flujo en el que el agua residual entró en el reactor.
2.4. Análisis químico
La producción de hidrógeno se controló mediante cromatografía de gases (Shimadzu GC-2010
Plus) equipado con un detector de conductividad térmica
(TCD) (230 ° C) y # columna 1010 PARCELA Carboxen
(30m x 0,53 mm). Con el fin de recoger por separado los productos gaseosos y solubles, el e ffl uente
del reactor fue a un gas - separador de líquido

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Y Silva et al. La biomasa y la bioenergía 120 (2019) 257-264

DQO productos =
mmol ACET
. mgCOD
una ( 1 ) . 64 mmol ACET
.

mmol, pero
. mgCOD
+ bcde ( 1 ) . 160 mmol, pero
.

Prop milimoles
. prop mgCOD
+ ( 1 ) . 112 mmoles .

TACP mmol
. mgCOD
+ ( 1 ) . 256 mmol TACP
.

mmol eth . mgCOD

+ ( 1
) . 96 mmol eth . (3)

donde a, b, c, d y e, son las concentraciones medidas (en mg L - 1) de la acético, butírico, propiónico,

ácido caproico y etanol, respectivamente.

BACALAO
otros = BACALAO
mensured - ( BACALAO
productos + BACALAO
glu cos )
mi (4)

2.6. El análisis de la comunidad microbiana

Se utilizó la (reacción en cadena de la polimerasa La desnaturalización Gradient Gel

Electroforesis) análisis de PCR-DGGE para evaluar la diversidad microbiana en muestras recogidas
en las tres etapas operativas del reactor. Para llevar a cabo estos análisis, se recoge para cada
etapa de una muestra de material de soporte con el fin de analizar la unión microbiana. La extracción
de ADN genómico se realizó en fenol-cloroformo, de acuerdo con el [ 38 ] Protocolo. Los fragmentos
de 16S rRNA fueron ampli fi ed por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) usando los cebadores
968 FGS y 1401 R para el dominio Bacteria [ 39 ]. PCR Ampli fi catiónico se realizó en un ciclador
térmico de DNA (sistema de PCR GeneAmp 2400 ”-

Perkin Elmer Cetus, Norwalk, CT) programado para pre-desnaturalización a 94 ° C durante 7 minutos y
seguido por 35 ciclos de desnaturalización a 94 ° C durante 45 s, hibridación a 56 ° C durante 45 s,
extensión a 72 ° C durante 1min , fi extensión final a 72 ° C durante 10 min, y enfriamiento a 4 ° C.

Figura 1. Descripción esquemática de la anaeróbico Florida reactor de lecho fluidizado (AFBR).

para capturar el CO 2 presente en el biogás en una solución al 50% de NaOH por el equilibrio de
carbono inorgánico. Un medidor de gas (Tipo TG1; Ritter Inc., Alemania) se utilizó para medir la
cantidad de hidrógeno generado [ 27 ]. La evaluación de los ácidos orgánicos y etanol se realizó por
cromatografía, utilizando, respectivamente, éter etílico como el disolvente de extracción y el método
de extracción de espacio de cabeza. En ambos métodos, la determinación se hizo en un Shimadzu
GC-2010 Plus cromatógrafo equipado con un detector de ionización de llama (FID Flame Ionization
Detector) y SUPELCO WAX 10 columna (30 m x 0,25 mm x 0,25 μ m) con hidrógeno como gas
portador [ 35 ]. El pH, DQO, suspendido y análisis de sólidos volátiles se reunieron con el
procedimiento descrito en el Standard Methods (1998), mientras que los hidratos de carbono
consumen se obtuvieron de acuerdo con el procedimiento descrito por [ 36 ]. se controló la
temperatura pH y diario de la habitación, mientras que los otros parámetros se controlaron dos veces
a la semana.
Para el dominio Archaea, también se realizó PCR Ampli fi catión. En este caso se utilizó el 1100
FGC cebadores [ 40 ] Programado en 35 cylcles de desnaturalización a 94 ° C en 5 min,
desnaturalización a 94 ° C durante 1 minuto, hibridación a 55 ° C durante 1 minuto, extensión a 72 °
C durante 1 minuto, fi extensión final a 72 ° C durante 7 min, y enfriamiento a 4 ° C.
La separación de la ampli fi fragmentos de ed de genes por PCR y la desnaturalización Gradient
Gel Electroforesis (DGGE) se llevó a cabo a una temperatura de 60 ° C y el voltaje constante de 75 V
durante 16 h, usando desnaturalizantes concentraciones de gradiente de 65% y 45%.
Coe similitud FFI cientes (SC) se calcularon para el di ff Pro Erent DGGE fi les obtiene durante las
etapas operativas del reactor y se presentaron gráficamente en un dendrograma. estos Coe FFI coeficientes
se calcularon usando la correlación de Pearson con el software BioNumerics.
La evaluación de la diversidad de bacterias en el reactor durante las etapas operativas se

realizó mediante la aplicación del índice de diversidad ShannonWiener (H). Este índice se calcula

según la ecuación (5 ), Donde H es el índice de diversidad y Pi es la probabilidad de la importancia de

las bandas (Pi = Ni No - 1, donde Ni es la altura de un pico individual y N es la suma de la altura de

2.5. balances de masa de electrones todos los picos de la curva densitométrico) [ 41 ]. H = - Σ ( ln Pi (Pi))

Tabla 2 presenta un balance de masa de electrones a fin de determinar la verosimilitud de los

datos obtenidos. En los resultados, se puede observar altos equivalentes de electrones que faltan. La
razón principal de la de fi cit en los balances de masa de electrones puede ser la formación de
metabolitos detectados o la presencia de otros sumideros de electrones alternativos.
Según lo propuesto por [ 37 ]; NCA. (3) y (4 ) Se puede utilizar para calcular la
balance de masa de electrones en el reactor.
La formación de metabolitos di ff Erent de los detectados por pruebas cromatográficas se evaluó
a partir del balance de método de carbono, que es el di ff rencia entre la DQO medidos
experimentalmente y DQO ​teórica basada en metabolitos solubles producidos en el biorreactor
durante la producción de hidrógeno, como se muestra Ecuaciones
(3) y (4) . la DQO productos utilizado en el último término de la Ecuación (4) incluye los metabolitos: ácido
acético, ácido butírico, ácido propiónico, ácido caproico y etanol.
(5)
3. Resultados y discusión
tabla 1 resume los principales resultados obtenidos en este estudio. Los valores medios para
que el pH fue favorable para la producción de hidrógeno durante todas las etapas de funcionamiento
del reactor. La variación del pH fue inversamente proporcional al rendimiento de hidrógeno. Por lo
tanto, cuanto mayor es el pH, menor es el rendimiento de hidrógeno obtenido. Esto se puede ver en tabla
1 , Donde el pH más alto (5,31 ± 2,67) y el rendimiento de hidrógeno más baja (0,95 ± 0,28 moles H 2 hidratos
de carbono mol - 1) se obtuvieron en la misma fase operativa (Fase 03).
Figura 2 muestra el variación de la temperatura que fue de entre 24 ° C

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tabla 1
Resumen de los principales parámetros de funcionamiento evaluadas durante la monitorización reactor en cada fase operativa.

Parámetro fase 01 fase 02 fase 03

OLR aplica (kgDQO m - d ³ - 1) 28,7 ± 8,9 53,2 ± 7,8 95,8 ± 29,1

pH en Florida uente 4,0 ± 0,2 4,0 ± 0,30 5,3 ± 2,7
pH correo ffl uente 3,9 ± 0,8 3,6 ± 0,9 3.7 ± 1.3
Temperatura (° C) 26,3 ± 1,0 26,0 ± 1,1 26,8 ± 1,3
eliminación de la DQO media (%) 37,6 ± 14,9 32,3 ± 20,7 44,9 ± 15,2
H 2 contenido (v% / v) 27,5 ± 8,9 35,7 ± 9,4 25,1 ± 8,8
CH 4 contenido (v% / v) 29,9 ± 10,1 22,2 ± 19,3 27,5 ± 9,8
CO 2 contenido (v% / v) 42,5 ± 7,1 42,0 ± 9,8 47,4 ± 18,6
la producción de hidrógeno volumétrica (LH 2 h - 1 L reactor - 1) 0,40 ± 0,2 0,8 ± 0,2 0,5 ± 0,2
El rendimiento promedio de hidrógeno (mol H 2 mol - 1 carbohidrato) 2,6 ± 0,6 2,0 ± 0,2 1,0 ± 0,1
En ffl concentración de carbohidratos uente (mg L - 1) 3855.2 ± 817.1 4375,2 ± 1684,7 5803,9 ± 4277,5
la conversión media de hidratos de carbono (%) 54,0 ± 9,1 40,0 ± 15,1 36,6 ± 16,2
H C.A/ SMP (%) 67,1 ± 11,5 87,4 ± 1,0 81,9 ± 3,4
H bu / SMP (%) 10,2 ± 11,4 2,4 ± 0,9 2,5 ± 0,1
H Pr / SMP (%) 5,9 ± 0,5 3,5 ± 0,4 4,5 ± 0,01
H gorra/ SMP (%) 3,6 ± 2,8 0,6 ± 0,2 1,2 ± 0,5
EtOH / SMP (%) 13,1 ± 3,2 6,0 ± 0,7 9,91 ± 2,90

Notas: OLR: velocidad de carga orgánica; COD: demanda química de oxígeno; HAc: ácido acético; HBU: ácido butírico; HPr: ácido propiónico; Hcap: ácido caproico; EtOH: etanol; SMP: productos de metabolitos solubles. L reactor: volumen
de trabajo. SMP = H Ac + H Bu + H Pr + H Cap + EtOH; EtOH / SMP, la relación de etanol / SMP molar; H C.A/ SMP: relación de etilo / SMP molar; H bu / SMP: relación de butirato / SMP molar; H Gorra/ SMP: relación molar caproato / SMP.

Tabla 2 distribución subproductos, y el crecimiento bacteriano son todos una ff ected por la temperatura. Además,
balances de masa de electrones (en términos de DQO). la comunidad microbiana en un reactor de producción de hidrógeno por fermentación es también en gran
medida en Florida influenciada por la temperatura. Según Mu et Alabama. ( 2006), H 2 la producción y la
DQO teórica fase 01 fase 02 fase 03
velocidad de degradación del sustrato se puede aumentar a través de la elevación de temperatura de
DQO t ácido acético (mg / L) 280,4 787,9 467,3 funcionamiento a pesar de la operación a altas temperaturas no es favorable para la recuperación de
DQO t butírico (mg / L) 131,8 54.1 35.0
energía. Por lo tanto, por un equilibrio entre H 2 la producción y recuperación de energía, que parece ser
DQO t propiónico (mg / L) 44.5 55.4 0.6
razonable para operar H biológica 2- que producen los reactores a temperaturas ambiente.
DQO t etanol (mg / L) 81.2 81.2 81.2
DQO t ácido caproico (mg / L) 71.0 23.3 25.6
DQO t de hidratos de carbono (mg / L) 1807.7 2784.4 1976.9
DQO t biomasa (mg / L) 893,8 565,4 231,0 Varios estudios se han llevado a cabo y mostró que hay un cierto intervalo de temperaturas
DQO total t (mg / L) 3310.4 4351.6 2817.6
(entre 25 y 60 ° C) en el que una alta capacidad de producción de hidrógeno por bacterias
Código ffl ( mg / L) 4768.5 9339.3 6471.1
fermentativas se puede notar. [ 43 ]. Además de la de Florida influencia en el metabolismo de los
Código ffl - DQO total t (mg / L) 1458.1 4987.6 3653.5
microorganismos, la temperatura tiene una inversa e ff ect de la solubilidad del biogás de la
Notas: COD t demanda química de oxígeno teórico; Código ffl demanda química de oxígeno medido en el fermentación. La interacción entre los microorganismos y el biogás presentes en el reactor será
correo ffl uente. menor que conduce a las rutas desfavorables tales como la metanogénesis y homoacetogenesis
hidrogenotrófica, en el que se consume el hidrógeno producido.

Además, de acuerdo con [ 25 ]; temperaturas más altas proporcionan una mayor transferencia de
gas desde el líquido a la fase de gas ( espacio de cabeza) y una mejora en las tasas de degradación del
sustrato (y por consiguiente en la producción de hidrógeno). Sin embargo, después de exceder una
temperatura óptima que se puede producir la desnaturalización de las enzimas relacionadas con el
proceso de producción de hidrógeno.

[ 23 ] Utilizando aguas residuales lácteas obtiene un aumento en la producción de hidrógeno con

el aumento de la temperatura. Los resultados indicaron un valor de 131.5mL H 2 g-COD remoto - 1 a 60 °
C en comparación con 116.5mL H 2 gDQO remoto - 1 a 40 ° C.

Otro parámetro importante para el rendimiento del reactor es la DQO. La eliminación de la DQO
promedio más alto se alcanzó en la fase 03 (44,95 ± 15,18%). La eliminación de la DQO en la Fase
03 es mayor de lo esperado para las condiciones acidogénicas (un promedio de 30%). Este resultado
puede estar asociada con la generación de metano en la misma fase operativa. Tal eliminación es
similar a la encontrada en la literatura para acidogénesis [ 27 , 44 ]. Además, durante esta etapa el
biogás producido tenían el mayor porcentaje de gas metano (27,53 ± 9,76%) entre las fases
operativas. Por lo tanto, se puede concluir que las actividades metanogénicas no era su FFI cientemente
inhibida en esta etapa de funcionamiento del reactor.

Figura 2. Temperatura en cada fase operativa del reactor.

y 30 ° C durante toda la operación del reactor. La temperatura media en todo el experimento fue de El biogás se componen de hidrógeno (25,08 - 35,72%), carbono
26,5 ± 1,20 ° C. De acuerdo a [ 42 ] Temperatura es uno de los factores importantes que en Florida proceso dióxido (42,04 - 47,39%) y metano (22,24 - 29,94%) en todas las fases experimentales. Los valores
de influencia de la producción de hidrógeno. degradación del sustrato, producción de hidrógeno, respectivos se presentan en tabla 1 . [ 15 ] Evaluado la en Florida influencia de di ff métodos Erent de
pre- inóculo

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Y Silva et al.
tratamiento para la producción de biohidrógeno de las aguas residuales sintético a base de sacarosa.
Los resultados mostraron que los autores fueron capaces de inhibir la producción de metano por
medio de la fermentación natural del medio de alimentación. Sin embargo, en el presente trabajo, la
producción de metano no fue inhibida por esta forma de inoculación que indica la ine FFI deficiencia
de este método. microorganismos metanogénicas pueden sobrevivir a las condiciones adversas
impuestas por este tipo de inoculación, incluso sin la formación de esporas.
El e ffl pH uente del reactor varió entre 3,64 y 3,92 durante todo el experimento. De acuerdo a [ 45 ];
en condiciones extremas de pH microorganismos productores de esporas productores de hidrógeno
sobrevivirían, mientras que los microorganismos productores de metano que no forman esporas
serían eliminados. Sin embargo, esta estrategia no tenía correo ff ect y la producción de metano se
produjeron incluso a muy bajo pH valora lo que es contrario a la literatura [ 46 ]. Vale la pena señalar
que la presencia de metano incluso a pH por debajo de 5,0 se ha reportado en otros estudios que
utilizaron productos lácteos e ffl uente en reactores acidogénicas [ 25 ]. A pesar de que se sabe que la
actividad metanogénicas debe ser inhibida por un pH ligeramente ácido, se han descrito algunos
metanógenos que ser capaz de producir metano incluso a pH 5 [ 47 ].
La conversión media de hidratos de carbono era indirectamente proporcional a la velocidad de
carga orgánica (OLR) aplicada al reactor, lo que indica que una sobrecarga de la materia orgánica es
adversa al rendimiento del reactor con respecto a la conversión de hidratos de carbono. En relación
con el rendimiento de hidrógeno (HY), lo contrario e ff Se observó ect. Se observó que, si bien el
aumento de la OLR, se le ocurrió una signi fi reducción de peralte del HY. En la fase 01, que tenía la
OLR más bajo, se obtuvo el mayor rendimiento (2,56 ± 0,62 mol H 2 hidratos de carbono mol - 1). Esto
se puede atribuir a las sobrecargas resultantes de alta OLR aplica al reactor o limitaciones cinéticas
que podrían haber ocurrido. Este comportamiento fue observado también por [ 28 , 44 ].
[ 48 ] Observó que el rendimiento de hidrógeno varía como una función de la OLR y la mayor HY
se obtuvo con la OLR inferior. . La inversa se observó en [ 15 ] Estudio, en el que el OLR aumentar
tanto la producción de hidrógeno afectado positivamente y el rendimiento, alcanzando valores
máximos de 0,042 ± 0,008 LH 2 h - 1 L - 1 y 0,668 ± 0,002 mol H 2 lactosa mol - 1, respectivamente. los
resultados fueron observados cuando el reactor funciona con la más alta OLR (37 ± 1 kgDQO m - d ³ - 1).
En cuanto el consumo hidratos de carbono en el reactor, la fase 03 fue el uno con el promedio
más alto de hidratos de carbono consumido (3773,20 ± 2407.78mg L - 1).
Eso Vale la pena subrayar ese
L 2.000mg - 1 de la glucosa se añadió a la en Florida uente. La glucosa es un carbohidrato más fácil de
ser consumido después de lactosa por lo que posiblemente se consumió preferentemente. Para
evaluar esta hipótesis, el reactor fue alimentado durante aproximadamente 15 días con agua y
glucosa (2000 mg L - 1) solamente. Durante este periodo, se consume en promedio 800 mg L - 1 de la
glucosa que indica que su consumo no está completamente en el reactor. Por lo tanto, la
concentración reducida de hidratos de carbono era debido en parte al consumo de lactosa.
3.1. El análisis de los metabolitos producidos
Fig. 3 muestra los metabolitos que se producen durante el funcionamiento del reactor. El
porcentaje de los metabolitos presentados se calculó en términos de concentraciones molares. Se
observó la presencia de ácido acético, ácido butírico, ácido propiónico, ácido caproico y etanol; El
ácido acético se encuentra en concentraciones más altas de todos los metabolitos.
TRH y OLR son parámetros importantes que pueden a ff ect las rutas metabólicas de la
producción de hidrógeno [ 49 ]. Esta relación se muestra en
tabla 1 y Fig. 3 , En el que la proporciones de metabolitos di ff Ered entre las tres fases.
Ácidos acético y butírico, considerados indicadores de producción de hidrógeno, presentaron
sus concentraciones más altas en las fases operativas 02 y 01, respectivamente. El ácido propiónico,
que inhibe la producción de hidrógeno mediante el consumo de H 2 en su ruta fermentativa,
261
La biomasa y la bioenergía 120 (2019) 257-264
presentado concentración similar en ambas fases, que van desde 3,49% (Fase 02) y 5,91% (Fase
01) de todos los metabolitos formados.
El porcentaje de etanol producido en las etapas evaluados varía de 6,01% (Fase 02) y 13,09%
(Fase 01). De acuerdo a la reacción de formación de etanol a partir de glucosa, producción de etanol
no tiene directa en Florida influencia en el H 2 producción. [ 50 ] Mostró en su obra una posible ruta de
producción de hidrógeno en la que el hidrógeno y el etanol se producen simultáneamente.
No se observó una relación directa entre el porcentaje de etanol y el rendimiento de hidrógeno
en este estudio, como el porcentaje más alto y más bajo de etanol se encontró tanto en las etapas
que mostraban el rendimiento de hidrógeno más alta.
Vale la pena señalar que la fermentación de las aguas residuales de productos lácteos puede
generar otros metabolitos que no fueron evaluados en este estudio, tal como ácido láctico, lactato,
formiato, y propanol [ 15 , dieciséis , 18 , 19 , 51 ].
3.2. El OLR en Florida influencia en H 2 producción
tabla 1 muestra la variación de la producción de hidrógeno volumétrica en el reactor en las
etapas operacionales. La producción volumétrica media más alta de hidrógeno se encuentra en la
Fase 02, (0,80 LH 2 h L - 1). Es importante saber que mediante la aplicación de la prueba de Kruskal
Wallis se observó estadísticamente di ff grupos Erent para los resultados de la producción de
hidrógeno volumétrica, en otras palabras, las muestras no proceden de poblaciones igualmente
distribuidos y hay una estadísticamente significativa fi no puede di ff rencia entre la producción de
hidrógeno volumétrica obtenida a partir de las fases evaluadas, como se puede ver por los valores
obtenidos en el ensayo (prueba estadística: 11,17; c crítico 2: 10.579) con un signi 5% fi nivel cado.
En relación con el rendimiento de hidrógeno, el valor máximo de 2.56mol H 2 hidratos de carbono
mol - 1 fue obtenido en la Fase 01 con la velocidad de carga orgánica más bajo. Este parámetro
disminuyó cuando el OLR aplica al reactor aumentado.
Según la literatura, los rendimientos molares máximas obtenidas a partir de la fermentación de
la lactosa por acetato y butirato rutas son 8 y 4 mol H 2 lactosa mol - 1, respectivamente [ 51 ]. A partir de
glucosa, el rendimiento teórico por el ácido y ácido butírico rutas acético son, respectivamente, 4 y 2
mol H 2 glucosa mol - 1.
Tanto la fermentación de la lactosa y la glucosa debe ser tomado en consideración en este estudio
debido a que la fi primero es el principal carbohidrato relacionadas con las aguas residuales de productos
lácteos y el segundo fue añadido para complementar el reactor en Florida uente (2 g L - 1).
Dos de los tres parámetros más importantes para la evaluación del funcionamiento del reactor
en la producción de hidrógeno obtuvieron sus mejores resultados en la Fase 02. Esta fase tiene la
tasa de producción de hidrógeno media más alta (0,80 ± 0,21 LH 2 h - 1 L - 1) y el más alto contenido de
hidrógeno en el biogás (35,72 ± 9,43%). Además, esta fase también tuvo el porcentaje más alto de
ácido acético entre las fases analizados (87,42 ± 1,03%). La producción volumétrica obtenida durante
esta fase parece ser mayor que los encontrados en la literatura acerca de estudios que utiliza
reactores en Florida uente relacionados a los productos lácteos (suero de queso, aguas residuales
lácteas general y lactosa). [ 19 ]; por ejemplo, se usa lactosa como sustrato de un reactor discontinuo
para producir hidrógeno y obtenido una tasa de producción de hidrógeno igual a 0,015 LH 2 h - 1 L - 1.
[ dieciséis ] Evaluaron la producción de hidrógeno funcionamiento de un reactor CSTR alimentado
con suero de queso. En este estudio, los autores obtuvieron la producción de hidrógeno máximo de
0,121 ± 0,015 LH 2 h - 1 L - 1. [ 15 ] También se utiliza suero de queso como un sustrato para H 2 producción,
aunque incluya que se utilizó un anaerobio hasta Florida Ay fi reactor fijo-cama. Estos autores
encontraron que el rendimiento máximo de 0.042 LH 2 h - 1 L - 1 cuando el reactor se sometió a la velocidad
de carga orgánica superior (37 ± 1 kgDQO m - d ³ - 1).
Se obtuvo el rendimiento de hidrógeno máximo en la Fase 01 (2,56 ± 0,62 mol H 2 hidratos de
carbono mol - 1). Los resultados de rendimiento en la literatura demostraron una amplia gama de
variación. [ 14 estudio], por ejemplo, que se obtiene un H 2 rendimiento de 2.7mol H 2 lactosa mol - 1 ( 7,89
mmolH 2 g lactosa - 1) en un reactor por lotes que utiliza suero de queso como sustrato. Se obtuvo el
rendimiento de hidrógeno máximo en la Fase 01 (2,56 ± 0,62 mol
Y Silva et al. La biomasa y la bioenergía 120 (2019) 257-264

Fig. 3. metabolitos totales producidos en cada fase operativa del reactor.

Nota: El porcentaje de los metabolitos se calculó en términos de concentraciones molares considerando sólo la producción de etanol, caproico, propiónico, butírico y acético.

H 2 hidratos de carbono mol - 1). Esta fase también tuvo el porcentaje más alto de ácido butírico (10,23 ±
11,45%). Los resultados de rendimiento en la literatura mostraron una variación considerable. [ 14 estudio],
por ejemplo, que se obtiene un H 2
rendimiento de 2.7mol H 2 lactosa mol - 1 ( 7,89 molH 2 g lactosa - 1) en un reactor por lotes que utiliza
suero de queso como sustrato. [ 15 ] Estudio también usó suero de queso como el sustrato y el
rendimiento de hidrógeno máxima fue de
0,668 ± 0,002 molH 2 lactosa mol - 1. [ 12 ], tanto la lactosa y el queso de suero de leche como sustrato
para la producción de hidrógeno en reactores discontinuos y el hidrógeno rendimientos evaluados
fueron 3,6 ± 0,03 molH 2 mol de sustrato - 1

y 3,1 ± 0,04 mol H 2 mol de sustrato - 1, respectivamente.

Por lo tanto, es de hecho que la Fase 02 presenta las condiciones más favorables para la
producción de hidrógeno. A pesar de la mayor rendimiento promedio obtenido en la Fase 01, los
valores de este parámetro presentan una mayor estabilidad en la fase 02, que puede ser asegurada
por el valor de desviación estándar inferior obtenido.

3.3. Balances de Materia de electrones

Tabla 2 muestra significa la DQO teórica de los metabolitos producidos y la DQO teórica de
correo del reactor ffl uente, y la diferencia entre ellos. Se puede observar que el di ff rencia entre la
medida y la DQO teórica de la e ffl uente varió de

L 1458.13mg - 1 ( Fase 01) y L 4987.60mg - 1 ( Fase 02). Esta diferencia se debe probablemente a otros
metabolitos producidos durante la fermentación de las aguas residuales se utiliza como sustrato que
no se mide en este trabajo, incluyendo ácido láctico y propanol.

Además del hecho de que la literatura indica la formación de otros metabolitos, los
cromatogramas obtenidos en los análisis para este estudio alcanzaron un máximo de di ff veces Erent
de los indicados para ácido acético, propiónico y ácido butírico, y etanol. ácido isobutírico, ácido
valérico y isovalérico eran compuestos que podrían ser detectados por los métodos utilizados (éter
etílico como el disolvente de extracción y el método de extracción de espacio de cabeza), así como
acetona, metanol, isobutanol y n-butanol por el método de extracción de espacio de cabeza [ 35 ]. Fig. 4. La desnaturalización Gradient Gel Electroforesis con cebadores a las bacterias de dominio (P-01 a
P-02) y para Archaea de dominio (P '- 01 a P '- 03) con relación a las fases de funcionamiento del reactor.

3.4. El análisis de la comunidad microbiana Fig. 4 que la variación de velocidad de carga orgánica causada cambio en la pro fi bandas LE. Este
cambio se puede observar especialmente en la fase 03, en la que el pro fi Le mostró un di ff composición

Fig. 4 muestra la pro fi les obtiene por análisis de PCR-DGGE utilizando cebadores para las Erent de otras fases, con más pro similares fi les. A medida que aumentaba la OLR hubo un aumento

bacterias y el dominio Archaea para las tres fases operacionales del reactor. en el número de bandas y por lo tanto una mayor diversidad.

Para la evaluación de las poblaciones de bacterias, se puede observar en A dendograma que contiene el Coe similitud FFI coeficientes entre la

262
Y Silva et al.
Fig. 5. Dendrograma de la pro DGGE fi les obtiene en tres fases operativas del reactor.
Pro fi les obtenido por análisis de DGGE para las bacterias de dominio se muestra en
Fig. 5 . Se puede observar un alto grado de similitud entre las fases 01 y 02 con un SC de
aproximadamente 90%. Esto implica que la variación de la OLR de 28,65 ± 8,91 m kgDQO - d ³ - 1 a
53,25 ± 7,81 kgDQO m - ³d - 1 no dio lugar a signi fi cambios de consideración en la comunidad
microbiana presente en el reactor. Mayor variación se obtuvo en la fase 03 (TCO = 95,76 ± 29,10
kgDQO m - d ³ - 1), en el que se obtuvo un SC entre 65 y 70% en comparación con otras fases. Por lo
tanto, el aumento de la OLR una disminución de la H 2 los rendimientos ( tabla 1 Se indujo) y un
aumento en la diversidad bacteriana. Esto se puede atribuir a las condiciones experimentales que
favorecen para otras poblaciones de bacterias adaptadas a alta OLR y probablemente H 2 los
consumidores. Esto un FFI confirmación ha sido probado por el cambio en el índice de
Shannon-Wiener de similitud obtenida en las fases 01, 02 y 03 del reactor a las bacterias de dominio.
Los resultados fueron 2,205, 2,679 y 2,811, respectivamente, con fi mediante tonos que el aumento de
la diversidad microbiana fue directamente proporcional a la alta OLR aplicada al reactor. Sin
embargo, los valores de rendimiento de hidrógeno disminuyeron con el aumento de OLR. Por lo
tanto, en las fases de mayor H 2 los rendimientos se observaron reducciones en la diversidad
bacteriana. Esto también se encontró en los estudios de [ 52 , 53 ]; en la que un rendimiento de
hidrógeno bajo se asoció con una alta diversidad bacteriana.
En cuanto al dominio Archaea, sólo en la fase 03 se observaron unas pocas bandas ( Fig. 4 ), Lo
que indica que las condiciones de funcionamiento - especialmente el aumento de OLR - fueron
capaces de favorecer el crecimiento de arqueas, lo que explica la disminución de la H 2 rendimiento
más probable asociado con el consumo de gas por tales microorganismos.
4. Conclusiones
El rendimiento de la producción de biohidrógeno de aguas residuales lácteas se investigó en el
estudio. La producción máxima de hidrógeno de
0,80 LH 2 h - 1 L - 1 ( Fase 02 y HRT = 6 h) y 2.56mol H 2 hidratos de carbono mol - 1 ( Fase 02 y HRT = 8 h).
La administración de suplementos de glucosa favorece la creación de comunidades bacterianas
productoras de hidrógeno y la mejora de la producción de hidrógeno volumétrico en comparación con
la literatura. Esto sugiere que la disponibilidad de sustratos rápidamente degradables es bene fi cial
para la producción de hidrógeno en los sistemas biológicos el tratamiento de aguas residuales
agroindustriales.
En cuanto a los metabolitos, ácido acético fue la producida la mayor cantidad en todas las fases
de funcionamiento del reactor con un porcentaje entre 65% y 90%.
Se observó reducción de la diversidad de bacterias en la fase operativa con alta H 2 rendimientos.
Las condiciones experimentales - principalmente la disminución OLR - fueron favorables a las
poblaciones bacterianas productores de H 2
y para inhibir los consumidores.
Expresiones de gratitud
Los autores agradecen la fi el apoyo financiero del CNPq.
Notación
abreviaturas
AFBR anaeróbica Florida cama fluidizado reactor DQO
Demanda química de oxígeno, DQO mg L - 1
263
La biomasa y la bioenergía 120 (2019) 257-264
DGGE desnaturalización electroforesis en gel de gradiente de FID
Llama detector de ionización de H
Shannon-Wiener índice de diversidad de HRT
tiempo de retención hidráulico, h HAc
Acético HBU
ácido Butírico ácido
HMY hidrógeno HPr rendimiento molar
EtOH El ácido
propiónico El etanol
OLR velocidad de carga orgánica, kg DQO m - 3 re - 1
PCR Reacción de polimerasa en cadena SC
Coe similitud FFI SMP coeficientes
Soluble Microbiana Productos TCD
detector de conductividad térmica
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